常用培养基配方大全.pdf

常用培养基配方常用培养基配方目目 录：录：01010101 糖发酵管糖发酵管02020202 ONPGONPGONPGONPG 培养基培养基03030303 西蒙氏柠檬酸盐培养基西蒙氏柠檬酸盐培养基04040404 缓冲葡萄糖蛋白胨水缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR(MR(MR(MR 和和 VPVPVPVP 试验用试验用)05050505 克氏柠檬酸盐培养基克氏柠檬酸盐培养基06060606 丙二酸钠培养基丙二酸钠培养基07070707 葡葡糖铵培养基葡葡糖铵培养基08080808 Hugh-LeifsonHugh-LeifsonHugh-LeifsonHugh-Leifson 培养基培养基(O/F(O/F(O/F(O/F 试验用试验用)09090909 马尿酸钠培养基马尿酸钠培养基10101010 营养明胶营养明胶11111111 苯丙氨酸培养基苯丙氨酸培养基12121212 氨基酸脱羧酶试验培养基氨基酸脱羧酶试验培养基13131313 蛋白胨水蛋白胨水(靛基质试验用靛基质试验用)14141414 硫酸亚铁琼脂硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用硫化氢试验用)15151515 尿素琼脂尿素琼脂16161616 氰化钾氰化钾(KCN)(KCN)(KCN)(KCN)培养基培养基17171717 氧化酶试验氧化酶试验18181818 硝酸盐培养基硝酸盐培养基19191919 细胞色素氧化酶试验细胞色素氧化酶试验20202020 过氧化氢酶试验过氧化氢酶试验21212121 过氧化物酶试验过氧化物酶试验22222222 磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液23232323 明胶磷酸盐缓冲液明胶磷酸盐缓冲液24242424 乳酸乳酸-苯酚溶液苯酚溶液25252525 肉浸液肉汤肉浸液肉汤26262626 肉浸液琼脂肉浸液琼脂27272727 牛肉牛肉(或牛心或牛心)消化汤消化汤28282828 血消化汤血消化汤29292929 豆粉琼脂豆粉琼脂30303030 血琼脂血琼脂31313131 营养琼脂营养琼脂32323232 营养肉汤营养肉汤33333333 乳糖胆盐发酵管乳糖胆盐发酵管34343434 乳糖发酵管乳糖发酵管35353535 ECECECEC 肉汤肉汤36363636 缓冲蛋白胨水缓冲蛋白胨水(BP)(BP)(BP)(BP)37373737 氯化镁孔雀绿增菌液氯化镁孔雀绿增菌液(MM)(MM)(MM)(MM)38383838 四硫磺酸钠煌绿增菌液四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)(TTB)(TTB)(TTB)39393939 四硫磺酸钠煌绿增菌液四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法换用方法)40404040 亚硒酸盐胱氨酸增菌液亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)(SC)(SC)(SC)41414141 GNGNGNGN 增菌液增菌液42424242 肠道菌增菌肉汤肠道菌增菌肉汤43434343 亚硫酸铋琼脂亚硫酸铋琼脂(BS)(BS)(BS)(BS)44444444 DHLDHLDHLDHL 琼脂琼脂45454545 HEHEHEHE 琼脂琼脂46464646 SSSSSSSS 琼脂琼脂47474747 WSWSWSWS 琼脂琼脂48484848 麦康凯琼脂麦康凯琼脂49494949 伊红美蓝琼脂伊红美蓝琼脂(EMB)(EMB)(EMB)(EMB)50505050 三糖铁琼脂三糖铁琼脂(TSI)(TSI)(TSI)(TSI)51515151 三糖铁琼脂三糖铁琼脂(换用方法换用方法)52525252 克氏双糖铁琼脂克氏双糖铁琼脂(KI)(KI)(KI)(KI)53535353 克氏双糖铁琼脂克氏双糖铁琼脂(换用方法换用方法)54545454 葡萄糖半固体发酵管葡萄糖半固体发酵管55555555 5%5%5%5%乳糖发酵管乳糖发酵管56565656 CAYECAYECAYECAYE 培养基培养基57575757 HondaHondaHondaHonda 氏产毒肉汤氏产毒肉汤58585858 ElekElekElekElek 氏培养基氏培养基(毒素测定用毒素测定用)59595959 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基60606060 胰蛋白胨水胰蛋白胨水61616161 RustigianRustigianRustigianRustigian 氏尿素培养液氏尿素培养液62626262 氯化钠结晶紫增菌液氯化钠结晶紫增菌液63636363 氯化钠蔗糖琼脂氯化钠蔗糖琼脂64646464 嗜盐菌选择性琼脂嗜盐菌选择性琼脂65656565 3.5%3.5%3.5%3.5%氯化钠三糖铁琼脂氯化钠三糖铁琼脂66666666 