三江源7个糙毛以礼草植物学形态及遗传多样性分析_任建东.pdf

DOI:10.11829/j.issn.1001-0629.2022-0229任建东，王晓醒，马晓岗，马瑞强，李长慧.三江源 7 个糙毛以礼草植物学形态及遗传多样性分析.草业科学,2023,40(1):249-257.RENJD,WANGXX,MAXG,MARQ,LICH.BotanicalmorphologyandgeneticdiversityanalysisofsevenKengyilia hirsutagermplasmsintheareasofSanjiangyuan.PrataculturalScience,2023,40(1):249-257.三江源 7 个糙毛以礼草植物学形态及遗传多样性分析任建东1,2，王晓醒3，马晓岗2，马瑞强1，李长慧2（1.北京绿氮生物科技有限公司,北京100081；2.青海大学农牧学院,青海西宁810016；3.中国农科院农业资源与农业区划研究所,北京100081）摘要：通过对三江源地区的 7 份糙毛以礼草(Kengyilia hirsuta)穗部性状指标主成分分析、染色体组核型分析及标签-简单序列重复(EST-SSR)分子标记分析，旨在阐明糙毛以礼草种质的形态学差异及种质间遗传多样性，为牧草育种和麦类作物改良提供理论依据。结果表明：糙毛以礼草的不同穗部性状间的变异系数差异较大，其中桴毛的差异最大；在穗部大小及密度、小穗特征是引起差异的 3 个主成分，颖长、稃毛长、穗长、穗宽指标是造成糙毛以礼草形态性状差异的主要因素；海晏糙毛以礼草的种质内差异最大。7 份糙毛以礼草种质均为六倍体，染色体数目为42 条，中部着丝点染色体为主要染色体类型；在不同类型的着丝点染色体数目、有无随体上表现出了丰富的多态性；核型指标多样性丰富，其中贵德糙毛以礼草、海晏糙毛以礼草为 2C 型，其余种质均为 2B 型；共和糙毛以礼草进化程度最高，海晏糙毛以礼草次之，莫湘滩糙毛以礼草最低。在 EST-SSR 多样性分析中，海晏糙毛以礼草和刚察糙毛以礼草两个种质与其他种质遗传距离相对较远。关键词：糙毛以礼草；穗部性状分析；核型分析；EST-SSR；种质资源；进化趋势；遗传距离文献标志码：A文章编号：1001-0629(2023)01-0249-09Botanical morphology and genetic diversity analysis of seven Kengyilia hirsutagermplasms in the areas of SanjiangyuanRENJiandong1,2,WANGXiaoxing3,MAXiaogang2,MARuiqiang1,LIChanghui2(1.BeijingGreenBioTechnologyLimitedCompany,Beijing100081,China;2.AgricultureandAnimalHusbandryCollageofQinghaiUniversity,Xining810016,Qinghai,China;3.InstituteofAgriculturalResourcesandRegionalPlanning,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Beijing100010,China)Abstract:Theprincipalcomponentanalysisofpanicletraits,karyotypeanalysis,andEST-SSRmolecularmarkeranalysiswerecarriedoutonsevenKengyilia hirsutamaterialsintheareasofSanjiangyuan.ThiswasdonetorevealthegeneticdiversityandmorphologicaldifferenceofK.hirsutagermplasms,andprovideatheoreticalbasisforforagebreedingandwheatcropimprovement.TheresultsshowedthatthevariationcoefficientsofdifferentpaniclecharactersofK.hirsutaweredifferent,andthevariationinK.hirsutawasthelargest.Spikesize,spikedensity,andspikeletcharacteristicswerethethreemainfactorscausingthedifference.Glumelength,lemmalength,spikelength,andspikewidthwerethemainfactorsbehindthedifferentmorphologicalcharacters.ThedifferenceobservedinthegermplasmofHaiyanK.hirsutawasthelargest.The收稿日期：2022-03-22接受日期：2022-05-05基金项目：青海省科技厅基础研究计划(20119-ZJ-7041)；国家重点研发计划(2021YFD1000101)第一作者：任建东(1985-)，男，甘肃会宁人，农艺师，硕士，主要从事农业资源创新利用工作。