二食品中致病球菌检验.pptx

一、概述v（一）分布：在自然界分布较广，可存在于水、空气、尘埃、（一）分布：在自然界分布较广，可存在于水、空气、尘埃、牛奶、粪便及人的咽喉和病灶中。牛奶、粪便及人的咽喉和病灶中。v（二）分类（二）分类 1 1、按溶血能力分类按溶血能力分类：（1 1）甲型（甲型（）溶血性链球菌）溶血性链球菌 （2 2）乙型（）乙型（）溶血性）溶血性链球菌球菌 （3 3）丙型（丙型（）链球菌球菌 v 一、概述v2、按血清学分类 主要是根据链球菌细胞壁抗原进行分类，这种方法可靠，但工作复杂。v根据族特异性抗原的不同，将乙乙型型（）溶溶血血性性链链球球菌菌 分成A B C D E F G H K L M N O P Q R S T，共18族 v在一个族内因表面抗原（即型特异性抗原）不同，又分成若干型。如A族分成60多个型，B族分为4个血清型，C族分成13个血清型。用阿拉伯数字表示。v与人类疾病有关的大多属于乙型溶血链球菌，其血清型 90%属于A族链球菌。（一）形态与染色：（一）形态与染色：1 1、呈球形或卵圆形，呈球形或卵圆形，直径直径0.5um-1um 0.5um-1um 链状链状 排列（长短不一）排列（长短不一）2 2、革兰氏染色阳性，革兰氏染色阳性，衰老培养物常成阴性衰老培养物常成阴性 3 3、无芽孢、无鞭毛、多数无夹膜无芽孢、无鞭毛、多数无夹膜 二、生物学特性生物学特性二、生物学特性生物学特性（二培养特性（二）培养特性 1 1、多多数数为为需需氧氧或或兼兼性性厌厌氧氧，少少数数为为微微需需氧氧或或专性厌氧专性厌氧 2 2、对对营营养养要要求求高高，普普通通培培养养基基不不能能良良好好生生长长，（需需加加血血清清、血血液液、腹腹水水等等）。大大多多数数菌菌株株需需苏苏氨酸、核黄素、维生素氨酸、核黄素、维生素B6B6、烟酸等生长因子。、烟酸等生长因子。3 3、最适温度最适温度3737 PH7.47.6 PH7.47.6 4 4、在在液液体体培培养养基基中中，溶溶血血菌菌株株,呈呈絮絮状状或或颗颗粒粒状状沉沉淀淀生生长长（上上清清下下浊浊）；不不溶溶血血菌菌球球，均均匀匀浑浑浊生长，如粪链菌浊生长，如粪链菌。（二）培养特性（二）培养特性 5 5、在在血血平平板板上上，形形成成灰灰白白色色，半半透透明明、表表面面光光滑滑、圆圆形形突突起起的的细细小小菌菌落落，直直径径0.50.50.75mm0.75mm，针针尖尖大大小小。不不同同菌菌型型其其菌菌落落周周围围的的溶溶血血现现象象不不同同。甲甲型型在在菌菌落落周周围围出出现现1-2mm1-2mm的的绿绿色色溶溶血血环环，放放冰冰箱箱一一夜夜呈呈透透明明溶溶血血环环，且且溶溶血血环环扩扩大大；乙乙型型在在菌菌落落周周围围有有2-3mm2-3mm的的透透明明溶溶血血环环；丙丙型型菌菌落周围不具溶血环。落周围不具溶血环。二、生物学特性生物学特性甲链甲链乙链乙链丙链丙链二、生物学特性生物学特性(三三)生化特性生化特性 1 1、均分糖葡萄糖、均分糖葡萄糖产酸酸 2 2、对乳糖、甘露醇、水乳糖、甘露醇、水杨苷等的分解因菌株而异。苷等的分解因菌株而异。3 3、能使牛奶、能使牛奶产酸而不凝固，不液化明胶。酸而不凝固，不液化明胶。4 4、乙乙型型溶溶血血链球球菌菌山山梨梨醇醇阴阴性性，不不被被胆胆汁汁溶溶解解、不不分分解解菊菊糖糖，奥奥普普托托辛辛试验阴阴性性，可可与与肺肺炎炎双双球球菌菌区区别。4 4、触、触酶阴性可与葡萄球菌区阴性可与葡萄球菌区别。5 5、A A族菌族菌对杆菌杆菌肽敏感，可被其抑制。敏感，可被其抑制。