氯化钠血琼脂氯化钠血琼脂67676767 3.5%3.5%3.5%3.5%氯化钠生化试验培养基氯化钠生化试验培养基68686868 改良磷酸盐缓冲液改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用小肠结肠炎耶尔森氏菌专用)69696969 CIN-1CIN-1CIN-1CIN-1 培养基培养基70707070 嗜盐性试验培养基嗜盐性试验培养基01 糖发酵管成分:牛肉膏 5g蛋白胨 10g氯化钠 3g磷酸氢二钠(Na2HPO412H2O)2g0.2%滇麝香草酚蓝溶液 12mL蒸馏水 1000mLpH7.4制法:1 葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按 0.5%加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内,121高压灭菌 15min.2 其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶 100mL,121高压灭菌 15min.另将各种糖类分别配好 10%溶液,同时高压灭菌.将 5mL 糖溶液加入于 100mL 培养基内,以无菌操作分装小试管.注:蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌.试验方法:从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于 361培养,一般观察 23d.迟缓反应需观察 1430d.02 ONPG 培养基成分:邻硝基酚-D-半乳糖昔(ONPG)60mg(O-Nitrophenyl-D-galactopyranoside)0.01mol/L 磷酸钠缓冲液(pH7.5)10mL1%蛋白胨水(PH7.5)30mL制法:将 ONPG 溶于缓冲液内,加入蛋白胨水,以过滤法除菌,分装于 10mm75mm 试管,每管 0.5mL,用橡皮塞塞紧.试验方法:自琼脂斜面上挑取培养物 1 满环接种,于 361培养 13h 和 24h 观察结果.如果-半乳糖苷酶产生,则于 13h 变黄色,如无此酶则 24h 不变色.03 西蒙氏柠檬酸盐培养基成分氯化钠 5g硫酸镁(MgSO47H2O)0.2g磷酸二氢铵 1g磷酸氢二钾 1g柠檬酸钠 5g琼脂 20g蒸馏水 1000mL0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40mLpH6.8制法:先将盐类溶解于水内,校正 pH,再加琼脂,加热溶化.然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121高压灭菌 15min.放成斜面.试验方法:挑取少量琼脂培养物接种,于 361培养 4d,每天观察结果.阳性者斜面上有菌落生长,培养基从绿色转为蓝色.04 缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR 和 VP 试验用)成分:磷酸氢二钾 5g多胨 7g葡萄糖 5g蒸馏水 1000mLpH7.0制法:溶化后校正 pH,分装试管,每管 1mL,121高压灭菌 15min.甲基红(MR)试验:自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中,于 361培养 25d,哈夫尼亚菌则应在 2225培养.滴加甲基红试剂一滴,立即观察结果.鲜红色为阳性,黄色为阴性.甲基红试剂配法:10mg 甲基红溶于30mL95%乙醇中,然后加入 20mL 蒸馏水.V-P 试验:用琼脂培养物接种本培养基中,于 361培养 24d.哈夫尼亚菌则应在 2225培养.加入 6%-萘酚-乙醇溶液 0.5mL 和 40%氢氧化钾溶液 0.2mL,充分振摇试管,观察结果.阳性反应立刻或于数分钟内出现红色,如为阴性,应放在 361下培养 4h 再进行观察.05 克氏柠檬酸盐培养基成分:柠檬酸钠 3g葡萄糖 0.2g酵母浸膏 0.5g单盐酸半胱氨酸 0.1g磷酸二氢钾 1g氯化钠 5g0.2%酚红溶液 6mL琼脂 15g蒸馏水 1000mL制法:加热溶解,分装试管,121高压灭菌 15min.放成斜面.试验方法:用琼脂培养物接种整个斜面,在 361培养 7d,每天观察结果.阳性者培养基变为红色.06 丙二酸钠培养基成分:酵母浸膏 1g硫酸铵 2g磷酸氢二钾 0.6g磷酸二氢钾 0.4g氯化钠 2g丙二酸钠 3g0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL蒸馏水 1000mL pH6.8制法:先将酵母浸膏和盐类溶解于水,校正 pH 后再加入指示剂,分装试管,121高压灭菌 15min.试验方法用新鲜的琼脂培养物接种,于 361培养 48h,观察结果.