仔猪肠道健康及功能性饲料.pptx

仔猪肠道健康及功能性饲料仔猪肠道健康及功能性饲料研究与应用研究与应用 2009.07.032009.07.03印遇龙印遇龙影响仔猪影响仔猪影响仔猪影响仔猪生长发育生长发育生长发育生长发育 仔猪宫内发育迟缓仔猪宫内发育迟缓仔猪断奶应激仔猪断奶应激生长缓慢、腹泻生长缓慢、腹泻 免疫抑制免疫抑制 肠道损伤肠道损伤 微生态平衡破坏微生态平衡破坏 内分泌紊乱内分泌紊乱平均死亡率平均死亡率平均死亡率平均死亡率12%12%年死亡约年死亡约年死亡约年死亡约24002400万头万头万头万头年经济损失年经济损失年经济损失年经济损失120120亿元亿元亿元亿元肠道发育与调控肠道发育与调控肠道发育与调控肠道发育与调控消化系统发育阻滞消化系统发育阻滞消化系统发育阻滞消化系统发育阻滞仔猪早期断奶已成为集约化、规模化养殖生产中所采取的一项重要手段，虽然早期断奶仔猪早期断奶已成为集约化、规模化养殖生产中所采取的一项重要手段，虽然早期断奶仔猪早期断奶已成为集约化、规模化养殖生产中所采取的一项重要手段，虽然早期断奶仔猪早期断奶已成为集约化、规模化养殖生产中所采取的一项重要手段，虽然早期断奶技术可以提高母猪生产性能，也有利于提高仔猪的成活率，但伴随而来的腹泻、生长迟技术可以提高母猪生产性能，也有利于提高仔猪的成活率，但伴随而来的腹泻、生长迟技术可以提高母猪生产性能，也有利于提高仔猪的成活率，但伴随而来的腹泻、生长迟技术可以提高母猪生产性能，也有利于提高仔猪的成活率，但伴随而来的腹泻、生长迟缓、消化不良、免疫力低下等仔猪缓、消化不良、免疫力低下等仔猪缓、消化不良、免疫力低下等仔猪缓、消化不良、免疫力低下等仔猪“早期断奶综合症早期断奶综合症早期断奶综合症早期断奶综合症”严重影响了养猪业的经济效益。严重影响了养猪业的经济效益。严重影响了养猪业的经济效益。严重影响了养猪业的经济效益。肠道最基本的功能是消化吸收，也是体内最大的免肠道最基本的功能是消化吸收，也是体内最大的免肠道最基本的功能是消化吸收，也是体内最大的免肠道最基本的功能是消化吸收，也是体内最大的免疫器官，各种营养物质主要在此吸收转运，处于沟疫器官，各种营养物质主要在此吸收转运，处于沟疫器官，各种营养物质主要在此吸收转运，处于沟疫器官，各种营养物质主要在此吸收转运，处于沟通机体内外环境的重要位置。通机体内外环境的重要位置。通机体内外环境的重要位置。通机体内外环境的重要位置。肠道的发育越来越成为限制仔猪后期健康生长的重肠道的发育越来越成为限制仔猪后期健康生长的重肠道的发育越来越成为限制仔猪后期健康生长的重肠道的发育越来越成为限制仔猪后期健康生长的重要因素，认识仔猪消化道的发育过程对做好仔猪早要因素，认识仔猪消化道的发育过程对做好仔猪早要因素，认识仔猪消化道的发育过程对做好仔猪早要因素，认识仔猪消化道的发育过程对做好仔猪早期断奶及断奶仔猪的生产管理非常重要。因此，仔期断奶及断奶仔猪的生产管理非常重要。因此，仔期断奶及断奶仔猪的生产管理非常重要。因此，仔期断奶及断奶仔猪的生产管理非常重要。因此，仔猪肠道健康及其调控对规模化养猪具有现实意义。猪肠道健康及其调控对规模化养猪具有现实意义。猪肠道健康及其调控对规模化养猪具有现实意义。猪肠道健康及其调控对规模化养猪具有现实意义。背景背景高铜滥用导致的危害高铜滥用导致的危害引起动物中毒表现为血红蛋白降低、黄疸、神经症状、异食、生长发育迟缓超过500mg/kg可引起死亡引起动物某些营养素缺乏降低铁和锌的吸收，引起铁和锌的缺乏症；加速饲料中维生素的氧化破坏；加速饲料中油脂的氧化，出现哈味。高铜滥用导致的危害高铜滥用导致的危害影响动物性食品的安全长期饲喂，肝肾铜残留显著提高铜中毒时，肝中铜含量高达750-6000mg/kg。环境污染以万头猪场计，一年随猪粪排出铜量为540kg。土壤中铜污染可以破坏土壤的物理、化学和生物学功能，引起土壤的肥力下降，影响作物产量和养分含量。添加高锌导致的问题添加高锌导致的问题高锌的作用：促进仔猪生长和降低仔猪断奶后腹泻的效果。一般使用剂量：2000-3000mg/kg一般使用不超过2周，最长不超过四周长时间使用会造成中毒：发育停止、关节炎、腋下出血和胃肠炎。