E-mail:通信作者：李长慧(1969-)，男，山东齐河人，教授，博士，主要从事牧草饲料资源与利用研究。E-mail:第40卷第1期草业科学249-257Vol.40,No.1PRATACULTURALSCIENCE1/2023http:/sevenK.hirsutamaterialsallwerehexaploid,with42chromosomes,andthecentralcentromericchromosomewasthemainchromosometype.Therewereabundantpolymorphismsindifferenttypesofcentromericchromosomenumberswhetherornottherewerechaperonespresent.Thediversityofkaryotypeindexeswasrich,amongwhichGuideK.hirsutaandHaiyanK.hirsutawerethe2Ctype,andtheothergermplasmswerethe2Btype.TheevolutiondegreeofGongheswasthehighest,thatofHaiyanswasthesecondhighest,andthatofMoxiangtanswasthelowest.IntheEST-SSRdiversityanalysis,thegeneticdistancebetweenHaiyanK.hirsutaandGangchaK.hirsutawererelativelyfarfromthatofothergermplasms.Keywords:Kengyilia hirsuta;panicletraitanalysis;karyotypeanalysis;EST-SSR;germplasmresource;trendofevolution;geneticdistanceCorresponding author:LIChanghuiE-mail:糙毛以礼草(Kengyilia hirsuta)是禾本科(Poaceae)小麦族(Triticeae)以礼草属(Kengyilia)的多年生草本植物，染色体组类型为 StYP 型，广泛分布于我国青藏高原、川西高原以及部分中亚和西亚国家1。糙毛以礼草植物学特征介于冰草(Agropyroncristatum)与鹅观草(Roegneria kamoji)之间，是以礼草属的优势种群之一，主要分布于海拔 28004200m 的高寒草甸、阳坡滩地及沟谷地带，具有较强的抗寒、抗旱及固土能力，对保持高原生态稳定具有重要意义2。由于三江源地区地貌类型差异较大，缺氧、低温、干旱、土壤盐渍化、荒漠化，物种为长期适应不同环境条件，产生了多样的形态特征和珍贵的遗传资源3。近年来，在远缘杂交、染色体易位创质、基因工程精准利用等现代遗传学领域中，野生近缘植物作为优异种质资源在新品种培育中广泛被应用4-6。糙毛以礼草以其耐寒、耐旱、抗盐碱等特性，在禾本科饲草、草坪草种改良中已开始被应用；又以其遗传资源丰富的特征，在麦类品种改良方面具有较大潜力7。同时糙毛以礼草也因其具较强适应高原沙化的特点，作为高寒沙地修复的重要物种，已在高原生态修复、高原草场恢复中展开研究与应用8-9。物种的植物学形态是由内部基因和外界环境共同影响的结果，虽不同生境的群体在表型上有所差异，但形态学调查仍是多样性分析中一种直接、有效的方法；在小麦族的野生近缘种冰草的多样性调查中发现穗部性状受环境影响较小，是小麦族植物相对稳定的表型性状，可大致反映物种的变异程度。染色体是遗传物质的主要载体，在物种进化中数量和结构的变化，种内基因的遗传多样性可以在染色体的数量和形态上找到相应证据；通过植物核型分析，评价物种多样性及推断物种进化趋势也是一种常用的研究手段10。EST-SSR 来源于表达基因序列，它反映基因的编码区段，通用性和保守性也较 SSR 高11，可以直接获得基因表达信息，为功能基因提供精准的标记，在不同物种间也有较好的通用性12-13。