人教版教学蛋白质还原糖脂肪的鉴定实验.pptx

1、实验原理：、实验原理：（1）斐林试剂斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的颜色变化为：由鉴定还原糖时，溶液的颜色变化为：由蓝色蓝色变变成成砖红色砖红色(沉淀沉淀)。斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否，而不能鉴定非还原性糖。在与否，而不能鉴定非还原性糖。葡萄糖、麦芽糖、果糖葡萄糖、麦芽糖、果糖是还原糖。是还原糖。（2）苏丹苏丹染液染液遇脂肪的颜色反应为遇脂肪的颜色反应为橘黄色橘黄色，苏丹苏丹染液染液遇遇脂肪的颜色反应为脂肪的颜色反应为红色红色。（3）双缩脲试剂双缩脲试剂的成分是质量浓度为的成分是质量浓度为0.1gmL的氢氧化钠溶的氢氧化钠溶液和质量浓度为液和质量浓度为0.01gmL的硫酸铜溶液。蛋白质可与双的硫酸铜溶液。蛋白质可与双缩脲试剂产生缩脲试剂产生紫色紫色反应反应。2、实验目的：、实验目的：尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质3、实验选材：、实验选材：（1）做可溶性还原性糖鉴定实验，应选）做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高含糖高，颜色，颜色为为白色的白色的植物组织，如苹果、梨。（因为组织的颜色较植物组织，如苹果、梨。（因为组织的颜色较浅，易于观察。）浅，易于观察。）（2）做脂肪的鉴定实验。应选）做脂肪的鉴定实验。应选富富含脂肪的种子，以花含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡生种子为最好，实验前一般要浸泡34小时（也可用蓖小时（也可用蓖麻种子）。麻种子）。（3）做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆或）做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。鸡蛋清。4、实验试剂、实验试剂斐林试剂（包括甲液：质量浓度为斐林试剂（包括甲液：质量浓度为0.1g/mLNaOH溶液和溶液和乙液：质量浓度为乙液：质量浓度为0.05g/mLCuSO4溶液）、溶液）、苏丹苏丹或苏丹或苏丹染液、染液、双缩脲试剂（包括双缩脲试剂（包括A液：质量浓度为液：质量浓度为0.1g/mLNaOH溶液溶液和和B液：质量浓度为液：质量浓度为0.01g/mLCuSO4溶液）、溶液）、体积分数为体积分数为50%的酒精溶液，碘液、蒸馏水。的酒精溶液，碘液、蒸馏水。5、方法步骤：方法步骤：（）可溶性（）可溶性还原糖还原糖糖的鉴定糖的鉴定操操作作方方法法注注意意问问题题解解释释1.制备组织样液。制备组织样液。（去皮、切块、研磨、过滤）（去皮、切块、研磨、过滤）苹果或梨组织液必须临时苹果或梨组织液必须临时制备制备因苹果多酚氧化酶含量高，组因苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易被氧化成褐色，将产织液很易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。生的颜色掩盖。2.取取1支试管，向试管内注支试管，向试管内注入入2mL组织样液。组织样液。3.向试管内注入向试管内注入1mL新制新制的斐林试剂，振荡。的斐林试剂，振荡。应将组成斐林试剂的甲液、应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存，使乙液分别配制、储存，使用前才将甲、乙液等量混用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂；匀成斐林试剂；切勿将甲液、乙液分别加切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检入苹果组织样液中进行检测。测。斐林试剂很不稳定，甲、乙液斐林试剂很不稳定，甲、乙液混合保存时，生成的混合保存时，生成的Cu(OH)2在在7090下分解成黑色下分解成黑色CuO和水；和水；甲、乙液分别加入时可能会与甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应，无组织样液发生反应，无Cu(OH)2生成。生成。4.试管放在盛有试管放在盛有50-65温温水的大烧杯中，加热约水的大烧杯中加热约2分分钟，观察到溶液颜色：浅蓝钟，观察到溶液颜色：浅蓝色色棕色棕色砖红色（沉淀）砖红色（沉淀）最好用试管夹夹住试管上最好用试管夹夹住试管上部，使试管底部不触及烧部，使试管底部不触及烧杯底部，试管口不朝向实杯底部，试管口不朝向实验者。验者。防止试管内的溶液冲出试管，防止试管内的溶液冲出试管，造成烫伤；造成烫伤；操操 作作 方方 法法注注 意意 问问 题题解解 释释花生种子浸泡、去皮、切下一些花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片，将薄片放在载玻片子叶薄片，将薄片放在载玻片的水滴中，用吸水纸吸去装片的水滴中，用吸水纸吸去装片中的水。