阳性者由绿色变为蓝色.07 葡葡糖铵培养基成分:氯化钠 5g硫酸镁(MgSO47H2O)0.2g磷酸二氢铵 1g磷酸氢二钾 1g葡萄糖 2g琼脂 20g蒸馏水 1000mL0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40mLpH6.8制法:先将盐类和糖溶解于水内,校正 pH,再加琼脂,加热溶化,然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121高压灭菌 15min,放成斜面.试验方法:用接种针轻轻触及培养物的表面,在盐水管内做成极稀的悬液,肉眼观察不见混浊,以每一接种环内含菌数在 20100 之间为宜.将接种环灭菌后挑取菌液接种,同时再以同法接种普通斜面一支作为对照.于 361培养 24h.阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长;阴性者不生长,但在对照培养基上生长良好.如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果.注:容器使用前应用清洁液浸泡.再用清水,蒸馏水冲洗干净,并用新棉花做成棉塞,干热灭菌后使用.如果操作时不注意,有杂质污染时,易造成假阳性的结果.08 Hugh-Leifson 培养基(O/F 试验用)成分:蛋白胨 2g氯化钠 5g磷酸氢二钾 0.3g琼脂 4g葡萄糖 10g0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL蒸馏水 1000mLpH7.2制法:将蛋白胨和盐类加水溶解后,校正 pH 至 7.2.加入葡萄糖,琼脂煮沸,溶化琼脂,然后加入指示剂.混匀后,分装试管,121高压灭菌 15min,直立凝固备用.试验方法:从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种,同时接种两支培养基,其中一支于接种后滴加溶化的 1%琼脂液于表面,高度约 1cm,于 361培养.09 马尿酸钠培养基成分:马尿酸钠 1g肉浸液 100mL制法:将马尿酸钠溶解于肉浸液内,分装于小试管内,并于管壁画一横线.以标志管内液面高度,高压灭菌 12120min.试剂:三氯化铁(FeCl36H2O)12g,溶于 2%盐酸溶液 100mL 中即成.试验方法:用纯培养物接种,于 42培养 48h,观察培养液是否到达试管壁上记号处,如不足时,用蒸馏水补足至原量.经离心沉淀,吸取上清液 08mL,加入三氯化铁试剂 0.2mL,立即混合均匀,经 1015min,观察结果.结果:出现恒久之沉淀物为阳性.10 营养明胶成分:蛋白胨 5g牛肉膏 3g明胶 120g蒸馏水 1000mLpH6.87.0制法:加热溶解,校正至 pH7.47.6,分装小管,121高压灭菌 10min,取出后迅速冷却,使其凝固.复查最终 pH应为 6.87.0.试验方法:用琼脂培养物穿刺接种,放在 2225培养,每天观察结果,记录液化时间.或放在 36 士 1培养,每天取出,放冰箱内 30min 后再观察结果.11 苯丙氨酸培养基成分:酵母浸膏 3gDI-苯丙氨酸(或 L-苯丙氨酸 1g)2g磷酸氢二钠 1g氯化钠 5g琼脂 12g蒸馏水 1000mL制法:加热溶解后分装试管,121高压灭菌 15min,使成斜面.试验方法:自琼脂斜面上挑取大量培养物,移种于苯丙氨酸琼脂,在 361培养 4h 或 1824h.滴加 10%三氯化铁溶液 23 滴,自斜面培养物上流下,苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色.12 氨基酸脱羧酶试验培养基成分:蛋白胨 5g酵母浸膏 3g葡萄糖 1g蒸馏水 1000mL1.6%滇甲酚紫-乙醇溶液 1mLL-氨基酸或 DL-氨基酸 0.5 或 1g/100mLpH6.8制法:除氨基酸以外的成分加热溶解后,分装每瓶 100mL,分别加入各种氨基酸:赖氨酸,精氨酸和鸟氨酸.L-氨基酸按 05%加入,DL-氨基酸按 1%加入.再行校正 pH 至 6.8.对照培养基不加氨基酸.分装于灭菌的小试管内,每管 0.5mL,上面滴加一层液体石蜡,115高压灭菌 10min.试验方法:从琼脂斜面上挑取培养物接种,于 361培养 1824h,观察结果.氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱,培养基应呈紫色.阴性者无碱性产物,但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色.对照管应为黄色.13 蛋白胨水(靛基质试验用)成分:蛋白胨(或胰蛋白胨)20g氯化钠 5g蒸馏水 1000mLpH7.4制法:按上述成分配制,分装小试管,121高压灭菌 15min.靛基质试剂柯凡克试剂:将 5g 对二甲氨基苯甲醛溶解于 75mL 戊醇中.然后缓慢加入浓盐酸 25mL.欧-波试剂:将 1g 对二甲氨基苯甲醛溶解于 95mL95%乙醇内.然后缓慢加入浓盐酸 20mL.试验方法:挑取小量培养物接种,在 361培养 12d,必要时可培养 45d.加入柯凡克试剂约 0.5mL,轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色;或加入欧-波试剂约 0.5mL,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色.