本研究通过对三江源地区的乡土草种糙毛以礼草进行形态学比较及分析、核型分析、标签-简单序列重复(EST-SSR)分子标记相关分析，理论上阐明糙毛以礼草在形态学水平、细胞水平、分子水平的遗传多样性规律，实践上为高原生态保持与修复、禾本科饲草与草坪改良及麦类作物育种提供科学基础及参考。1 材料与方法 1.1 材料本研究试验材料为在三江源及周边不同海拔、经纬度地区采集的 7 个糙毛以礼草种质，用全球定位系统(GlobalPositioningSystem,GPS)记录海拔、经度、纬度(表 1)。1.2 方法1.2.1 穗部性状调查植物穗部性状受环境影响相对较小，是植物较稳定的形态学指标，能在一定程度上反映糙毛以礼草各种质的变异程度。选用 7 个性状，包括稃毛长、稃长、颖长、小花数、小穗数、穗宽、穗长。每份种质随机取 10 穗，用游标卡尺测量统计，并进行形态学比较，同时计算种质间穗部变异系数(coefficientofvariation,CV)及性状平均值为该种质的基础数据，利用 SPSS18.0 软件进行主成分分析。1.2.2 根尖细胞制片与数据统计每份种质中随机取 50 粒种子去掉内外桴，参照250草业科学第40卷http:/刘冬云等14的根尖细胞制片方法，对根尖细胞进行染色、制片、镜检。每份种质统计 10 个根尖分生区组织，以中期染色体均匀分散的细胞进行染色体计数，当样本中 85%以上的细胞染色体数目相同时，为该种质的染色体数。每份材料选取 5 个染色体形态结构完整、均匀分散的有丝分裂中期细胞，拍照后按各染色体的总长和臂比进行同源染色体配对，由小到大排列，然后分别测量各条染色体的长臂、短臂。计算核型分析的参数有相对长度(relativelength)、平均臂比(meanarmratio)、染色体长度比(chromosomelengthratio)、核型类型(karyotypictype)和核不对称系数(coefficientofkaryotypicasymmetry)。根据 Levan 染色体分类系统确定核型公式，根据核型不对称程度与进化程度成正比的原则，对其进化程度进行评价。1.2.3 EST-SSR 多样性调查从每份种质中随机取 100 粒种子，播种于营养钵内，出苗 10d 后从每份材料中随机选 10 株植株，按 CTAB 法提取总 DNA，纯化，构建基因池。用已发表的 50 对冰草 EST-SSR 序列合成引物7。PCR 体系(10L)包括 2xTaqPCRMasterMix 含(0.1UL1Taq Polymerase，500 molL1 dNTP each，20mmolL1 Tris-HCl，100 mmolL1 KCl，3 mmolL1MgCl2)5L，0.55molL1primers0.5L，DNA模板50ng，最后加 3.5LddH2O。扩增程序为 94 预变性 5min，94 变性 30s、59 退火 30s、72 延伸 45s，35 个循环，72 延伸 10min，4 冷却 5min，可置于 4 的冰箱保存。扩增产物进行 6%的聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染、拍照。利用 Popgenepc 软件计算相关参数：多态性位点数(numberofpolymorphicbands,NP)、等位基因平均 数(average number of alleles,Na)、香 农 指 数(Shannonsindex,I)、群体间遗传距离(geneticdistance)、遗传一致度(geneticidentity)。根据 Neis 遗传相似性系数，用 NTSYS2.10e 软件对 7 个糙毛以礼草种质进行 UPGMA聚类分析。2 结果与分析 2.1 糙毛以礼草形态学分析7 个种质内穂部性状存在较大变异，不同性状的变异系数在 10.42%41.96%，其中变异系数稃毛长最大；颖长次之，小花数最小(表 2)。通过穗部性状的主成分分析，前 3 个主成分的累积贡献率达 90.399%，所以它足以代表原始因子所代表的大部分信息。第 1 主成分方差贡献率为53.051%，第 2 主成分的方差贡献率为 19.992%，第3 主成分的方差贡献率为 17.356%(表 3)。第 1 主成分对应特征向量中作用最大的性状依次是穗长(0.480)和穗宽(0.334)；第 2 主成分对应的特征向量中作用最大的性状依次是稃长(0.484)和稃毛长(0.374)；第 3 主成分对应的特征向量中作用最大的是小穗数(0.730)和小花数(0.441)(表 4)。以上分析结果表明，穗部大小特征为第 1 主成分，小穗特征为第 2主成分，穗部密度特征为第3 主成分。其中颖长、稃毛长、穗长、穗宽是引起糙毛以礼草形态性状变异的主要性状。