同样，环境问题难以承受的繁荣难以承受的繁荣2100年-115亿人口，1988年资源量铝：224年-18年铜：41年-4年锌：21年-3年油：41年-7年磷：100年-17年 消耗殆尽引自Paul Harrison:The Third Revolution有机砷制剂导致的环境砷污染有机砷制剂导致的环境砷污染允许作为饲料药物添加剂的砷制剂有：对氨基苯砷酸（50-100mg/kg）、硝基羟基苯砷酸（30-50mg/kg）部分饲料生产厂家片面强调：超剂量添加皮肤红环境污染以万头猪场计：仅在商品猪日粮中添加阿散酸，每年要用360kg，向环境排放约124.4kg的砷。对农作物的影响 土壤中砷酸钠为40mg/kg，水稻减产50%；土壤中砷酸钠为160mg/kg时，水稻不能生长；当灌溉水中砷浓度为20mg/kg，水稻颗粒无收。有机砷制剂导致的环境砷污染有机砷制剂导致的环境砷污染Geogenic arsenic contamination and human health-Xinjiang,ChinaSkin lesion dueArsenic toxicityThis a tubewell with As Contamination still being used By the local people.As concentration:606 ppbArsenic toxicity symptomBlue feetGeogenic arsenic contamination and human health劣质饲料添加剂导致的镉污劣质饲料添加剂导致的镉污染染镉（Cd）是一种有毒的重金属元素，属严重污染性元素。FAO和WHO 将Cd列为仅次于黄曲霉素和砷的食品污染物。特点：在动物和人体内排泄很慢，有明显的蓄积性。危害：慢性毒性作用，主要是损害肾小管，并导致骨质疏松症。导致严重贫血、损害生殖系统，并干扰锌、铜、铁在体内的吸收与代谢。技术路线技术路线仔猪仔猪仔猪仔猪组学技术组学技术组学技术组学技术基因组学基因组学基因组学基因组学蛋白质组学蛋白质组学蛋白质组学蛋白质组学代谢组学代谢组学代谢组学代谢组学宫内发育迟缓宫内发育迟缓宫内发育迟缓宫内发育迟缓断奶应激断奶应激断奶应激断奶应激肠道发育肠道发育肠道发育肠道发育作用机制作用机制作用机制作用机制调控技术调控技术调控技术调控技术肠道健康肠道健康肠道健康肠道健康功能性饲料产品功能性饲料产品功能性饲料产品功能性饲料产品推广应用推广应用推广应用推广应用仔猪健康养殖仔猪健康养殖仔猪健康养殖仔猪健康养殖主要进展主要进展-1-1IUGR(IUGR(左左左左)和和和和CKCK（右（右（右（右)肠道粘膜基因表达变化图谱比较肠道粘膜基因表达变化图谱比较肠道粘膜基因表达变化图谱比较肠道粘膜基因表达变化图谱比较 IUGR(IUGR(IUGR(IUGR(左左左左)和和和和CKCKCKCK仔仔仔仔猪肠道粘膜基因猪肠道粘膜基因猪肠道粘膜基因猪肠道粘膜基因表达变化表达变化表达变化表达变化 与正常空肠基因比较：宫内发育迟缓与正常空肠基因比较：宫内发育迟缓与正常空肠基因比较：宫内发育迟缓与正常空肠基因比较：宫内发育迟缓仔猪（仔猪（仔猪（仔猪（IUGR)IUGR)有有有有306306个基因上调，个基因上调，个基因上调，个基因上调，271271个基个基个基个基因下调；添加精氨酸，有因下调；添加精氨酸，有因下调；添加精氨酸，有因下调；添加精氨酸，有258258个基因上调，个基因上调，个基因上调，个基因上调，171171个基因下调；精氨酸生素有个基因下调；精氨酸生素有个基因下调；精氨酸生素有个基因下调；精氨酸生素有6060个基因个基因个基因个基因上调上调上调上调,169,169个基因下调。个基因下调。个基因下调。个基因下调。断奶引发了与氧断奶引发了与氧断奶引发了与氧断奶引发了与氧化应激和免疫激活相关的化应激和免疫激活相关的化应激和免疫激活相关的化应激和免疫激活相关的2121个基因表达上个基因表达上个基因表达上个基因表达上调及与营养代谢和细胞增殖相关的调及与营养代谢和细胞增殖相关的调及与营养代谢和细胞增殖相关的调及与营养代谢和细胞增殖相关的1818个基个基个基个基因表达下降。因表达下降。因表达下降。因表达下降。