注:蛋白胨中应含有丰富的色氨酸.每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用.14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)成分:牛肉膏 3g酵母浸膏 3g蛋白胨 10g硫酸亚铁 0.2g硫代硫酸钠 0.3g氯化钠 5g琼脂 12g蒸馏水 1000mLpH7.4制法:加热溶解,校正 pH,分装试管,115高压灭菌 15min,取出直立候其凝固.试验方法:挑取琼脂培养物,沿管壁穿刺,于 361培养 12d,观察结果.产硫化氢者使培养基变为黑色.注:肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生,应采用三糖铁琼脂或本培养基.15 尿素琼脂成分:蛋白胨 1g氯化钠 5g 葡萄糖 1g磷酸二氢钾 2g0.4%酚红溶液 3mL琼脂 20g蒸馏水 1000mL20%尿素溶液 100mLpH7.20.1制法:将除尿素和琼脂以外的成分配好,并校正pH,加入琼脂,加热溶化并分装烧瓶.121高压灭菌15min.冷至5055,加入经除菌过滤的尿素溶液.尿素的最终浓度为 2最终 pH 应为 7.20.1.分装于灭菌试管内,放成斜面备用.试验方法:挑取琼脂培养物接种,在 361培养 24h,观察结果.尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色.16 氰化钾(KCN)培养基成分:蛋白胨 10g氯化钠 5g磷酸二氢钾 0.225g磷酸氢二钠 5.64g蒸馏水 1000mL0.5%氰化钾溶液 20mLpH7.6制法:将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶,121高压灭菌 15min.放在冰箱内使其充分冷却.每 100mL 培养基加入 0.5%氰化钾溶液 2.0mL(最后浓度为 1:10000),分装于 12mm100mm 灭菌试管,每管约 4mL,立刻用灭菌橡皮塞塞紧,放在 4冰箱内,至少可保存两个月.同时,将不加氰化钾的培养基作为对照培养基,分装试管备用.17 氧化酶试验试剂:1%盐酸二甲基对苯二胺溶液:少量新鲜配制,干冰箱内避光保存.1%-萘酚-乙醇溶液.试验方法:取白色洁净滤纸沾取菌落.加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴,阳性者呈现粉红色,并逐渐加深;再加-萘酚溶液一滴,阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色.阴性于两分钟内不变色.以毛细吸管吸取试剂,直接滴加于菌落上,其显色反应与以上相同.18 硝酸盐培养基成分:硝酸钾 0.2g蛋白 5g蒸馏水 1000mLpH7.4制法:溶解,校正 pH,分装试管,每管约 5mL,121高压灭菌 15min.硝酸盐还原试剂:甲液:将对氨基苯磺酸 0.8g 溶解于 2.5mol/L 乙酸溶液 100mL 中.乙液:将甲萘胺 0.5g 溶解于 2.5mol/L 乙酸溶液 100mL 中.试验方法:接种后在 361培养 14d,加入甲液和乙液各一滴,观察结果.硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色.注:本试验阴性的原因有三:细菌不能还原硝酸盐;亚硝酸盐继续分解,生成氨和氮;培养基不适于细菌的生长.如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解,可再加入锌粉少许,可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色.19 细胞色素氧化酶试验试剂:1%盐酸二甲基对苯二胺溶液.1%-萘酚-乙醇溶液.试验方法:取 37(或低于 37)培养 20h 的斜面培养物一支,将两种试剂各 23 滴,从斜面上端滴下,并将斜面略加倾斜,使试剂混合液流经斜面上的培养物.如系平板培养物,则可用试剂混合液滴在菌落上.结果:于 2min 内呈现蓝色者为阳性.阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应,2min 以后出现微弱或可疑反应均作为阴性结果.20 过氧化氢酶试验试剂:3%过氧化氢溶液:临用时配制.试验方法:挑取固体培养基上菌落一接种环,置于洁净试管内,滴加 3%过氧化氢溶液 2mL,观察结果.结果:于半分钟内发生气泡者为阳性,不发生气泡者为阴性.21 过氧化物酶试验试剂:2%儿茶酚溶液.3%过氧化氢溶液.试验方法:挑取固体培养基上菌落一接种环,置于洁净试管内,滴加 2儿茶酚溶液 1mL 及 3%过氧化氢溶液 1mL.静置于室温(20)中 3060min,观察结果.结果:阳性反应,细菌变为黑褐色;阴性反应,细菌不变色.