2.2 糙毛以礼草的核型分析根尖分生区细胞染色体分布情况及形态结构，会由于地理环境的影响在进化程度上存在着一定表 1 供试材料糙毛以礼草来源Table 1 Origins and names of Kengyilia hirsuta varieties材料编号Materialcode海拔Altitude/m经纬度Longitudeandlatitude采集地CollectionsiteA3195.31012324E,353824N海南贵德GuideHainanB3289.2100540E,361912N海南共和GongheHainanC3010.51011236E,364648N西宁湟源HuangyuanXiningD3304.21005212E,364948N海北海晏HaiyanHaibeiE3242.0100711.9E,371536N海北刚察GangchaHaibeiF3261.31005212E,365248N海北莫湘滩MoxiangtanHaibeiG3148.91005136E,365811.9N海北金银滩JinyintanHaibei第1期任建东等：三江源 7 个糙毛以礼草植物学形态及遗传多样性分析251http:/的差异，由有丝分裂中期的根尖细胞照片可知，7 个糙毛以礼草种质都为六倍体，染色体数目为 2n=6x=42(图 1)。通过染色体核型及核型模式图(图 2)可知，贵德糙毛以礼草(图 2A)，有 12 条染色体类型为近中部着丝点型染色体，30 条染色体均为中部着丝点型染色体，无随体；共和糙毛以礼草(图 2B)，10 号染色体类型是近端部着丝点型染色体，20 条近中部着丝点型染色体，20 条染色体为中部着丝点型染色体，13 号染色体带有随体；湟源糙毛以礼草(图 2C)，有 12 条染色体为近中部着丝点型染色体，30 条中部着丝点型染色体，2 号染色体带有随体；海晏糙毛以礼草(图 2D)，有 4 条近端部着丝点型染色体，8条近中部着丝点型染色体，30 条中部着丝点型染色体，6 号染色体带有随体；刚察糙毛以礼草(图 2E)，有 14 条近中部着丝点型染色体，28 条中部着丝点型染色体，10 号染色体带有随体；莫湘滩糙毛以礼草(图 2F)，有 8 条近中部着丝点型染色体，34 条中部着丝点型染色体，8 号染色体具有随体；金银滩糙毛以礼草(图 2G)，有 12 条近中部着丝点型染色体，30 条中部着丝点型染色体，无随体。7 份种质核型公式各不相同，各种质的 3 种染色体类型中中部着丝点染色体占比最多，近中部着丝点染色体次之，近端部着丝点染色体最少。贵德糙毛以礼草和海晏糙毛以礼草为 2C 型，其余种质表 2 糙毛以礼草种质的形态学指标及变异程度Table 2 Morphological indexes and variation degree of Kengyilia hirsuta germplasms材料编号Materialcode穗宽Spikewidth/mm穗长Spikelength/mm小穗数Spikeletnumber小花数Floretnumber稃长Lemmalength/mm颖长Glumelength/mm稃毛长Pubescencelength/mmA7.4459.4716.804.6011.535.380.38B7.0739.5615.604.7013.774.240.78C7.0344.1612.404.8010.993.550.62D10.1772.0815.304.3013.036.871.19E7.2555.8518.504.5010.584.420.59F7.5256.6313.505.4010.854.390.47G7.5859.5115.105.7011.344.220.48平均值Mean7.7355.3215.314.8611.734.720.64变异系数Coefficientofvariation(CV)/%14.2419.3913.1310.4210.2623.0741.96材料编号参见表1，下同。MaterialcoderefortotheTable1,thisisapplicableforthefollowingtablesandfiguresaswell.