Chen et al.,2009.Pro Fun Amino Acids Carb:238-243IUGR(IUGR(左左左左)CK)CK建立了仔猪肠道基因表达基因芯片变化图谱建立了仔猪肠道基因表达基因芯片变化图谱建立了仔猪肠道基因表达基因芯片变化图谱建立了仔猪肠道基因表达基因芯片变化图谱蛋白质组学分析对哺乳蛋白质组学分析对哺乳蛋白质组学分析对哺乳蛋白质组学分析对哺乳(左左左左)和断奶和断奶和断奶和断奶(右右右右)仔猪肠道粘膜上皮组织仔猪肠道粘膜上皮组织仔猪肠道粘膜上皮组织仔猪肠道粘膜上皮组织2D2D凝胶蛋白质图谱比较凝胶蛋白质图谱比较凝胶蛋白质图谱比较凝胶蛋白质图谱比较 建立了分辨率较高且重复性好的仔猪肠道粘膜上皮组建立了分辨率较高且重复性好的仔猪肠道粘膜上皮组建立了分辨率较高且重复性好的仔猪肠道粘膜上皮组建立了分辨率较高且重复性好的仔猪肠道粘膜上皮组织的织的织的织的2-DE2-DE图谱，鉴定了一些可能与蛋白质合成、肠道氨基图谱，鉴定了一些可能与蛋白质合成、肠道氨基图谱，鉴定了一些可能与蛋白质合成、肠道氨基图谱，鉴定了一些可能与蛋白质合成、肠道氨基酸转运吸收相关的差异表达蛋白质。酸转运吸收相关的差异表达蛋白质。酸转运吸收相关的差异表达蛋白质。酸转运吸收相关的差异表达蛋白质。同一组织同一组织同一组织同一组织3 3块凝胶的平均蛋白质点数依次为块凝胶的平均蛋白质点数依次为块凝胶的平均蛋白质点数依次为块凝胶的平均蛋白质点数依次为8752887528、8364883648和和和和9442694426，匹配率达，匹配率达，匹配率达，匹配率达83.81%83.81%，84.05%84.05%，82.39%.82.39%.且且且且平行胶在蛋白质点位置上有较好的重复性。平行胶在蛋白质点位置上有较好的重复性。平行胶在蛋白质点位置上有较好的重复性。平行胶在蛋白质点位置上有较好的重复性。建立了早期断奶应激肠道黏膜蛋白质组图谱建立了早期断奶应激肠道黏膜蛋白质组图谱Wang et al.,2009.Pro Fun Amino Acids Carb:383-395ABC哺乳仔猪血清哺乳仔猪血清哺乳仔猪血清哺乳仔猪血清600 MHz 600 MHz 代谢组的图谱代谢组的图谱代谢组的图谱代谢组的图谱其中：其中：其中：其中：A A中芳香区中芳香区中芳香区中芳香区(5.6-8.5)(5.6-8.5)相对于脂肪区相对于脂肪区相对于脂肪区相对于脂肪区(0.6-5.4)(0.6-5.4)扩大了约扩大了约扩大了约扩大了约1616倍，而倍，而倍，而倍，而B B中芳香区中芳香区中芳香区中芳香区(5.6-8.5)5.6-8.5)相对于脂肪区相对于脂肪区相对于脂肪区相对于脂肪区(0.6-5.4)(0.6-5.4)扩大了约扩大了约扩大了约扩大了约4 4倍倍倍倍随着日龄的增长，哺乳仔猪血随着日龄的增长，哺乳仔猪血随着日龄的增长，哺乳仔猪血随着日龄的增长，哺乳仔猪血清中脂类、大部分碱类物质、清中脂类、大部分碱类物质、清中脂类、大部分碱类物质、清中脂类、大部分碱类物质、氨基酸中赖氨酸、组氨酸、苯氨基酸中赖氨酸、组氨酸、苯氨基酸中赖氨酸、组氨酸、苯氨基酸中赖氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、酪氨酸浓度丙氨酸、苏氨酸、酪氨酸浓度丙氨酸、苏氨酸、酪氨酸浓度丙氨酸、苏氨酸、酪氨酸浓度呈下降趋势。呈下降趋势。呈下降趋势。呈下降趋势。随着日龄的增长，哺乳仔猪血随着日龄的增长，哺乳仔猪血随着日龄的增长，哺乳仔猪血随着日龄的增长，哺乳仔猪血清中葡萄糖、大部分酸类物质、清中葡萄糖、大部分酸类物质、清中葡萄糖、大部分酸类物质、清中葡萄糖、大部分酸类物质、氨基酸中精氨酸、异亮氨酸、氨基酸中精氨酸、异亮氨酸、氨基酸中精氨酸、异亮氨酸、氨基酸中精氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、牛磺酸、丙亮氨酸、蛋氨酸、牛磺酸、丙亮氨酸、蛋氨酸、牛磺酸、丙亮氨酸、蛋氨酸、牛磺酸、丙氨酸浓度呈上升趋势。氨酸浓度呈上升趋势。氨酸浓度呈上升趋势。氨酸浓度呈上升趋势。建立了哺乳仔猪发育血液产物变化代谢组图谱建立了哺乳仔猪发育血液产物变化代谢组图谱Li et al.,2009.Pro Fun Amino Acids Carb:1-11主要进展主要进展-2-2哺乳仔猪发育哺乳仔猪发育(1-28d)肠道组织形态学指标肠道组织形态学指标(y)与日龄与日龄(x)之间曲线方程之间曲线方程(n=30)y yx x曲线方程曲线方程曲线方程曲线方程空肠前段空肠前段空肠前段空肠前段绒毛长度绒毛长度绒毛长度绒毛长度日龄日龄日龄日龄 y=247.92-11.15x+0.34xy=247.92-11.15x+0.34x2 2隐窝深度隐窝深度隐窝深度隐窝深度 日龄日龄日龄日龄 y=170.94-8.27x+0.24xy=170.94-8.27x+0.24x2 2空肠后段空肠后段空肠后段空肠后段绒毛长度绒毛长度绒毛长度绒毛长度 日龄日龄日龄日龄 