G蛋白与信号转导.pptx

目的要求目的要求】1掌握掌握G蛋白、小蛋白、小G蛋白的概念；蛋白的概念；G蛋白基蛋白基本结构。本结构。2熟悉熟悉G蛋白的种类；蛋白的种类；G蛋白通过蛋白通过AC和和PLC的信号转导机制。的信号转导机制。3了解了解G蛋白的发现和意义；蛋白的发现和意义；G蛋白通过某蛋白通过某些受体门控离子通道和些受体门控离子通道和cGMP-PDE的信号转的信号转导机制；小导机制；小G蛋白的特点。蛋白的特点。G 蛋白蛋白：是鸟苷酸结合蛋白（是鸟苷酸结合蛋白（guanosine nucleotide-binding protein）的简称，是）的简称，是指能与指能与 GTP 或或 GDP 结合，与膜受体偶联结合，与膜受体偶联而具有信号转导作用的蛋白质。而具有信号转导作用的蛋白质。一、一、G 蛋白概况蛋白概况（一）（一）G 蛋白的发现和意义蛋白的发现和意义Rodbell 等在等在 20 世纪世纪 70 年代发现跨年代发现跨膜信号转导需要膜信号转导需要 GTP 存在。存在。1977年，年，Gilman发现了发现了G蛋白。蛋白。1981年，年，Gilman纯化了纯化了G蛋白。蛋白。1994年，年，Gilman 和和 Rodbell 获医学获医学和生理学诺贝尔奖。和生理学诺贝尔奖。吉尔曼吉尔曼（Alfred G.Gilman）1941.7.1 德克萨斯大学西南医学中心药学系德克萨斯大学西南医学中心药学系 发现发现G 蛋白的意义：蛋白的意义：它揭示了细胞外信号如何转换为细胞它揭示了细胞外信号如何转换为细胞内信号的真正机制，从而开辟了细胞信号内信号的真正机制，从而开辟了细胞信号跨膜转导研究的新时代。跨膜转导研究的新时代。G 蛋白：蛋白：与细胞膜受体偶联的与细胞膜受体偶联的G蛋白由蛋白由3个不同个不同的亚基组成，又称为异三聚体的亚基组成，又称为异三聚体G蛋白。蛋白。小小G蛋白：蛋白：分散在细胞内有类似分散在细胞内有类似G蛋白作用的单体蛋白作用的单体蛋白，因分子量小而得名。如蛋白，因分子量小而得名。如ras表达产物。表达产物。（二）（二）G蛋白基本结构蛋白基本结构位于细胞膜的胞浆侧位于细胞膜的胞浆侧。G蛋白由三个亚基组成：蛋白由三个亚基组成：G：3946kD，20多种，有多种，有GTP或或GDP结合位点、结合位点、GTP酶活性、酶活性、ADP核糖基核糖基化位点、毒素修饰位点及受体和效应器结化位点、毒素修饰位点及受体和效应器结合位点等。合位点等。G：36kD，6种。种。G ：78kD，10多种。多种。G蛋白有两种构象形式：蛋白有两种构象形式：活化型：活化型：G 与与GTP结合，与结合，与G 分离。分离。非非活化型：活化型：G 与与GDP结合，与结合，与G 结结合成三聚体。合成三聚体。活化型活化型非非活化型活化型（三）（三）G蛋白的种类蛋白的种类1.Gs型型G蛋白蛋白激活激活AC，激活钙通道，抑制钠通道，激活钙通道，抑制钠通道。2.Gi型型G蛋白蛋白抑制抑制AC，抑制钙通道，活化钾通道、，抑制钙通道，活化钾通道、PLC和和PLA2。Gs型与型与Gi型型G蛋白的作用蛋白的作用3.Gt型型G蛋白蛋白分布在视网膜的感光细胞，与视紫红分布在视网膜的感光细胞，与视紫红质结合，激活质结合，激活cGMP-PDE，传递光反应冲，传递光反应冲动。动。4.Gg、Go 及及 Gq 型型 G 蛋白蛋白 Gg 是味蕾组织中的一种是味蕾组织中的一种 G 蛋白，与蛋白，与味觉的信号转导有关。味觉的信号转导有关。Go 存在于脑组织中，能调节磷脂代谢，存在于脑组织中，能调节磷脂代谢，可能与肌醇磷酸信号转导有关。可能与肌醇磷酸信号转导有关。