表 3 糙毛以礼草形态性状主成分的特征向量及贡献率Table 3 Characteristic vector and contribution rate of prin-cipal components of morphological charactersof Kengyilia hirsuta成分Component特征值Eigenvalues方差贡献率Variancecontributionrate/%累积贡献率Accumulatecontributionrate/%13.71453.05153.05121.39919.99273.04331.21517.35690.39940.4826.88997.28850.1872.67199.95960.0030.041100.00070.0000.000100.000表 4 糙毛以礼草的主成分分析Table 4 Principal component analysis of Kengyilia hirsuta性状Character成分Component123穗宽Spikewidth/mm0.3340.0730.169穗长Spikelength/mm0.4800.2830.006小花数Floretnumber0.1380.2580.441小穗数Spikeletnumber0.0380.1420.730稃长Lemmalength/mm0.1730.4840.060颖长Glumelength/mm0.2860.0290.091稃毛长Pubescencelength/mm0.0390.3740.126252草业科学第40卷http:/均为 2B 型，染色体长度比区间为 2.634.38，平均臂比区间为 1.451.72，染色体臂比2 比率区间为 4.76%19.05%，核不对称系数区间为 58.61%62.40%(表 5)。2.3 糙毛以礼草的 EST-SSR 多样性分析通过 50 对 EST-SSR 引物进行扩增，60 条特异性条带，各个引物的扩增条带数从 15 每个位点的平均等位变异数 1.2，Na 平均数为 1.583，Shannon 指数 I 为 0.325(图 3)。糙毛以礼草种质间的平均遗传一致度 0.6890.754，平均遗传距离 0.2910.376，海晏糙毛以礼草的平均遗传距离最大，为 0.376，刚察糙毛以礼草次之，为 0.359，说明海晏糙毛以礼草与其他糙毛以礼草居群的遗传基础差异较大(表 6)。7 个 种 质 在 遗 传 相 似 性 系 数 的 变 化 范 围 为0.430.78，在 0.55 处聚为两类，海晏糙毛以礼草和刚察糙毛以礼草两个种质聚为一类，其他种质聚为一类(图 4)。3 讨论在青海高原地区的 7 份糙毛以礼草种质形态学分析研究中发现各种质穗部性状指标的变异系数相差较大，体现了糙毛以礼草丰富的形态学特性，与前人同一物种不同种质间存在较明显的表观遗传分化现象15-16的研究结论相近。但植物的植物学性状受基因和外界环境影响，海晏糙毛以礼草、贵德糙毛以礼草与其他种质表型性状差异较明显，其原因可能是种质内基因突变、差异表达，或特殊气候及生境所致，具体还有待进一步的探讨。植物体的核型分析可以在一定程度体现种内遗传多样性16。在本研究中，7 份来源不同的糙毛以礼草随体染色体各不相同，这与陈晓静17对不同来源水的仙随体染色体存在较大差异的研究结论相近。本研究中，不同来源野生资源的核型参数均存在差异，这与孙浩男等18、周自玮等19在其他植物野生资源核型分析研究中，核型参数也出现相应差异的结论相似。此外，本研究还在形态细长的根冠细胞中发现了处于分裂中期的细胞，由于细胞细长在分裂中期无法形成“赤道板”，可能部分特化组织细胞并不形成排列整齐的“赤道板”。相关发现及研究鲜有报道，所以具体机理还得展开进一步研究。在本研究中通过 EST-SSR 在分子水平对 7 份糙毛以礼草种质资源进行多样性分析，从结果来看各种质间 Na 平均数为 1.583，高于卢锐和李培英20利用 EST-SSR 手段对其近缘植物偃麦草的遗传多样性分析的结果；低于张婉茹21利用简单序列重复间(ISSR)技术对其近缘植物寒地稗草种质进行分ABCDEFG图 1 7 份糙毛以礼草的染色体分布图Figure 1 Chromosome distribution of seven Kengyilia hirsuta germplasms第1期任建东等：三江源 7 个糙毛以礼草植物学形态及遗传多样性分析253http:/析的结果。种质间的平均遗传距离为 0.2910.376，高于王惠知等22利用 EST-SSR 手段对其近缘植物老芒麦种质进行多样性分析的结果。Shannon 指数为 0.325，高于王晓醒等23利用 AFLP 技术对以礼草属植物梭罗草(Roegneria thoroldiana)种质多样性研究的结果。