y=241.50+47.42x-9.64xy=241.50+47.42x-9.64x2 2+0.54x+0.54x3 3-0.009x-0.009x4 4隐窝深度隐窝深度隐窝深度隐窝深度 日龄日龄日龄日龄 y=184.50-2.58xy=184.50-2.58x上皮间淋巴细胞数上皮间淋巴细胞数上皮间淋巴细胞数上皮间淋巴细胞数日龄日龄日龄日龄 y=0.47+5.12xy=0.47+5.12x回肠末端回肠末端回肠末端回肠末端绒毛长度绒毛长度绒毛长度绒毛长度日龄日龄日龄日龄 y=195.87+3.45xy=195.87+3.45x隐窝深度隐窝深度隐窝深度隐窝深度日龄日龄日龄日龄 y=83.30+11.27x-0.29xy=83.30+11.27x-0.29x2 2上皮间淋巴细胞数上皮间淋巴细胞数上皮间淋巴细胞数上皮间淋巴细胞数日龄日龄日龄日龄 y=370.71+21.23x-3.15xy=370.71+21.23x-3.15x2 2+0.08x+0.08x3 3杯状细胞数杯状细胞数杯状细胞数杯状细胞数日龄日龄日龄日龄 y=49.73-1.00 xy=49.73-1.00 x首次阐明了仔猪哺乳期肠道黏膜发育变化规律首次阐明了仔猪哺乳期肠道黏膜发育变化规律1d1d7d7d14d14d21d21d28d28d1-281-28日龄日龄日龄日龄哺乳仔猪发育空肠前段形态学指标扫描电镜照片哺乳仔猪发育空肠前段形态学指标扫描电镜照片哺乳仔猪发育空肠前段形态学指标扫描电镜照片哺乳仔猪发育空肠前段形态学指标扫描电镜照片(HE(HE，40 x10)40 x10)哺乳仔猪发育肠道绒毛长度、哺乳仔猪发育肠道绒毛长度、哺乳仔猪发育肠道绒毛长度、哺乳仔猪发育肠道绒毛长度、隐窝深度、上皮间淋巴细胞隐窝深度、上皮间淋巴细胞隐窝深度、上皮间淋巴细胞隐窝深度、上皮间淋巴细胞数和杯状细胞数不受性别变数和杯状细胞数不受性别变数和杯状细胞数不受性别变数和杯状细胞数不受性别变化的影响。化的影响。化的影响。化的影响。绒毛长度、隐窝深度、上皮间淋绒毛长度、隐窝深度、上皮间淋绒毛长度、隐窝深度、上皮间淋绒毛长度、隐窝深度、上皮间淋巴细胞数和杯状细胞数不受空肠巴细胞数和杯状细胞数不受空肠巴细胞数和杯状细胞数不受空肠巴细胞数和杯状细胞数不受空肠部位部位部位部位(空肠前段和空肠后段空肠前段和空肠后段空肠前段和空肠后段空肠前段和空肠后段)的影响，的影响，的影响，的影响，但与回肠之间有差异。但与回肠之间有差异。但与回肠之间有差异。但与回肠之间有差异。哺乳仔猪发育肠道形态学指标在不同肠道部位之间的比较哺乳仔猪发育肠道形态学指标在不同肠道部位之间的比较哺乳仔猪发育肠道形态学指标在不同肠道部位之间的比较哺乳仔猪发育肠道形态学指标在不同肠道部位之间的比较 (n=30)(n=30)baba高度高度(mm)bbbbaa哺乳仔猪发育肠道碱性磷酸酶免疫组化灰度哺乳仔猪发育肠道碱性磷酸酶免疫组化灰度哺乳仔猪发育肠道碱性磷酸酶免疫组化灰度哺乳仔猪发育肠道碱性磷酸酶免疫组化灰度(A)(A)及其及其及其及其mRANmRAN相对表达量相对表达量相对表达量相对表达量(B)(B)在不同肠道部位之间的比较在不同肠道部位之间的比较在不同肠道部位之间的比较在不同肠道部位之间的比较 (n=30)(n=30)ABabb肠道碱性磷酸酶是肠道碱性磷酸酶是肠道碱性磷酸酶是肠道碱性磷酸酶是肠黏膜上的标志酶，可反映肠道的发育肠黏膜上的标志酶，可反映肠道的发育情况及肠上皮细胞的吸收能力，其不受性别变化的影响，情况及肠上皮细胞的吸收能力，其不受性别变化的影响，免疫组化灰度不受肠道部位的影响，但免疫组化灰度不受肠道部位的影响，但mRNA相对表达量相对表达量在空肠前段较空肠后段和回肠末端要高。在空肠前段较空肠后段和回肠末端要高。揭示了哺乳仔猪肠道功能性基因发育变化规律揭示了哺乳仔猪肠道功能性基因发育变化规律1-28d 1-28d 肠道碱性磷酸酶免疫组化灰度或肠道碱性磷酸酶肠道碱性磷酸酶免疫组化灰度或肠道碱性磷酸酶肠道碱性磷酸酶免疫组化灰度或肠道碱性磷酸酶肠道碱性磷酸酶免疫组化灰度或肠道碱性磷酸酶mRANmRAN相对表达量相对表达量相对表达量相对表达量(y)(y)与日龄与日龄与日龄与日龄(x)(x)之间曲线方程之间曲线方程之间曲线方程之间曲线方程y yx x曲线方程曲线方程曲线方程曲线方程空肠前段空肠前段空肠前段空肠前段灰度灰度灰度灰度日龄日龄日龄日龄y=149.79+0.93xy=149.79+0.93xmRNAmRNA相对表达量相对表达量相对表达量相对表达量日龄日龄日龄日龄y=0.82+0.63x-0.14xy=0.82+0.63x-0.14x2 