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1、资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。 注射用三磷酸胞苷二钠的溶血性、 过敏性及血管刺激性研究 王秋菊1, 吕娟2, 梁晨1, 张予阳1*( 1．沈阳药科大学生命科学与生物制药学院, 沈阳110016; 2．沈阳药大药业有限责任公司, 沈阳110016) 摘要: 目的 考察注射用三磷酸胞苷二钠的体外溶血性、 全身过敏性及在注射时对局部血管是否有刺激作用。方法 分别以家兔和豚鼠为受试动物, 给予注射用三磷酸胞苷二钠, 观察豚鼠有否全身过敏反应。观察给家兔连续多次注射此药后, 局部血管有无红肿、 充血、 出血和坏死等刺激作用。用家兔红细胞为标本, 观察该注射液有
2、否体外溶血作用。结果 注射用三磷酸胞苷二钠对豚鼠无全身过敏反应。家兔血管滴注部位未出现明显的红肿、 充血、 坏死等刺激反应。对家兔红细胞未产生溶血和凝集作用。结论 注射用三磷酸胞苷二钠无血管刺激性、 过敏性及溶血性。 关键词: 注射用三磷酸胞苷二钠; 过敏性; 溶血性; 血管刺激性 中图分类号: R965 文献标识码: A Study of hemolysis, hypersensitivity and stimulation on blood vessel of sodium cytidine triphosphate injection WANG Qiu-jv1, LV J
3、uan2, LIANG Chen1, ZHANG Yu-yang1* (1.School of Life Science and Biopharmaceutics, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China; 2.Shenyang Yaoda Pharmaceutical Co., LTD., Shenyang 110016, China) ABSTRACT: OBJECTIVE To observe the hemolysis in vitro, stimulation and hypersensitivity
4、of sodium cytidine triphosphate injection. METHODS The stimulated reaction on rabbits’ blood vessel, the hemolysis and agglomerated reaction on rabbits’ red cells in vitro and the hypersensitivity reaction in guine-pig of sodium cytidine triphosphate injection were studied. RESULTS The results sho
5、wed that no stimulation on blood vessel, no hemolysis and agglomeration on red cells and no hypersensitive action in guinea-pig. CONCLUSION Sodium cytidine triphosphate injection has no hemolysis, hypersensitive and stimulative reaction. KEY WORDS: sodium cytidine triphosphate injection; hypersens
6、itivity; hemolysis; stimulation 三磷酸胞苷二钠(sodium cytidine triphosphate, CTP)是一种核酸类药物, 可提供细胞代谢所需要的能量, 对于稳定细胞膜、 维持神经元的存活起重要作用, 同时具有促进受损神经细胞的修复、 再生等多种作用[1]。近年来, 该药在临床上广泛用于辅助治疗如脑梗死等急性脑血管病、 充血性心力衰竭、 新生儿缺血缺氧性脑病及糖尿病周围神经病变等疾病引起的神经损伤。为了评价注射用CTP的安全性,更好的为临床安全用药提供理论依据,本研究利用家兔和豚鼠为受试动物, 对其血管刺激性、 致敏性及溶血性进行了临床前实验性
7、评价。 1 材料与方法 1.1 药品与试剂 注射用三磷酸胞苷二钠( 沈阳药大药业有限责任公司) ; 阴性对照药, 0.9%氯化钠注射液( 沈阳志鹰制药厂) 。 1.2 实验动物 大耳白家兔, 2.5～3.0kg, 雌雄兼用; 白色豚鼠, 210～230g, 雌雄各半( 沈阳药科大学实验动物中心提供, 合格证号: SCXK( 辽) - -0012号) 。 1.3 过敏试验[2-4] 取豚鼠18只, 按体重随机分为3组, 6只/组。致敏: 阴性对照组ip 0.9%氯化钠注射液2mL/只, 阳性对照组ip 2%的新鲜鸡蛋清0.5mL/只, 受试药物组ip注射用三磷酸胞苷二钠( 2mg
8、·mL-1) , 2mL/只, 隔日1次, 共5次。致敏期间每日观察各豚鼠的状态, 初次和末次致敏及激发当日称量各豚鼠的体重, 观察是否有异常改变。激发: 末次给药后14d, 阴性对照组iv 0.9%氯化钠注射液4mL/只, 阳性对照组iv 2%的新鲜鸡蛋清1mL/只, 受试药物组iv注射用三磷酸胞苷二钠(8mg·mL-1), 4mL/只, 给药后立即至30min按附表A所示详细观察并记录各豚鼠的过敏反应症状, 并按附表B对注射用三磷酸胞苷二钠进行全身致敏作用评价。 附表A 过敏反应症状 0 正常 7 呼吸急促 14 步态不稳 1 不安宁 8 排尿 15 跳跃 2 立发 9