由于 EST-SSR 来源于表达基因，反映基表 5 7 份糙毛以礼草的核型相关指标Table 5 Seven karyotype-related indexes of Kengyilia hirsuta材料编号Materialcodegermplasm核型公式Karyotypeformula核型Karyotypetape染色体长度比Chromosomelengthrate平均臂比Meanarmrate臂比2比率Armrateproportion2/%不对称系数Coefficientofkaryotypicasymmetry/%A2n=6x=30m+12sm2C4.381.5014.2958.89B2n=6x=20m+20sm(2SAT)+2st2B3.611.729.5262.40C2n=6x=30m+12sm(2SAT)2B3.871.524.7659.63D2n=6x=30m+8sm(2SAT)+4st2C4.021.6719.0561.73E2n=6x=28m+14sm(2SAT)2B3.321.5919.0559.86F2n=6x=34m(2SAT)+8sm2B2.631.454.7658.61G2n=6x=30m+12sm2B2.741.5419.0559.974G213579 11 13 15 17 19 21相对长度 Relative length/%染色体编号 No.of chromosome02464F213579 11 13 15 17 19 21相对长度 Relative length/%染色体编号 No.of chromosome02466D4213579 11 13 15 17 19 21相对长度 Relative length/%染色体编号 No.of chromosome024866E4213579 11 13 15 17 19 21相对长度 Relative length/%染色体编号 No.of chromosome024866A4213579 11 13 15 17 19 21相对长度 Relative length/%染色体编号 No.of chromosome02466B4213579 11 13 15 17 19 21相对长度 Relative length/%染色体编号 No.of chromosome024866C4213579 11 13 15 17 19 21相对长度 Relative length/%染色体编号 No.of chromosome02486图 2 7 份糙毛以礼草的染色体核型图及核型模式图Figure 2 Chromosome karyotype and karyotype diagram of seven Kengyilia hirsuta germplasms254草业科学第40卷http:/因的编码区段，多态性较 ISSR 低，可能会导致在Na 平均数值上低于寒地稗草的结果。在本研究中通过聚类分析在遗传相似性系数为 0.55 处聚为两类，在植物学特征上大致可依据小花数进行划分，在核型上大致可依据臂比2 的比率进行划分。其他穗部特征指标及核型相关指标与表达基因的遗传距离未见明显正比关系，这可能由于不同物种的功能基因序列有一定程度的差异而引起，具体还得进一步从分子生物学方向展开研究。4 结论糙毛以礼草的 7 个穗部性状间的变异系数差异大，其中桴毛的变异最大；在主成分分析中，穗部大小及密度、小穗特征为引起差异的 3 个主成分，颖长、稃毛长、穗长、穗宽指标是造成糙毛以礼草形态性状呈现差异的主要因素；海晏糙毛以礼草的种质表 6 7 个材料的遗传一致度和遗传距离Table 6 Genetic consistency and genetic distance of seven populations编号Code最大遗传一致度Maximumgeneticidentity最小遗传一致度Minimumgeneticidentity平均遗传一致度Averagegeneticidentity最大遗传距离Maximumgeneticdistance最小遗传距离Minimumgeneticdistance平均遗传距离AveragegeneticdistanceA0.835(B)0.660(D)0.7430.415(D)0.180(B)0.301B0.873(G)0.611(E)0.7540.492(E)0.135(G)0.291C0.806(B)0.689(D)0.7440.372(D)0.216(B)0.297D0.825(E)0.621(G)0.6890.476(G)0.192(E)0.376E0.825(D)0.612(B)0.7020.492(B)0.192(D)0.359F0.777(A)0.689(D)0.7320.372(D)0.253(A)0.314G0.874(B)0.621(D,E)0.7390.476(D,E)0.135(B)0.310括号内数据表示对应数据的材料编号。