Gq 与磷脂代谢有关，其活性不受细胞与磷脂代谢有关，其活性不受细胞毒素的修饰。毒素的修饰。5.G 蛋白的蛋白的亚基亚基活化的活化的亚基复合物也可直接激活胞亚基复合物也可直接激活胞内靶分子，具有传递信号的功能。如心肌内靶分子，具有传递信号的功能。如心肌细胞中细胞中G蛋白偶联受体在乙酰胆碱刺激下，蛋白偶联受体在乙酰胆碱刺激下，活化的活化的亚基复合物能开启质膜上的亚基复合物能开启质膜上的K+通通道，改变心肌细胞的膜电位。道，改变心肌细胞的膜电位。二、二、G 蛋白信号转导机制蛋白信号转导机制（一）（一）G 蛋白通过蛋白通过 AC 的信号转导机制的信号转导机制1.信号分子结合改变受体构象；信号分子结合改变受体构象；2.受体与受体与 G 蛋白结合并使其激活；蛋白结合并使其激活；3.GTP 取代取代 GDP，G 游离；游离；4.G 结合并激活结合并激活 AC，产生，产生 cAMP；5.GTP 水解，水解，G 与与 再结合。再结合。Gs型型G蛋白的蛋白的 亚基通过与受体和亚基通过与受体和AC的结合和解离达到信号跨膜传递的介导和的结合和解离达到信号跨膜传递的介导和终止，终止，GDP与与GTP的互变起触媒作用。的互变起触媒作用。实验一、用非水解实验一、用非水解GTP类似物类似物GMP-P(NH2)P代替代替GTP。实验二、霍乱毒素（实验二、霍乱毒素（cholera toxin）实验实验霍乱毒素能催化霍乱毒素能催化ADP核糖基共价结合核糖基共价结合到到Gs的的 亚基亚基上，致使上，致使 亚基丧失亚基丧失GTP酶酶的活性，使的活性，使 亚基处于持续活化状态亚基处于持续活化状态，腺，腺苷酸环化酶永久性活化。导致霍乱病患者苷酸环化酶永久性活化。导致霍乱病患者细胞内细胞内Na+和水持续外流，产生严重腹泻和水持续外流，产生严重腹泻而脱水。而脱水。Gs NAD+ADP-ribosylation Nicotinamide22-kD subunit of cholera toxin腺苷腺苷腺苷腺苷 百日咳毒素（百日咳毒素（Pertussis toxin）作用作用百日咳毒素能催化百日咳毒素能催化Gi 发生发生ADP核核糖基化，致使糖基化，致使 亚基的亚基的GTP与与GDP交换抑交换抑制，使制，使 亚基处于持续非活化状态亚基处于持续非活化状态，因此，因此不能抑制不能抑制AC，使，使cAMP浓度升高。导致患浓度升高。导致患儿阵发性痉挛性咳嗽，即百日咳儿阵发性痉挛性咳嗽，即百日咳(whooping cough)。（二）（二）G蛋白通过某些受体门控离子通道的信蛋白通过某些受体门控离子通道的信号转导机制号转导机制G蛋白蛋白神经递质神经递质受体受体ACcAMPPKA离子通道离子通道receptorG protein Subunit breaks away,binds with ion channel and opens itReceptor activates G proteinMolecule of transmitter substance binds with receptorIons enter cell,produce postsynaptic potentialTo nucleus or other parts of cell subunit breaks away,activates enzyme,which produces second messenger Ion channel opens Molecule of transmitter substance binds with receptorIons enter cell,produce postsynaptic