2+0.01x+0.01x3 3-0.0002x-0.0002x4 4空肠后段空肠后段空肠后段空肠后段mRNAmRNA相对表达量相对表达量相对表达量相对表达量日龄日龄日龄日龄y=1.69-0.04xy=1.69-0.04x回肠末端回肠末端回肠末端回肠末端mRNAmRNA相对表达量相对表达量相对表达量相对表达量日龄日龄日龄日龄y=1.55-0.16x+0.005xy=1.55-0.16x+0.005x2 2肠道碱性磷酸酶免疫组化灰度仅在空肠前段表现出线性变化肠道碱性磷酸酶免疫组化灰度仅在空肠前段表现出线性变化肠道碱性磷酸酶免疫组化灰度仅在空肠前段表现出线性变化肠道碱性磷酸酶免疫组化灰度仅在空肠前段表现出线性变化趋势，其趋势，其趋势，其趋势，其mRNAmRNA相对表达量发育趋势分别表现为四次方曲线相对表达量发育趋势分别表现为四次方曲线相对表达量发育趋势分别表现为四次方曲线相对表达量发育趋势分别表现为四次方曲线变化变化变化变化(空肠前段空肠前段空肠前段空肠前段)、线性变化、线性变化、线性变化、线性变化(空肠前段空肠前段空肠前段空肠前段)和二次方曲线变化和二次方曲线变化和二次方曲线变化和二次方曲线变化(回回回回肠末端肠末端肠末端肠末端)。率先克隆了猪肠道氨基酸转运载体率先克隆了猪肠道氨基酸转运载体率先克隆了猪肠道氨基酸转运载体率先克隆了猪肠道氨基酸转运载体ASCT2ASCT2、B0B0、b0,+ATb0,+AT和和和和y+LAT1y+LAT1，以及小，以及小，以及小，以及小肽转运载体肽转运载体肽转运载体肽转运载体PepT1PepT1的的的的cDNAcDNA编码区，并在编码区，并在编码区，并在编码区，并在GenbankGenbank上注册了上注册了上注册了上注册了6 6个基因序列。个基因序列。个基因序列。个基因序列。肠道氨基酸肠道氨基酸肠道氨基酸肠道氨基酸(中性中性中性中性ASCT1ASCT1、碱性、碱性、碱性、碱性CAT1CAT1、酸性、酸性、酸性、酸性EAAC1)EAAC1)和小肽和小肽和小肽和小肽PepT1PepT1转运载体转运载体转运载体转运载体mRNAmRNA相对表达量均不受性别变化的影响；相对表达量均不受性别变化的影响；相对表达量均不受性别变化的影响；相对表达量均不受性别变化的影响；酸性氨基酸酸性氨基酸酸性氨基酸酸性氨基酸EACC1EACC1和小肽和小肽和小肽和小肽PepT1PepT1不受肠道部位的影响，中性不受肠道部位的影响，中性不受肠道部位的影响，中性不受肠道部位的影响，中性氨基酸氨基酸氨基酸氨基酸ASCT1ASCT1在空肠前段与空肠后段之间，空肠后段与回肠在空肠前段与空肠后段之间，空肠后段与回肠在空肠前段与空肠后段之间，空肠后段与回肠在空肠前段与空肠后段之间，空肠后段与回肠末端之间，差异显著，而空肠前段和回肠末端之间则差异不末端之间，差异显著，而空肠前段和回肠末端之间则差异不末端之间，差异显著，而空肠前段和回肠末端之间则差异不末端之间，差异显著，而空肠前段和回肠末端之间则差异不显著；碱性氨基酸显著；碱性氨基酸显著；碱性氨基酸显著；碱性氨基酸CAT1CAT1在肠道不同部位之间存在差异。在肠道不同部位之间存在差异。在肠道不同部位之间存在差异。在肠道不同部位之间存在差异。mRNAmRNA相对表达量相对表达量相对表达量相对表达量a ab ba aa ab bc c0246810ASCT1CAT1EAAC1PepT1空肠前段空肠后段回肠末端y yx x曲线方程曲线方程曲线方程曲线方程空肠前段空肠前段空肠前段空肠前段ASCT1 mRNAASCT1 mRNA相对表达量相对表达量相对表达量相对表达量日龄日龄日龄日龄y=-2.30+3.9x-0.57xy=-2.30+3.9x-0.57x2 2+0.03x+0.03x3 3-0.0005x-0.0005x4 4CAT1 mRNACAT1 mRNA相对表达量相对表达量相对表达量相对表达量日龄日龄日龄日龄y=0.45+0.90 x-0.19xy=0.45+0.90 x-0.19x2 2+0.01x+0.01x3 3-0.0003 x-0.0003 x4 4PepT1 mRNAPepT1 mRNA相对表达量相对表达量相对表达量相对表达量日龄日龄日龄日龄y=-0.41+1.31x-0.22xy=-0.41+1.31x-0.22x2 2+0.01x+0.01x3 