中的水。干种子要浸泡干种子要浸泡3434小时，新花生小时，新花生的浸泡时间可的浸泡时间可缩短。缩短。因为浸泡时间短，不易切片，因为浸泡时间短，不易切片，浸泡时间过长，组织较软，浸泡时间过长，组织较软，切下的薄片不易成形。切切下的薄片不易成形。切片要尽可能薄些，便于观片要尽可能薄些，便于观察。察。在子叶薄片上滴在子叶薄片上滴2323滴苏丹滴苏丹或苏或苏丹丹染液，染色染液，染色1 1分钟。分钟。染色时间不宜过长。染色时间不宜过长。用吸水纸吸去薄片周围染液，用用吸水纸吸去薄片周围染液，用50%50%酒精洗去浮色，吸去酒精。酒精洗去浮色，吸去酒精。酒精用于洗去浮色，不洗去浮酒精用于洗去浮色，不洗去浮色，会影响对橘黄色脂肪色，会影响对橘黄色脂肪滴的观察。同时，酒精是滴的观察。同时，酒精是脂溶性溶剂，可将花生细脂溶性溶剂，可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。滴。用吸水纸吸去薄片周围酒精，滴用吸水纸吸去薄片周围酒精，滴上上1212滴蒸馏水，盖上盖玻片。滴蒸馏水，盖上盖玻片。滴上清水可防止盖盖玻片时产滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。生气泡。低倍镜下找到花生子叶薄片的最低倍镜下找到花生子叶薄片的最薄处，可看到细胞中有染成橘薄处，可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗粒。黄色或红色圆形小颗粒。装片不宜久放。装片不宜久放。时间一长，油滴会溶解在乙醇时间一长，油滴会溶解在乙醇中。中。（）脂肪的鉴定）脂肪的鉴定（）蛋白质的鉴定蛋白质的鉴定操操 作作 方方 法法注注 意意 问问 题题解解 释释制备组织样液。制备组织样液。（浸泡、去皮研磨、过（浸泡、去皮研磨、过滤。）滤。）黄豆浸泡黄豆浸泡1 1至至2 2天，容易研磨成天，容易研磨成浆，也可购新鲜豆浆以节约浆，也可购新鲜豆浆以节约实验时间。实验时间。鉴定。加样液约鉴定。加样液约2ml2ml于试管于试管中，加入双缩脲试剂中，加入双缩脲试剂A A，摇匀；再加入双缩脲试摇匀；再加入双缩脲试剂剂B B液液3434滴，摇匀，溶滴，摇匀，溶液变紫色。液变紫色。A A液和液和B B液也要分开配液也要分开配制，储存。鉴定时先制，储存。鉴定时先加加A A液后加液后加B B液。液。CuSO4CuSO4溶液不能多加。溶液不能多加。先加先加NaOHNaOH溶液，为溶液，为Cu2+Cu2+与蛋与蛋白质反应提供一个碱性的环白质反应提供一个碱性的环境。境。A A、B B液混装或同时加入，液混装或同时加入，会导致会导致Cu2+Cu2+变成变成Cu(OH)Cu(OH)2 2沉淀，而失效。沉淀，而失效。否则否则CuSO4CuSO4的蓝色会遮盖反应的蓝色会遮盖反应的真实颜色。的真实颜色。可用蛋清代替豆浆。可用蛋清代替豆浆。蛋清要先稀释。蛋清要先稀释。如果稀释不够，在实验中蛋清如果稀释不够，在实验中蛋清粘在试管壁，与双缩脲试剂粘在试管壁，与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上，反应后会粘固在试管内壁上，使反应不容易彻底，并且试使反应不容易彻底，并且试管也不易洗干净。管也不易洗干净。附：淀粉的检测和观察附：淀粉的检测和观察用试管取用试管取2ml2ml待测组织样待测组织样液，向试管内滴加液，向试管内滴加2 2滴碘滴碘液，观察颜色变化。液，观察颜色变化。碘液不要滴太多碘液不要滴太多以免影响颜色观察以免影响颜色观察6、讨论讨论:v(1)选取富含还原糖的生物材料时选取富含还原糖的生物材料时,能用甘蔗或者橘子吗能用甘蔗或者橘子吗?为什为什么么?v答答:不行不行.橘子本身富含色素橘子本身富含色素,会掩盖颜色反应的结果会掩盖颜色反应的结果;而甘蔗不而甘蔗不含还原糖含还原糖,蔗糖不是还原糖蔗糖不是还原糖.v(2)斐林试剂和双缩脲试剂有哪些区别？斐林试剂和双缩脲试剂有哪些区别？va溶液浓度不同溶液浓度不同:斐林试剂中斐林试剂中CuSO4溶液为溶液为0.05g/mL,v双缩脲试剂中双缩脲试剂中CuSO4溶液为溶液为0.01g/mLvb使用原理不同使用原理不同:斐林试剂实质是新制斐林试剂实质是新制Cu(OH)2沉淀沉淀,v双缩脲试剂实质是碱性条件下的双缩脲试剂实质是碱性条件下的Cu2+vc使用方法不同使用方法不同:斐林试剂使用时斐林试剂使用时,先把先把NaOH溶液和溶液和CuSO4溶液混合溶液混合,然后立即使用然后立即使用;双缩脲试剂是先加双缩脲试剂是先加NaOH溶液溶液,然后然后再加入再加入3至至4滴滴CuSO4溶液溶液7、练习与巩固、练习与巩固(1)检查尿液中有无葡萄糖检查尿液中有无葡萄糖,下列试剂中可选用的是下列试剂中可选用的是()A.斐林试剂斐林试剂B.碘液碘液C.双缩脲试剂双缩脲试剂D.二苯胺二苯胺(2)下列生物材料中，可用于还原糖鉴定的是下列生物材料中，可用于还原糖鉴定的是()A.柑橘柑橘B.苹果苹果C.新鲜肝脏新鲜肝脏D.甘蔗甘蔗AB