potentialG proteinReceptor activates G protein例：例：迷走神经兴奋迷走神经兴奋Ach M受体受体 G K通道开放通道开放 膜超极化膜超极化（三）（三）G 蛋白通过蛋白通过 PLC 的信号转导机制的信号转导机制G 蛋白激活蛋白激活 PLC，PLC 催化膜磷脂催化膜磷脂PIP2 产生产生 IP3 和和 DAG 两种第二信使，再两种第二信使，再分别调节细胞中分别调节细胞中 Ca2 的浓度和的浓度和 PKC 的的活性。活性。钙通道钙通道（四）（四）G 蛋白通过蛋白通过 cGMP-PDE 的信号转导的信号转导机制机制发生在视网膜上。发生在视网膜上。Gt光刺激光刺激视紫红质视紫红质PDEcGMP5-GMP通过激活通过激活GTP酶活性中止酶活性中止G蛋白信号蛋白信号的机制：的机制：1.磷脂酶磷脂酶G蛋白蛋白磷脂酶磷脂酶C 磷脂酶磷脂酶A2第二信使第二信使GTP酶酶2.G蛋白信号调节因子（蛋白信号调节因子（regulator of G-protein signaling，RGS）RGS能在能在Mg2的存在下，激活的存在下，激活G蛋白蛋白的的GTP酶，因此又叫酶，因此又叫GTP酶激活蛋白酶激活蛋白（GTPase activating protein，GAP）。）。（五）小（五）小G 蛋白蛋白小小G蛋白是一个家族的总称，其成员有蛋白是一个家族的总称，其成员有60多种，与信号转导有关的典型代表有多种，与信号转导有关的典型代表有Ras、Rho等。等。特点：特点：1.分子量小：分子量小：2030kD2.结构相对简单：一条肽链。结构相对简单：一条肽链。3.受体调节的范围有限：主要受控于受体调节的范围有限：主要受控于酪氨酸蛋白激酶受体的调节。酪氨酸蛋白激酶受体的调节。4.信号转导时还需要其他蛋白辅助：信号转导时还需要其他蛋白辅助：接头蛋白接头蛋白（adaptor）将酪氨酸蛋白激酶）将酪氨酸蛋白激酶受体连于受体连于鸟苷酸释放因子鸟苷酸释放因子（guanine-nucleotide releasing factor，GRF）上，）上，然后然后GRF再作用于小再作用于小G蛋白。蛋白。GRF：包括正调控因子：包括正调控因子GDS（GDP dissociation stimulator）和负调控因子和负调控因子GDI（GDP dissociation inhibitor）。）。还需还需GTP酶激活蛋白（酶激活蛋白（GTPase activating protein，GAP）提高）提高GTP酶酶活性，并将小活性，并将小G蛋白转导过来的信号往下蛋白转导过来的信号往下游传递。游传递。Ras三、三、G 蛋白与临床疾病蛋白与临床疾病（一）（一）G 蛋白与心脏疾病蛋白与心脏疾病G蛋白的信号转导在心脏心肌收缩力、蛋白的信号转导在心脏心肌收缩力、心率、心律和心肌细胞生长的调节方面起心率、心律和心肌细胞生长的调节方面起着重要作用。着重要作用。1.心脏心脏G蛋白亚单位的种类及功能蛋白亚单位的种类及功能Gs型型G蛋白：蛋白：心脏中主要表达心脏中主要表达42kD和和52kD两种亚两种亚型。它们主要通过型。它们主要通过AC-cAMP-PKA通路介通路介导导 肾上腺素能受体的信号转导途径。生肾上腺素能受体的信号转导途径。生理情况下，起到增加心肌收缩力和频率的理情况下，起到增加心肌收缩力和频率的作用。作用。Gi型型G蛋白：蛋白：Gi1 、Gi2、Gi3 心脏中主要表达心脏中主要表达Gi2 。它与。它与 2肾上肾上腺素能受体偶联，抑制腺素能受体偶联，抑制AC的活性。它还的活性。