9、 排粪 16 喘息 3 发抖 10 流泪 17 痉挛 4 搔鼻 11 呼吸困难 18 横转 5 喷嚏 12 罗音 19 潮式呼吸 6 咳嗽 13 紫癜 20 死亡 附表B 全身致敏性评价标准 症状 判定 评价 0 - 过敏反应阴性 1－4症状 + 过敏反应弱阳性 1－10症状 ++ 过敏反应阳性 1－19症状 +++ 过敏反应强阳性 20 ++++ 过敏反应极强阳性 1.4 血管刺激性试验[2,3] 取大耳白家兔3只, 每只家兔分别于左耳静脉缓慢注射三磷酸胞苷二钠8mg·4mL·kg-1, 右耳注射等容积的0.9%氯化
10、钠注射液, 进行同体自身对照研究, 1次/d, 连续5d, 每天给药前后及末次给药后48h对家兔注射部位进行肉眼观察并记录, 观察注射部位的血管及周围组织是否有红肿、 丘斑等刺激反应, 结果按附表C进行血管刺激反应肉眼观察评分。观察期结束后将家兔处死, 剪取离注射部位1cm及5cm远的血管及周围组织, 10%甲醛液中固定, 石蜡包埋, HE染色, 进行组织病理学检查, 结果按附表D进行血管刺激反应光镜检查评分。 附表C 血管刺激性肉眼观察评分标准 观察指标 评分 结果判断( 按总分) 血管充血 正常 0 ≤0.5无刺激性 充血 1 血管纹路不清 2 ≤2.5轻微刺
11、激 血管呈紫红色 3 周围组织水肿 无水肿 0 ≤4.5中度刺激 轻微水肿 1 明显水肿 2 ≤6.0重度刺激 严重水肿 3 附表D 血管刺激性光镜检查评分及结果判定标准 观察指标 评分 结果判断( 按总分) 血管充血 内皮及管壁完整 0 ≤0.5无刺激性 内皮受损 1 血管内有血栓 2 ≤2.5轻微刺激 血管破裂 3 周围组织水肿 正常 0 ≤4.5中度刺激 水肿 1 出血 2 ≤6.0重度刺激 炎细胞浸润 3 1.5 体外溶血性试验[3,4] 兔耳中央动脉取20mL血液, 放入含玻璃珠的三角
12、烧杯中, 振摇10min, 除去纤维蛋白原, 使成脱纤血液, 然后加入10倍量的0.9%氯化钠注射液, 混匀, 离心( 1500rpm, 10min) , 取沉淀的红细胞, 再如此洗涤数次, 直至上清液无红色, 将所得红细胞用0.9%氯化钠注射液配成2%的红细胞悬液备用。取7只试管, 按附表E所示依次加入2%红细胞悬液、 0.9%氯化钠注射液、 蒸馏水及注射用三磷酸胞苷二钠( 2mg·mL-1) , 混匀, 立即于(37±0.5)℃恒温箱中温育, 分别于置温箱后15min、 30min、 45min、 60min、 2h、 3h仔细观察, 按”化学药物刺激性、 过敏性和溶血性研究技术指导原则”
13、的标准( 附表F) 对是否有溶血及红细胞凝集进行判定。 附表E 体外溶血试验加样表( mL) 试管号 1 2 3 4 5 6 7 2%兔红细胞悬液 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 0.9%氯化钠注射液 2.0 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 … 蒸馏水 … … … … … … 2.5 三磷酸胞苷二钠(2mg/mL) 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 … … 附表F 体外溶血试验判定标准 判定 所见现象 溶血( ＋) 溶液呈澄明红色, 管底无细胞或有少量细胞残留
14、 无溶血( －) 红细胞全部下沉, 上清液无色澄明 红细胞凝集( *) 溶液中有红棕色絮状沉淀物, 振摇后不分散 2 结果 2.1 过敏试验 致敏期间各豚鼠的饮食、 活动等状态均正常, 比较0.9%氯化钠注射液组与三磷酸胞苷二钠组豚鼠的初次和末次致敏及激发当日的体重, 未见异常差异, 且两组豚鼠的体重均有所增加。末次给药后14d激发时, 2%的新鲜鸡蛋清组的各豚鼠均不同程度地出现搔鼻、 喷嚏、 咳嗽、 抽搐、 大小便失禁、 步态不稳、 跳跃、 喘息、 休克等过敏反应症状, 且多数于15min左右死亡, 过敏发生率100%, 呈强至极强阳性过敏反应。0.9%氯化钠注射液组及三
15、磷酸胞苷二钠组的豚鼠无一例出现过敏症状, 过敏反应均为阴性。表明, 注射用三磷酸胞苷二钠对豚鼠无全身致敏作用(表1)。 表1 注射用三磷酸胞苷二钠豚鼠全身过敏性试验结果 Tab.1 Effect of sodium cytidine triphosphate injection on the hypersensitivity reaction in guine-pig 组别 动物数 过敏反应数 判定 评价 2%新鲜鸡蛋清 6 6 +++~++++ 强~极强阳性 0.9%氯化钠注射液 6 0 - 过敏反应阴性 注射用三磷酸胞苷二钠 6 0 - 过敏
16、反应阴性 2.2 血管刺激性试验 家兔连续5d耳缘iv给三磷酸胞苷二钠后, 肉眼观察注射部位及远离注射处血管及组织, 均未见出血、 淤血、 水肿等异常改变, 与注射0.9%氯化钠注射液的对照侧耳部血管相比无明显差异, 肉眼观察评分结果见表2。评分结束后, 处死家兔, 取两耳注射部位的血管及周围组织进行病理学检查。结果可见, 注射用三磷酸胞苷二钠组的兔耳1cm及5cm处血管内未见血栓, 血管内皮细胞未见肿胀、 增生、 血管外周围组织均未见出血、 坏死及炎性细胞浸润等病理改变, 0.9%氯化钠注射液组的兔耳1cm及5cm处血管内及血管外也均未见任何异常病理性改变, 光镜检查评分见表3。结果表明