3-0.0003 x-0.0003 x4 4空肠后段空肠后段空肠后段空肠后段ASCT1 mRNAASCT1 mRNA相对表达量相对表达量相对表达量相对表达量日龄日龄日龄日龄y=1.83-0.13x+0.0005xy=1.83-0.13x+0.0005x2 2回肠末端回肠末端回肠末端回肠末端ASCT1 mRNAASCT1 mRNA相对表达量相对表达量相对表达量相对表达量日龄日龄日龄日龄y=-0.10+0.29xy=-0.10+0.29xCAT1 mRNACAT1 mRNA相对表达量相对表达量相对表达量相对表达量日龄日龄日龄日龄y=-1.18+2.68x-0.44x2+0.03x3-0.0005 xy=-1.18+2.68x-0.44x2+0.03x3-0.0005 x4 4EAAC1 mRNAEAAC1 mRNA相对表达量相对表达量相对表达量相对表达量日龄日龄日龄日龄y=1.58-0.42x+0.04xy=1.58-0.42x+0.04x2 2-0.0009x-0.0009x3 3PepT1 mRNAPepT1 mRNA相对表达量相对表达量相对表达量相对表达量日龄日龄日龄日龄y=2.09-0.28x+0.01xy=2.09-0.28x+0.01x2 2 1-28d 1-28d 肠道氨基酸肠道氨基酸肠道氨基酸肠道氨基酸ASCT1ASCT1、CAT1CAT1、EAAC1EAAC1或小肽或小肽或小肽或小肽PepT1PepT1转运载体基因转运载体基因转运载体基因转运载体基因mRANmRAN相对表达量相对表达量相对表达量相对表达量(y)(y)与日龄与日龄与日龄与日龄(x)(x)之间曲线方程之间曲线方程之间曲线方程之间曲线方程在空肠前段，在空肠前段，在空肠前段，在空肠前段，ASCT1ASCT1、CAT1CAT1和和和和PepT1PepT1转运载体转运载体转运载体转运载体mRNAmRNA相对表达量均表现为四次方曲线相对表达量均表现为四次方曲线相对表达量均表现为四次方曲线相对表达量均表现为四次方曲线变化，在空肠后段变化，在空肠后段变化，在空肠后段变化，在空肠后段ASCT1 ASCT1 为二次方曲线变化，在回肠末端，为二次方曲线变化，在回肠末端，为二次方曲线变化，在回肠末端，为二次方曲线变化，在回肠末端，ASCT1ASCT1、CAT1CAT1、EAAC1EAAC1和和和和PepT1PepT1分别表现为线性、四次方曲线、三次方曲线和二次方曲线变化趋势。分别表现为线性、四次方曲线、三次方曲线和二次方曲线变化趋势。分别表现为线性、四次方曲线、三次方曲线和二次方曲线变化趋势。分别表现为线性、四次方曲线、三次方曲线和二次方曲线变化趋势。热应激蛋白热应激蛋白热应激蛋白热应激蛋白(HSP)70(HSP)70主要在肠主要在肠主要在肠主要在肠道黏膜表层表达，对维持肠道道黏膜表层表达，对维持肠道道黏膜表层表达，对维持肠道道黏膜表层表达，对维持肠道粘膜结构和功能的完整性起着粘膜结构和功能的完整性起着粘膜结构和功能的完整性起着粘膜结构和功能的完整性起着重要作用。断奶应激使肠道重要作用。断奶应激使肠道重要作用。断奶应激使肠道重要作用。断奶应激使肠道HSP70HSP70含量迅速增加。含量迅速增加。含量迅速增加。含量迅速增加。ControlArgNCG对照组对照组对照组对照组ArgArg组组组组NCGNCG组组组组BHSP70-actinA A日粮添加精氨酸日粮添加精氨酸日粮添加精氨酸日粮添加精氨酸(Arg)(Arg)或精氨酸衍生物或精氨酸衍生物或精氨酸衍生物或精氨酸衍生物(NCG)(NCG)使断奶仔猪空肠黏膜使断奶仔猪空肠黏膜使断奶仔猪空肠黏膜使断奶仔猪空肠黏膜HSP70HSP70表达升高，其中：表达升高，其中：表达升高，其中：表达升高，其中：A A为为为为Western blotWestern blot分析，分析，分析，分析，B B为免疫组化分析为免疫组化分析为免疫组化分析为免疫组化分析应激造成肠道结构与功能变化的分子机制应激造成肠道结构与功能变化的分子机制Wu et al.,2009.Pro Fun Amino Acids Carb:396-408HSP70-actinabbControlArgNCG日粮添加精氨酸日粮添加精氨酸日粮添加精氨酸日粮添加精氨酸(Arg)(Arg)或精氨酸衍生物或精氨酸衍生物或精氨酸衍生物或精氨酸衍生物(NCG)(NCG)使断奶仔猪回肠黏膜使断奶仔猪回肠黏膜使断奶仔猪回肠黏膜使断奶仔猪回肠黏膜HSP70HSP70表达升高表达升高表达升高表达升高精氨酸精氨酸精氨酸精氨酸(Arg)(Arg)及其衍生物及其衍生物及其衍生物及其衍生物(NCG)(NCG)是是是是通过通过通过通过Arg-NO-HSP70Arg-NO-HSP70的途径维持的途径维持的途径维持的途径维持肠道黏膜形态的完整性。