二、生物学特性生物学特性（四）致病性链球菌可产生的毒素和酶（四）致病性链球菌可产生的毒素和酶 1 1、溶血素：有溶解、溶血素：有溶解红细胞，胞，杀死白死白细胞、血小板及胞、血小板及毒害心脏的作用，有毒害心脏的作用，有O O和和S S两种。两种。链球菌溶血素球菌溶血素O O为含有含有-SH-SH基的蛋白基的蛋白质，能破坏，能破坏白细胞和血小板，动物试验又证实对心脏有急性毒白细胞和血小板，动物试验又证实对心脏有急性毒害作用，使心脏骤停，抗原性强，感染后害作用，使心脏骤停，抗原性强，感染后2 23 3周，周，85%85%以上病上以上病上产生抗生抗“O”O”抗体。抗体。S S为小分子多小分子多肽，相，相对分子分子质量量较小，故无抗原小，故无抗原性。性。S S对氧稳定，对热和酸敏感。对氧稳定，对热和酸敏感。血平板所血平板所见透明溶血是由透明溶血是由“S”S”所引起，能破坏所引起，能破坏白细胞和血小板，给动物静注可迅速致死。注射小白细胞和血小板，给动物静注可迅速致死。注射小鼠腹腔，引起肾小管坏死。鼠腹腔，引起肾小管坏死。二、生物学特性生物学特性（四）致病性链球菌可产生的毒素和酶（四）致病性链球菌可产生的毒素和酶 2 2、致、致热外毒素：曾称外毒素：曾称红疹毒素疹毒素(Erythrotoxin)(Erythrotoxin)或猩或猩红热毒素热毒素(Scarletfever toxin)(Scarletfever toxin)，是人类猩红热的主，是人类猩红热的主要致病物质，为外毒素。主要有要致病物质，为外毒素。主要有A A族链球菌产生。小族链球菌产生。小剂量可使局部产生红疹，大剂量引起全身性红疹，剂量可使局部产生红疹，大剂量引起全身性红疹，并伴有发热、头痛、恶心、呕吐、周身不适等。并伴有发热、头痛、恶心、呕吐、周身不适等。3 3、透明、透明质酸酸酶：又称：又称扩散因子，可溶解散因子，可溶解组织间质的的透透明质酸，故能增加细菌的侵袭力。明质酸，故能增加细菌的侵袭力。4 4、链激激酶：又称溶又称溶纤维蛋白蛋白酶，具有增，具有增强细菌在菌在组织中的扩散中的扩散作用。作用。5 5、杀白白细胞素：在肉胞素：在肉汤培养基中培养可培养基中培养可产生。可使白生。可使白细胞失去动力，变为球形，最后膨胀破细胞失去动力，变为球形，最后膨胀破裂。裂。v 二、生物学特性生物学特性（五）（五）抵抗力抵抗力 抵抗力一般不抵抗力一般不强，6030min6030min即被即被杀死，死，对常用常用消毒剂敏感。消毒剂敏感。乙型乙型链球菌球菌对青霉素、青霉素、红霉素、霉素、氯霉素、四霉素、四环素、磺胺均敏感。青霉素是溶血链球菌感染的首选素、磺胺均敏感。青霉素是溶血链球菌感染的首选药物。药物。v(六六)流行病学与致病性流行病学与致病性 溶血性链球菌在自然界中分布较广，存在于水、溶血性链球菌在自然界中分布较广，存在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物的口腔、鼻腔、空气、尘埃、粪便及健康人和动物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、空气飞沫传播或通过皮咽喉中，可通过直接接触、空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染，被污染的食品如奶、肉、蛋及肤、粘膜伤口感染，被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也会对人类进行感染。上呼吸道感染患者、其制品也会对人类进行感染。上呼吸道感染患者、人畜化脓性感染部位常成为食品污染的污染源。