注:过氧化物酶的作用可受氰化钾的抑制.22 磷酸盐缓冲液储存液磷酸二氢钾 34g1mol/L 氢氧化钠溶液 175mL蒸馏水 825mLpH7.2制法:先将磷酸盐溶解于 500mL 蒸馏水中,用 1mol/L 氢氧化钠溶液校正 pH 后,再用蒸馏水稀释至 1000mL.稀释液:取储存液 1.25mL,用蒸馏水稀释至 1000mL.分装每瓶 100mL 或每管 10mL,121高压灭菌 15min.23 明胶磷酸盐缓冲液成分:明胶 2g磷酸氢二钠 4g蒸馏水 1000mLpH6.2制法:加热溶解,校正 pH,121高压灭菌 15min.24 乳酸-苯酚溶液成分:苯酚 10g乳酸(比重 1.21)10g甘油 20g蒸馏水 10mL制法:将苯酚在水中加热溶解,然后加入乳酸及甘油.用途:检验真菌形态时用.25 肉浸液肉汤成分:绞碎牛肉 500g氯化钠 5g蛋白胨 10g磷酸氢二钾 2g蒸馏水 1000mL制法:将绞碎之去筋膜无油脂牛肉 500g 加蒸馏水 1000mL,混合后放冰箱过夜,除去液面之浮油,隔水煮沸半小时,使肉渣完全凝结成块,用绒布过滤,并挤压收集全部滤液,加水补足原量.加入蛋白胨,氯化钠和磷酸盐,溶解后校正 pH7.47.6 煮沸并过滤,分装烧瓶,121高压灭菌 30min.26 肉浸液琼脂成分:肉浸液肉汤(PH7.4)1000mL琼脂 1720g制法:加热溶化琼脂,分装烧瓶或试管,121高压灭菌 30min.根据需要,倾注平板或放成斜面.27 牛肉(或牛心)消化汤成分:绞碎牛肉(或牛心)1000g15%氢氧化钠溶液 27mL胰蛋白酶 40mL三氯甲烷 1mL氯化钠 10g蒸馏水 2000mL制法:1 称取碎牛肉,加蒸馏水,隔水加热到 80,维持 15min.2 加氢氧化钠溶液,对 pH 试纸呈弱碱性,冷至 40.3 加胰蛋白酶,氯仿,在 361放置 45h,每小时摇动一二次.4 4h 后,吸取上层液 5mL 于试管中,加 5%硫酸铜溶液 0.1mL,4%氢氧化钠溶液 5mL,混合之.若呈红色,则不须再消化,可由温箱取出.5 加入 15%乙酸溶液 45mL,对 pH 试纸呈酸性.6 煮沸 15min,使胰蛋白酶破坏,冷后,放冰箱内一夜.7 次日吸取上层清液,加氯化钠 10g,并加水补足原量,煮沸.8 校正 pH7.47.6(加 15%氢氧化钠溶液约 10mL),加热,用滤纸过滤,分装烧瓶,121高压灭菌 20min.注:此培养基可作为琼脂培养基的基础,不需加蛋白胨.胰蛋白酶之配制:称取去脂绞碎的猪胰 500g,加入乙醇 500mL,蒸馏水 1500mL,混合之,装人玻塞瓶内.每日摇匀三次.3d 后,用绒布过滤挤出其汁,加盐酸至 0.05%,放冰箱内保存备用.28 血消化汤成分:绞碎猪胃 100g绞碎猪血块 100g蒸馏水 1000mL浓盐酸 10mL制法:1 洗涤猪胃,除去油脂,保留胃粘膜,用绞肉机绞碎.2 用绞肉机将猪血块绞碎.3 将蒸馏水加热至 55,加入猪胃,猪血块和盐酸,置 55水浴中 24h,时常加以摇动.4 从水浴内取出,加入 1moL/L 碳酸钠溶液 5mL,煮沸 10min,置于冰箱内一夜.5 吸取上层清液,加磷酸氢二钾 1g,加热至 75,加入 1mol/L 碳酸钠溶液 45mL,煮沸,校正 pH7.27.4.6 用滤纸过滤,分装烧瓶,121高压灭菌 20min.29 豆粉琼脂成分:牛心消化汤(PH7.47.6)1000mL琼脂 20g黄豆粉浸液 50mL制法:将琼脂加在牛心消化汤内,加热溶解,过滤.加入豌豆粉浸液,分装每瓶 100mL,121高压灭菌 15min.豌豆粉浸液制法:取豌豆粉 5g,氯化钠 10g,加入蒸馏水 100mL.置 100水浴内加热 1h,放于冰箱中过夜.吸取上清液即为豌豆浸液.30 血琼脂成分:pH7.47.6 豆粉琼脂 100mL脱纤维羊血(或兔血)510mL制法:加热溶化琼脂,冷至 50,以灭菌手续加入脱纤维羊血,摇匀,倾注平板.亦可分装灭菌试管,置成斜面.亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血琼脂.31 营养琼脂成分:蛋白胨 10g牛肉膏 3g氯化钠 5g琼脂 1520g蒸馏水 1000mL制法:将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内,加入 15%氢氧化钠溶液约 2mL,校正 pH 至 7.27.4.加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化.分装烧瓶,121高压灭菌 15min.注:此培养基可供一般细菌培养之用,可倾注平板或制成斜面.如用于菌落计数,琼脂量为 1.5%;如作成平板或斜面,则应为 2%.32 营养肉汤成分:蛋白陈 10g牛肉膏 3g氯化钠 5g蒸馏水 1000mLpH7.4制法:按上述成分混合,溶解后校正 pH,分装烧瓶,每瓶 225mL,121高压灭菌 15min.33 乳糖胆盐发酵管成分:蛋白胨 20g猪胆盐(或牛羊胆盐)5g乳糖 10g0.04%滇甲酚紫水溶液 25mL蒸馏水 1000mLpH7.4制法:将蛋白胨,胆盐及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,分装每管10mL,并放入一个小倒管,115高压灭菌15min.