肠道黏膜形态的完整性。肠道黏膜形态的完整性。肠道黏膜形态的完整性。Wu et al.,2009.Pro Fun Amino Acids Carb:396-408利用大肠杆菌脂多糖利用大肠杆菌脂多糖利用大肠杆菌脂多糖利用大肠杆菌脂多糖(LPS)(LPS)建立了仔猪断奶应激引起肠道损伤的建立了仔猪断奶应激引起肠道损伤的建立了仔猪断奶应激引起肠道损伤的建立了仔猪断奶应激引起肠道损伤的模型。断奶应激刺激仔猪肠道炎性介质模型。断奶应激刺激仔猪肠道炎性介质模型。断奶应激刺激仔猪肠道炎性介质模型。断奶应激刺激仔猪肠道炎性介质(如如如如IL-1IL-1、IL-6IL-6、TNF-TNF-等炎性细胞因子等炎性细胞因子等炎性细胞因子等炎性细胞因子)的过量表达，引起肠黏膜上皮细胞增殖的过量表达，引起肠黏膜上皮细胞增殖的过量表达，引起肠黏膜上皮细胞增殖的过量表达，引起肠黏膜上皮细胞增殖/凋亡凋亡凋亡凋亡的动态平衡紊乱，从而导致肠道结构和功能严重受损。的动态平衡紊乱，从而导致肠道结构和功能严重受损。的动态平衡紊乱，从而导致肠道结构和功能严重受损。的动态平衡紊乱，从而导致肠道结构和功能严重受损。A A：回肠集合淋巴结增殖细胞分布，箭头所指为增殖阳：回肠集合淋巴结增殖细胞分布，箭头所指为增殖阳：回肠集合淋巴结增殖细胞分布，箭头所指为增殖阳：回肠集合淋巴结增殖细胞分布，箭头所指为增殖阳性细胞；性细胞；性细胞；性细胞；B B：回肠集合淋巴结凋亡细胞分布，：回肠集合淋巴结凋亡细胞分布，：回肠集合淋巴结凋亡细胞分布，：回肠集合淋巴结凋亡细胞分布，箭头所指箭头所指箭头所指箭头所指为调亡阳性细为调亡阳性细为调亡阳性细为调亡阳性细胞。胞。胞。胞。(未作复染色，未作复染色，未作复染色，未作复染色，40)40)ABLPS LPS 组回肠集合淋巴结增殖阳性细胞稀疏组回肠集合淋巴结增殖阳性细胞稀疏组回肠集合淋巴结增殖阳性细胞稀疏组回肠集合淋巴结增殖阳性细胞稀疏(P 0.05)(P 0.05)，说明，说明，说明，说明LPS LPS 刺激抑制回肠刺激抑制回肠刺激抑制回肠刺激抑制回肠集合淋巴结细胞的增殖集合淋巴结细胞的增殖集合淋巴结细胞的增殖集合淋巴结细胞的增殖(A)(A)；与之相反，；与之相反，；与之相反，；与之相反，LPS LPS 组回肠集合淋巴结凋亡阳性细胞组回肠集合淋巴结凋亡阳性细胞组回肠集合淋巴结凋亡阳性细胞组回肠集合淋巴结凋亡阳性细胞显著增多显著增多显著增多显著增多(P 0.05)(P 0.05)，说明，说明，说明，说明LPS LPS 刺激促进了回肠集合淋巴结细胞凋亡刺激促进了回肠集合淋巴结细胞凋亡刺激促进了回肠集合淋巴结细胞凋亡刺激促进了回肠集合淋巴结细胞凋亡(B)(B)。Han et al.,2008.Amino Acids,DOI 10.1007细胞信号转导异常、氧化还原失细胞信号转导异常、氧化还原失细胞信号转导异常、氧化还原失细胞信号转导异常、氧化还原失衡、蛋白合成减少以及蛋白水解衡、蛋白合成减少以及蛋白水解衡、蛋白合成减少以及蛋白水解衡、蛋白合成减少以及蛋白水解增加都是影响宫内发育迟缓仔猪增加都是影响宫内发育迟缓仔猪增加都是影响宫内发育迟缓仔猪增加都是影响宫内发育迟缓仔猪营养物质吸收代谢紊乱以及小肠营养物质吸收代谢紊乱以及小肠营养物质吸收代谢紊乱以及小肠营养物质吸收代谢紊乱以及小肠生长发育受阻的主要机制。生长发育受阻的主要机制。生长发育受阻的主要机制。生长发育受阻的主要机制。高度高度高度高度(mm)(mm)个数个数个数个数宫内发育迟缓宫内发育迟缓宫内发育迟缓宫内发育迟缓(IUGR)(IUGR)仔猪与正常仔猪空肠前段形态学指标比较仔猪与正常仔猪空肠前段形态学指标比较仔猪与正常仔猪空肠前段形态学指标比较仔猪与正常仔猪空肠前段形态学指标比较aabbabIUGRIUGR降低了调控免疫功能、降低了调控免疫功能、降低了调控免疫功能、降低了调控免疫功能、氧化防御、中间代谢、蛋氧化防御、中间代谢、蛋氧化防御、中间代谢、蛋氧化防御、中间代谢、蛋白合成和组织生长等组织白合成和组织生长等组织白合成和组织生长等组织白合成和组织生长等组织特异蛋白的水平，增加了特异蛋白的水平，增加了特异蛋白的水平，增加了特异蛋白的水平，增加了与蛋白水解、氧化应激和与蛋白水解、氧化应激和与蛋白水解、氧化应激和与蛋白水解、氧化应激和ATPATP水解有关蛋白的水平。