17、 连续5d给家兔耳缘iv注射用三磷酸胞苷二钠对局部血管无刺激作用。 表2 注射用三磷酸胞苷二钠血管刺激肉眼观察评分 Tab.2 The visual inspection rating scores of sodium cytidine triphosphate injection on the stimulated reaction in rabbits’blood vessel 组别 兔耳数( 只) 剂量 肉眼观察评分 评价 0.9%氯化钠注射液 3 … 0 无刺激性 注射用三磷酸胞苷二钠 3 8mg·kg-1 0 表3 注射用三磷酸胞苷二钠血管刺激光
18、镜检查评分 Tab.3 The light microscope inspection rating scores of sodium cytidine triphosphate injection on the stimulated reaction in rabbits’blood vessel 组别 兔耳数( 只) 剂量 光镜观察评分 评价 1cm 5cm 0.9%氯化钠注射液 3 … 0 0 无刺激性 注射用三磷酸胞苷二钠 3 8mg·kg-1 0 0 2.3 体外溶血试验 结果由表4可见, 蒸馏水对照管( 阳性对照) 因体系不等渗而致红细胞
19、破裂, 发生溶血, 形成红色澄明溶液。0.9%氯化钠注射液对照管( 阴性对照) 与各三磷酸胞苷二钠管( 被试管) 在所观察的时间内均无溶血及红细胞凝集发生。表明, 注射用三磷酸胞苷二钠在常规体外试管法试验中, 对家兔血液无溶血作用。 表4 注射用三磷酸胞苷二钠体外溶血性试验结果 Tab.4 Effect of sodium cytidine triphosphate injection on the hemolysis and agglomerated reaction on rabbits’ red cells in vitro 被试物与红细胞接触的时间
20、 各剂量三磷酸胞苷二钠( 2mg·mL) + 0.9%氯化钠注射液 0.9%氯化钠注射液 蒸馏水 0.5+2.0 mL 0.4+2.1 mL 0.3+2.2 mL 0.2+2.3 mL 0.1+2.4 mL 2.5 mL 2.5 mL 15 min － － － － － － ＋ 30 min － － － － － － ＋ 45 min － － － － － － ＋ 60 min － － － － － － ＋ 2 h － － － － － － ＋ 3 h － － － － － － ＋ 注:
21、＋”为溶血, ”－”为无溶血 Note: ”+” hemolysis, ”-” no hemolysis 3 讨论 三磷酸胞苷二钠是存在于人体内的、 生命活动必不可少的核苷酸类物质, 在机体的正常代谢中起着重要的作用。它是核苷酸衍生物, 也是核酸的重要组成部分。注射用三磷酸胞苷二钠为治疗神经系统疾病的药物, 进入机体后有助于促进神经细胞内的磷脂、 核酸和蛋白质的合成, 提高神经细胞抗损伤能力。临床常规用法有同种, 包括肌肉注射, 20mg/次, 1～2次/d。静脉滴注, 20mg加入5%葡萄糖液或氯化钠注射液250ml中缓慢滴注。其临床最大日用量是160mg, 折合为每公斤体重的剂量为
22、2.67mg·kg-1。在家兔血管刺激性试验中, 我们依照不同种属动物的换算方法, 选用CTP的家兔用药剂量为8mg·kg-1, 过敏性试验中, 选用CTP的豚鼠用药剂量为13mg·kg-1, 分别相当于临床实际最高用药剂量的1～5倍,结果未见血管刺激、 溶血及过敏现象。此研究为注射用三磷酸胞苷二钠应用于临床提供了一定的安全性依据。 REFERENCES [1] GENG W. An Expermental Study on the Safety of Cefpirome Sulfate for Injection[J]. Herald of Medicine( 医药导报) . , 2
23、7 (3): 278-279 [2] XU S Y,BIAN R L,CHEN X. Methodology of Pharmacological Experiment(药理实验方法学)[M]. (Vol Ⅲ) Beijing: People's Health Publishing House, :241-245 [3] Center for Drug Evaluation of State Food and Drug Administration(国家食品药品监督管理局药品审评中心). Guiding principles for chemical drugs on irritation, allergic and hemolytic research[S]. (Second script). Number [H] GPT4-1, :13-27 [4] CHEN Q. Methodological Study of Chinese Herbs Pharmacology(中药药理研究方法学)[M]. (Vol Ⅰ) Beijing: People's Health Publishing House,1993:164-168
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