注:双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍.34 乳糖发酵管成分:蛋白胨 20g乳糖 10g0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL蒸馏水 1000mLpH7.4制法:将蛋白胨及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,按检验要求分装30mL,10mL或3mL,并放入一个小倒管,115高压灭菌 15min.注:双料乳糖发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍.30mL 和 10mL 乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用,3mL 乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用.35 EC 肉汤成分:胰蛋白胨 20g3 号胆盐(或混合胆盐)1.5g乳糖 5g磷酸氢二钾 4g磷酸二氢钾 1.5g氯化钠 5g蒸馏水 1000mL制法:将上述成分混合,溶解后,分装有发酵倒管的试管中,121高压灭菌 15min,最终 pH 为 6.90.2.36 缓冲蛋白胨水(BP)成分:蛋白胨 10g氯化钠 5g磷酸氢二钠(Na2HPO412H2O)9g磷酸二氢钾 1.5g蒸馏水 1000mLpH7.2制法:按上述成分配好后以大烧瓶装,121高压灭菌 15min.临用时无菌分装每瓶 225mL.注:本培养基供沙门氏菌前增菌用.37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM)甲液胰蛋白胨 5g氯化钠 8g磷酸二氢钾 1.6g蒸馏水 1000mL乙液氯化镁(化学纯)40g蒸馏水 100mL4.13.3 丙液0.4%孔雀绿水溶液.制法:分别按上述成分配好后,121高压灭菌 15min 备用.临用时取甲液 90mL,乙液 9mL,丙液 0.9mL,以无菌操作混合即可.注:本培养基亦称 Rappaport 10(R10)增菌液.38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)基础培养基多胨或眎胨 5g胆盐 1g碳酸钙 10g硫代硫酸钠 30g蒸馏水 1000mL碘溶液碘 6g碘化钾 5g蒸馏水 20mL制法:将基础培养基的各成分加入蒸馏水中,加热溶解,分装每瓶 100mL.分装时应随时振摇,使其中的碳酸钙混匀.121高压灭菌 15min 备用.临用时每 100mL 基础培养基中加入碘溶液 2mL,0.1%煌绿溶液 1mL.39 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法)基础液:蛋白胨 10g牛肉膏 5g氯化钠 3g碳酸钙 45g蒸馏水 1000mL将各成分加入于蒸馏水中,加热至约 70溶解,校正 pH 至 7.00.1,121高压灭菌 20min.硫代硫酸钠溶液硫代硫酸钠(Na2S2O35H2O)50g蒸馏水 加至 100mL碘溶液碘片 20g碘化钾 25g蒸馏水加至 100mL将碘化钾充分溶解于是少量的蒸馏水中,加入碘片,振摇玻瓶至碘片全部溶解,再加入蒸馏水至规 定量.贮于棕色玻瓶内,紧塞瓶盖备用.煌绿水溶液煌绿 0.5g蒸馏水 100mL存放暗处,不少于 1d,使其自然灭菌.牛胆盐溶液干燥的牛胆盐 10g蒸馏水 100mL煮沸溶解,121高压灭菌 20min.制备:基础液 900mL硫代硫酸钠溶液 100mL碘液 20mL煌绿溶液 2mL牛胆盐溶液 50mL临用前,按上列顺序,以无菌操作依次加入于基础液中,每加入一种成分,均应摇匀后再加入另一种成分.分装于灭菌瓶中,每瓶 100mL.40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)成分:蛋白胨 5g乳糖 4g亚硒酸氢钠 4g磷酸氢二钠 5.5g磷酸二氢钾 4.58L-胱氨酸 0.01g蒸馏水 1000mL1%L-胱氨酸-氢氧化钠溶液的配法:称取L-胱氨酸0.1g(或DL-胱氨酸0.2g),加1mol/L氢氧化钠1.5mL,使溶解,再加入蒸馏水 8.5mL 即成.制法:将除亚硒酸氢钠和 L-胱氨酸以外的各成分溶解于 900mL 蒸馏水中,加热煮沸,俟冷备用.另将亚硒酸氢钠溶解于 100mL 蒸馏水中,加热煮沸,候冷,以无菌操作与上液混合.再加入 1%L-胱氨酸-氢氧化钠溶液 1mL.分装于灭菌瓶中,每瓶 100mL,pH 应为 7.00.1.41 GN 增菌液成分:胰蛋白胨 20g葡萄糖 1g甘露醇 2g柠檬酸钠 5g去氧胆酸钠 0.5g磷酸氢二钾 4g磷酸二氢钾 1.5g氯化钠 5g蒸馏水 1000mLpH7.0制法:按上述成分配好,加热使溶解,校正 pH.