水解有关蛋白的水平。水解有关蛋白的水平。水解有关蛋白的水平。IUGRIUGR影响新生仔猪小肠功能的分子机制影响新生仔猪小肠功能的分子机制影响新生仔猪小肠功能的分子机制影响新生仔猪小肠功能的分子机制有机微量元素1.常用微量元素：常用微量元素：Fe，Cu，Mn，Zn，Co，Cr，I，Se，2.常用络合物配位体：常用络合物配位体：氨基酸（氨基酸（Lys、Met、Gly、Thr、Ser、Glu、Asp、蛋白质水解产物）、蛋白质水解产物）维生素（烟酸、维生素（烟酸、VC、VB12）小肽、蛋白盐小肽、蛋白盐主要进展主要进展-3-3有机微量元素在国内的应用有机微量元素在国内的应用 在在20042004年以前，国内市场以有机微量元素螯合年以前，国内市场以有机微量元素螯合物单体的推广应用为主（天科）物单体的推广应用为主（天科）在在20042004年之后，国内螯合物应用由有机微量元年之后，国内螯合物应用由有机微量元素螯合物单体向有机微量元素复合矿精发展素螯合物单体向有机微量元素复合矿精发展 （天科）（天科）近几年，有机微量元素在国内的普及程度得到近几年，有机微量元素在国内的普及程度得到了很大的飞跃，在乳猪料、母猪料和水产料中了很大的飞跃，在乳猪料、母猪料和水产料中使用广泛（天科）使用广泛（天科）功能性有机微量元素功能性有机微量元素鉴定方法鉴定方法a.客户往往很关心你的产品是不是螯合物客户往往很关心你的产品是不是螯合物?（混合（混合物）物）b.用简单的化学、鉴定和定性，用简单的化学、鉴定和定性，(颜色反应、显微镜颜色反应、显微镜镜检镜检)结合定量鉴定分析来鉴别结合定量鉴定分析来鉴别c.理化分析方法（红外光谱、示差测热、理化分析方法（红外光谱、示差测热、X射线衍射线衍射）射）目前目前,各厂家提出的螯合物的检验方法和鉴定各厂家提出的螯合物的检验方法和鉴定方法很多方法很多,这近我们提出分光光度法来检测这近我们提出分光光度法来检测,但由于但由于各方争议的分歧也较大各方争议的分歧也较大,还没有形成一致的意见还没有形成一致的意见,这这里不过多展开里不过多展开微量元素氨基酸螯合物对维生素的影响预混料中微量元素和胆碱对维生素预混料中微量元素和胆碱对维生素A稳定性的影响稳定性的影响 表：在胆碱存在时微量元素对维生素表：在胆碱存在时微量元素对维生素A稳定性的影响稳定性的影响 微量元素微量元素 胆碱胆碱 30天损失率天损失率 45天损失率天损失率 月平均损失率月平均损失率 无机盐无机盐 安全化处理安全化处理 62.840.07 79.800.03 53.20 无机盐无机盐 市售市售 66.510.00 89.150.04 59.43 氨基酸螯合物氨基酸螯合物 安全化处理安全化处理 24.000.07 57.270.09 35.14 氨基酸螯合物氨基酸螯合物 市售市售 22.220.04 41.440.10 27.63 不同类型载体、微量元素和胆碱对维生素B1稳定性的影响 微量元素 载体 胆碱 30天损失率 45天损失率 月平均损失率 无机盐 沸石 安全化 48.150.01 73.820.07 49.21 氨基酸螯合物氨基酸螯合物 沸石沸石 安全化安全化 7.09 0.09 22.200.14 14.80 无机盐 石粉 安全化 84.750.01 87.810.02 58.54 氨基酸螯合物氨基酸螯合物 石粉石粉 安全化安全化 36.400.09 75.580.07 50.39 无机盐 沸石 市售 21.000.12 41.140.11 27.43 氨基酸螯合物氨基酸螯合物 沸石沸石 市售市售 -0.040.01 38.810.05 25.88 无机盐 石粉 市售 81.280.05 91.260.02 60.84 氨基酸螯合物氨基酸螯合物 石粉石粉 市售市售 62.670.14 78.360.08 52.24 微量元素氨基酸螯合物对维生素的影响微量元素氨基酸螯合物对维生素的影响在胆碱存在时微量元素对维生素在胆碱存在时微量元素对维生素A稳稳定性的影响定性的影响微量元素 胆 碱 30天损失率(%)45天损失率(%)月平均损失率(%)无机盐 安全化处理 62.840.07 79.800.03 53.20 无机盐 市 售 66.510.00 89.150.04 59.43 氨基酸螯合物氨基酸螯合物 市售市售 24