它还介导介导M2-胆碱能受体激动剂的钾离子通道胆碱能受体激动剂的钾离子通道激活作用，还能与钙通道蛋白直接偶联，激活作用，还能与钙通道蛋白直接偶联，调节心率。调节心率。Gq型型G蛋白：蛋白：心脏中表达两种亚型心脏中表达两种亚型。均激活磷脂。均激活磷脂酶酶C-，介导血管紧张素，介导血管紧张素、1肾上腺素肾上腺素能受体的信号传递。能受体的信号传递。G12型型G蛋白：蛋白：G12 主要调节细胞生长和激活主要调节细胞生长和激活Na-H交换体系交换体系。G蛋白蛋白 和和 亚单位在心肌细胞中也一亚单位在心肌细胞中也一定程度地影响定程度地影响AC、PLC-、PLA2、-肾上腺素能受体激酶（肾上腺素能受体激酶（-adrenergic receptor kinase，-ARK）、）、K通道通道以及以及Ras-MAPK信使通路。信使通路。2.心脏疾病中心脏疾病中G蛋白的改变蛋白的改变（1）心肌肥大：）心肌肥大：Gi 的含量和功能明显增加，是造成的含量和功能明显增加，是造成肥大心肌脱敏的主要原因。肥大心肌脱敏的主要原因。应用血管转化应用血管转化酶抑制剂可以降低酶抑制剂可以降低Gi 的含量，缓解脱敏的含量，缓解脱敏反应。反应。（2）心力衰竭：）心力衰竭：Gs 的生物活性降低。的生物活性降低。Gi 亚基的含量增加。亚基的含量增加。（3）心肌缺血与心律失常：）心肌缺血与心律失常：急性心肌缺血初期，交感神经应激急性心肌缺血初期，交感神经应激性兴奋，血中儿茶酚胺浓度急剧上升，性兴奋，血中儿茶酚胺浓度急剧上升，AC活性短暂增加。活性短暂增加。急性缺血后，急性缺血后，Gs 和和Gi 的含量均降的含量均降低，活性下降。低，活性下降。（二）（二）G 蛋白与疼痛蛋白与疼痛G蛋白偶联受体的部分成员与痛觉递质蛋白偶联受体的部分成员与痛觉递质结合，形成痛觉的信号转导过程。结合，形成痛觉的信号转导过程。脊髓的脊髓的G蛋白受体如代谢型谷氨酸和神蛋白受体如代谢型谷氨酸和神经肽受体在伤害性信号转导过程中发挥重经肽受体在伤害性信号转导过程中发挥重要的作用。如给予抑制剂则能降低痛的感要的作用。如给予抑制剂则能降低痛的感觉程度。觉程度。阿片类药物的大多数受体与阿片类药物的大多数受体与G蛋白偶蛋白偶联产生信号转导。因此它们的镇痛与成瘾联产生信号转导。因此它们的镇痛与成瘾都与都与G蛋白有关。蛋白有关。（三）（三）G 蛋白与创伤应激状态下的免疫抑制蛋白与创伤应激状态下的免疫抑制在创伤、手术等应激状态时，大量应激在创伤、手术等应激状态时，大量应激激素如激素如ACTH、皮质酮、儿茶酚胺及、皮质酮、儿茶酚胺及 内啡内啡肽等被释放，它们均通过其受体与肽等被释放，它们均通过其受体与G蛋白蛋白偶联，导致免疫功能抑制。偶联，导致免疫功能抑制。G蛋白导致免疫功能抑制的机制：蛋白导致免疫功能抑制的机制：淋巴细胞的发育、分化与淋巴细胞的发育、分化与G蛋白的表达蛋白的表达关系密切，巨噬细胞在创伤后的活动程度关系密切，巨噬细胞在创伤后的活动程度受受G蛋白的调节；蛋白的调节；内啡肽既能增强又能抑制免疫功能，内啡肽既能增强又能抑制免疫功能，T细胞和巨噬细胞膜上细胞和巨噬细胞膜上 内啡肽受体与内啡肽受体与G蛋白蛋白偶联。偶联。（四）（四）G 蛋白与炎症蛋白与炎症中性粒细胞的延迟凋亡是组织操作的主中性粒细胞的延迟凋亡是组织操作的主要原因，而该细胞的延迟凋亡与要原因，而该细胞的延迟凋亡与G蛋白表蛋白表达改变有关。达改变有关。重要的炎症介质受体均与重要的炎症介质受体均与G蛋白偶联。蛋白偶联。血小板活化因子的大量释放，可活化血血小板活化因子的大量释放，可活化血小板，促进多种炎症介质的级联反应。其小板，促进多种炎症介质的级联反应。其受体与受体与Gq偶联。偶联。