分装每瓶 225mL,115高压灭菌 15min.42 肠道菌增菌肉汤成分:蛋白胨 1 10g葡萄糖 5g牛胆盐 20g磷酸氢二钠 8g磷酸二氢钾 2g煌绿 0.015g蒸馏水 1000mLpH7.2制法:按上述成分配好,加热使溶解,校正 pH.分装每瓶 30mL,115高压灭菌 15min.43 亚硫酸铋琼脂(BS)成分:蛋白胨 10g牛肉膏 5g葡萄糖 5g硫酸亚铁 0.3g磷酸氢二钠 4g煌绿 0.025g柠檬酸铋铵 2g亚硫酸钠 6g琼脂 1820g蒸馏水 1000mLpH7.5制法:1 将前面 5 种成分溶解于 300mL 蒸馏水中.2 将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用 50mL 蒸馏水溶解.3 将琼脂于 600mL 蒸馏水中煮沸溶解,冷至 804 将以上三液合并,补充蒸馏水至 1000mL,校正 pH,加 0.5%煌绿水溶液 5mL,摇匀.冷至 5055,倾注平皿.注:此培养基不需高压灭菌.制备过程不宜过分加热.以免降低其选择性.应在临用前一天制备,贮存于室温暗处.超过 48h 不宜使用.44 DHL 琼脂成分:蛋白胨 20g牛肉膏 3g乳糖 10g蔗糖 10g去氧胆酸钠 1g硫代硫酸钠 2.3g柠檬酸钠 1g柠檬酸铁铵 1g中性红 0.03g琼脂 1820g蒸馏水 1000mLpH7.3制法:将除中性红和琼脂以外的成分溶解于400mL蒸馏水中,校正pH.再将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解,两液合并,并加入 0.5%中性红水溶液 6mL,待冷至 5055,倾注平板.45 HE 琼脂成分:脙胨 12g牛肉膏 3g乳糖 12g蔗糖 12g水杨素 2g胆盐 20g氯化钠 5g琼脂 1820g蒸馏水 1000mL0.4%溴麝香草酚蓝溶液 16mLAndrade 指示剂 20mL甲液 20mL乙液 20mLpH7.5制法:将前面七种成分溶解于 400mL 蒸馏水内作为基础液;将琼脂加入于 600mL蒸馏水内,加热溶解.加入 甲液和乙液于基础液内,校正 pH.再加入指示剂,并与琼脂液合并,待冷至 5055,倾注平板.注:此培养基不可高压灭菌.甲液的配制硫代硫酸钠 34g柠檬酸铁铵 4g蒸馏水 100mL乙液的配制去氧胆酸钠 10g蒸馏水 100mLAndrade 指示剂酸性复红 0.5g1mol/L 氢氧化钠溶液 16mL蒸馏水 100mL将复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液.数小时后如复红褪色不全,再加氢氧化钠溶液 12mL.46 SS 琼脂基础培养基:牛肉膏 5g眎胨 5g三号胆盐 3.5g琼脂 17g蒸馏水 1000mL再将两液混合,121高压灭菌 15min,保存备用.完全培养基:基础培养基 100mL乳糖 10g柠檬酸钠 8.5g硫代硫酸钠 8.5g10%柠檬酸铁溶液 10mL1%中性红溶液 2.5mL0.1%煌绿溶液 0.33mL加热溶化基础培养基,按比例加入上述染料以外之各成分,充分混合均匀,校正至 pH7.0,加入中性红和煌绿溶液,倾注平板.注:制好的培养基宜当日使用,或保存于冰箱内于 48h 内使用.煌绿溶液配好后应在 10d 以内使用.可以购用 SS 琼脂的干燥培养基.47 WS 琼脂成分:胨 12g牛肉膏 3g氯化钠 5g乳糖 12g蔗糖 12g十二烷基硫酸钠 2g琼脂 15gAndrade 指示剂 20mL0.4%溴麝香草酚蓝溶液 16mL甲液 20mL蒸馏水 1000mLpH7.0制法:除指示剂和甲液外,将其他成分加热溶解,不需消毒,校正pH 后加入指示剂和甲液,倾注平板应呈草绿色.注:供沙门氏菌分离用.Andrade 指示剂和甲液的配制均见 HE 琼脂.48 麦康凯琼脂成分:蛋白胨 17g眎胨 3g猪胆盐(或牛,羊胆盐)5g氯化钠 5g琼脂 17g蒸馏水 1000mL乳糖 10g0.01%结晶紫水溶液 10mL0.5%中性红水溶液 5mL制法:1 将蛋白胨,眎,胆盐和氯化钠溶解于 400mL 蒸馏水中,校正 pH7.2.将琼脂加入 600mL加热溶解.将两液合并,分装于烧瓶内,121高压灭菌 15min 备用.2 临用时加热溶化琼脂,趁热加入乳糖,冷至 5055时,加入结晶紫和中性红水溶液,摇匀后倾注平板.注:结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌.49 伊红美蓝琼脂(EMB)成分:蛋白胨 10g乳糖 10g磷酸氢二钾 2g琼脂 17g2%伊红 Y 溶液 20mL0.65%美蓝溶液 10mL蒸馏水 1000mLpH7.1制法:将蛋白胨,磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,校正 pH,分装于烧瓶内,121高压灭菌 15min 备用.临用时加入乳糖并加热溶化琼脂,冷至 5055,加入伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板.50 三糖铁琼脂(TSI)成分:蛋白胨 20g牛肉膏 5g乳糖 10g蔗糖 10g葡萄糖 1g氯化钠 5g硫酸亚铁铵Fe(NH4)2(SO4)26H2O 0.2g硫代硫酸钠 0.2g琼脂 12g酚红 0.025g蒸馏水 1000mLpH7.4制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH.加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂.加入0.2%酚红水溶液 12.5mL,摇匀.分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层.121高压灭菌 15min.放置高层斜面备用.51 三糖铁琼脂(换用方法)成分:蛋白胨 15g眎胨 5g牛肉膏 3g酵母膏 3g乳糖 10g蔗糖 10g葡萄糖 1g氯化钠 5g硫酸亚铁 0.2g硫代硫酸钠 0.3g琼脂 12g酚红 0.025g蒸馏水 1000mLpH7.4制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH.加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂.加入0.2%酚红水溶液 12.5mL,摇匀.分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层.121高压灭菌 15min,放置高层斜面备用.52 克氏双糖铁琼脂(KI)上层培养基成分血消化汤(pH7.6)500mL琼脂 6.5g硫代硫酸钠 0.1g硫酸亚铁铵 0.1g乳糖 5g0.2%酚红溶液 5mL下层培养基成分血消化汤(pH7.6)500mL琼脂 2g葡萄糖 1g0.2%酚红溶液 5mL制法:1 取血消化汤按上层和下层的琼脂用量,分别加入琼脂,加热溶解.2 分别加入其他各种成分.将上层培养基分装于烧瓶内;将下层培养基分装于灭菌 12mm100mm 试管内,每管约 2mL.115高压灭菌 10min.3 将上层培养基放在 56水浴箱内保温;将下层培养基直立放在室温内,使其凝固.4 当下层培养基凝固后,以无菌手续将上层培养基分装于下层培养基的上面,每管约 1.5mL,放成斜面.53 克氏双糖铁琼脂(换用方法)成分:蛋白胨 20g牛肉膏 3g酵母膏 3g乳糖 10g葡萄糖 1g氯化钠 5g柠檬酸铁铵 0.5g硫代硫酸钠 0.5g琼脂 12g酚红 0.025g蒸馏水 1000mLpH7.4制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH.加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂.加入0.2%酚红水溶液 12.5mL,摇匀.分装试管,装量宜多些,以便得到比较高的底层.121高压灭菌 15min.放置高层斜面备用.54 葡萄糖半固体发酵管成分:蛋白胨 1g牛肉膏 0.3g氯化钠 0.5g1.6%溴甲酚紫酒精溶液 0.1mL葡萄糖 1g琼脂 0.3g蒸馏水 100mLpH7.4制法:将蛋白胨,牛肉膏和氯化钠加入于水中,校正 pH 后加入琼脂加热溶解,再加入指示剂和葡萄糖,分装小试管,灭菌 121 15 min.55 5%乳糖发酵管成分:蛋白胨 0.2g氯化钠 0.5g乳糖 5g2%溴麝香草酚蓝水溶液 1.2mL蒸馏水 100mLpH7.4制法:除乳糖以外的各成分:溶解于 50mL 蒸馏水内,校正 pH.将乳糖溶解于另外 50mL 蒸馏水内,分别灭菌 121 15min,将两液混合,以无菌操作分装于灭菌小试管内.注:在此培养基内,大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于 1d 内发酵.56 CAYE 培养基此培养基附在肠毒素诊断试剂盒内,如无此培养基,亦可用 Honda 氏产毒肉汤.57 Honda 氏产毒肉汤成分:水解酪蛋白 20g酵母浸膏粉 10g氯化钠 2.5g磷酸氢二钠 15g葡萄糖 5g微量元素 0.5mL蒸馏水 1000mLpH7.5制法:溶解后校正 pH,高压灭菌 121 15min,待冷至 4550时,加入林可霉素溶液,每毫升培养基内含 90g.微量元素配方:硫酸镁 5g,氯化铁 0.5g,氯化钻 2g,蒸馏水 100mL58 Elek 氏培养基(毒素测定用)成分:胨 20g麦芽糖 3g乳糖 0.7g氯化钠 5g琼脂 15g40%氢氧化钠溶液 1.5mL蒸馏水 1000mLpH7.8制法:用 500mL 蒸馏水溶解琼脂以外的成分,煮沸,并用滤纸过滤.用 1mo1/L 氢氧化钠校正 pH.用另外 500mL蒸馏水加热溶解琼脂.将两液混合,分装试管 10mL 或 20mL.121高压灭菌 15min.临用时加热溶化琼脂倾注平板.59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基成分:甲液:胰蛋白胨 10g蒸馏水 1000mL乙液:磷酸氢二钠 9.5g蒸馏水 1000mL丙液:氯化镁(MgCl26H2O)40g蒸馏水 400mL以上分别在 121灭菌 15min.丁液:孔雀绿 0.2g蒸馏水 100mL戊液:羧苄青霉素 1mg/mL制法:取甲液