Figureinthebracketindicatesthematerialaccessioncodethatcorrespondswiththeinformation.Maker C A B G F E D C A B G F E D C A B G F E D500 bp400 bp300 bp200 bp图 3 3 对 EST-SSR 分子标记引物对 7 份糙毛以礼草的扩增结果Figure 3 Amplification results of two pairs of EST-SSR molecular marker primers on seven Kengyilia hirsuta germplasms贵德糙毛以礼草 Guide K.hirsuta共和糙毛以礼草 Gonghe K.hirsuta金银滩糙毛以礼草 Jinyintan K.hirsuta湟源糙毛以礼草 Huangyuan K.hirsuta莫湘谭糙毛以礼草 Moxiangtan K.hirsuta海晏糙毛以礼草 Haiyan K.hirsuta刚察糙毛以礼草 Guide K.hirsuta0.430.520.610.700.78相似性系数 Similarity coefficient图 4 基于 UPGMA 的 7 份糙毛以礼草种质聚类图Figure 4 UPGMA-based cluster map of seven accessions of Kengyilia hirsuta第1期任建东等：三江源 7 个糙毛以礼草植物学形态及遗传多样性分析255http:/内差异最大。7 份糙毛以礼草种质都为六倍体，染色体数目为 42 条，均以中部着丝点染色体为其主要构成部分，在不同类型着丝点染色体数目、有无随体方面表现出了丰富的多态性。核型指数多样性丰富其中贵德糙毛以礼草、海晏糙毛以礼草为 2C 型，其余种质均为为 2B 型，共和糙毛以礼草进化程度最高，海晏糙毛以礼草次之，莫湘滩糙毛以礼草最低。根据核型不对称系数初步确定居群间的进化程度：共和糙毛以礼草海晏糙毛以礼草金银滩糙毛以礼草刚察糙毛以礼草湟源糙毛以礼草贵德糙毛以礼草莫湘滩糙毛以礼草。在 EST-SSR 多样性分析中糙毛以礼草的平均遗传距离较大，种质间存在较大差异，多样性丰富，其中海晏糙毛以礼草和刚察糙毛以礼草与其他种质的遗传距离相对较远。参考文献 References:蔡联炳.以礼草属的地理分布.植物分类学报,2001,39(3):248-259.CAILB.GeographicaldistributionoftheKengyiliaYenetJ.L.Yang.JournalofPlantTaxonomy,2001,39(3):248-259.1帅林林.水分对糙毛以礼草根系特性及根际微生物多样性的研究.成都:西南科技大学硕士学位论文,2020.SHUAILL.EffectsofwateronrootsystemcharacteristicsandrhizospheremicrobialdiversityofKengyilia hirsuta.MasterThesis.Chengdu:SouthwestUniversityofScienceandTechnology,2020.2刘成,韩冉,汪晓璐,宫文萍,程敦公,曹新有,刘爱峰,李豪圣,刘建军.小麦远缘杂交现状、抗病基因转移及利用研究进展.中国农业科学,2020,53(7):1287-1308.LIUC,HANR,WANGXL,GONGWP,CHENGDG,CAOXY,LIUAF,LIHS,LIUJJ.Researchprogressondistanthybridizationanddiseaseresistancegenetransferandutilizationofwheat.ScientiaAgriculturaSinica,2020,53(7):1287-1308.3LIUC,GONGW,HANR,GUOJ,LIG,LIH,SONGJ,LIUA,CAOX,ZHAIS.Characterizationidentificationandevaluationofasetofwheat-Aegilops comosachromosomelines.ScientificReports,2019,9:1-12.4ZHANGJ,ZHANGJ,LIUWH,HANH,LUY,YANGX,LIL.IntrogressionofAgropyron cristatum6Pchromosomesegmentintocommonwheatforenhancedthousand-grainweightandspikelength.Theoretical&AppliedGenetics,2015,128(9):1827-1837.5FANGY,YUANJ,WANGZ,WANGH,XIAOJ,YANGZ,ZHANGR,QIZ,XUWHUL.DevelopmentofraestivumL.-HcalifornicumalienchromosomelinesandassignmentofhomoeologousgroupsofHordeum 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