人畜化脓性感染部位常成为食品污染的污染源。二、生物学特性生物学特性v一般来说，溶血性链球菌常通过以下途径污染食品：1、食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化脓性炎症时造成食品的污染；2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺炎或畜禽局部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染；3、熟食制品因包装不善而使食品受到污染。溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热和风湿热、肾小球肾炎等变态反应。化脓性链球菌)三、微生物检验三、微生物检验（一）检验程序（一）检验程序 液体检样液体检样 v固固体体检检样样样样品品处处理理增增菌菌培培养养分分离离培培养养分分纯纯培养培养生化鉴定生化鉴定报告报告 v（二）检验操作要点（二）检验操作要点 1 1、采、采样：食品：按常：食品：按常规 2 2、增菌培养：、增菌培养：葡萄糖肉浸液肉葡萄糖肉浸液肉汤 ：一般情况：一般情况 361 24h361 24h 匹克氏肉匹克氏肉汤：在：在污染染严重重时用用 （二）检验操作要点（二）检验操作要点 3 3、分分离离培培养养：血血平平板板，37 37 24h,24h,菌菌落落:灰灰白白色色，半透明或不透明，表面光滑，有透明溶血半透明或不透明，表面光滑，有透明溶血环 4 4、分、分纯培养：血平板培养：血平板 37 24h37 24h 5 5、镜检：革：革兰氏染色，阳性，氏染色，阳性，G G+链状排列，符合链状排列，符合者可做生化鉴定。者可做生化鉴定。三、微生物检验三、微生物检验 （二）检验操作要点（二）检验操作要点 6 6、生化、生化鉴定：定：（1 1）链激激酶试验（溶溶纤维蛋白蛋白酶试验）吸吸取取草草酸酸钾血血浆0.2mL0.2mL，加加0.8mL0.8mL灭菌菌生生理理盐水水，混混匀匀，再再加加入入链球球菌菌18-24h3618-24h36肉肉浸浸液液肉肉汤培培养养物物0.5mL0.5mL及及0.25%0.25%氯化化钙0.25mL0.25mL，混混匀匀，置置于于3636水水浴浴10min,10min,血血浆混混合合物物自自行行凝凝固固，观察察凝凝块重重新新完完全全溶溶解解的的时间，完完全全溶溶解解为阳阳性性，如如24h24h后后不不溶溶解解即即为阴阴性性。同同时用用肉肉浸浸液液肉肉汤做做阴阴性性对照照，用用已已知知的的链激激酶阳性的菌株做阳性阳性的菌株做阳性对照。照。三、微生物检验三、微生物检验 三、微生物检验三、微生物检验（二）检验操作要点（二）检验操作要点 6 6、生化、生化鉴定：定：（2 2）杆菌）杆菌肽敏感敏感试验 将将分分纯的的乙乙型型溶溶血血性性链球球菌菌接接种种血血平平板板，在在划划线处贴附附杆杆菌菌肽纸片片，3718h3718h，出出现抑抑菌菌带为阳阳性性，据此可推据此可推测为乙型溶血性乙型溶血性链球菌。球菌。（二）检验操作要点（二）检验操作要点 v7 7、报告：告：根据培养后的形态，菌落特征及生化试验可报告：有乙型溶血性链球菌生长。三、微生物检验三、微生物检验思考题思考题1 1、链球球菌菌的的溶溶血血现象象有有哪哪几几个个类型型，各各类型型的的溶溶血特征如何？血特征如何？2 2、溶血性、溶血性链球菌能球菌能产生什么毒素和生什么毒素和酶？3 3、溶血性、溶血性链球菌在血平板中生球菌在血平板中生长有何特征？有何特征？