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中草药接骨膏促进骨折愈合作用的实验研究
【摘要】 　　目的探讨民族医药中草药接骨膏对家兔胫腓骨骨折愈合的影响。方法选用健康雄性家兔，均采用无菌手术造成机械性胫腓骨骨折动物模型，通过X线、病理组织学、及血清钙、磷、血清碱性磷酸酶(AKP)检测,观察中草药接骨膏促进骨折愈合的作用。结果接骨膏实验组及骨折挫伤散治疗组与对照组比较：骨痂生长明显加快、且新生骨出现早、范围大，AKP活性增强()，且能影响血清Ca，P含量及Ca，P乘积的变化。结论中草药接骨膏对骨折后骨修复和提高骨折愈合有明显促进作用。
【关键词】 中草药接骨膏 骨折
　　中草药接骨膏是根据长江三峡地区民间接骨中医郑贤群先生验方筛选整理而成［1］，主治跌打损伤、闭合性骨折、筋骨疼痛。该制剂在我院应用已有十多年，临床观察发现具有明显地活血化淤、消肿止痛、缩短骨折愈合时间的作用，目前已成为我院骨伤科治疗骨折的常用药。本实验旨在通过观察中草药接骨膏对兔骨折模型愈合过程的影响，进一步验证其促进骨折愈合的效果，并探讨其对促进骨折愈合的作用机理。
　　1 材料与方法1 药品试剂及器材
　　中草药接骨膏由独正杆(又名光葡萄、野葡萄、山葡萄，属葡萄属科蛇葡萄之变种光叶蛇葡萄)、刺老苞(又名刺苞头、鸟不踏、红刺苞头，属五甲科植物槐木)、刺五加(又名五加皮、刺加皮)组成。以上3味药均分别取根皮晒干，捣碎或切成小块，按独正杆∶刺五加∶刺老苞2∶1∶1的比例混合加水煎煮，采用膏滋法置备成煎膏剂，成品为棕色稠膏，味甜微苦；骨折挫伤散，中成药，由中国佳木斯制药厂生产(批号001206)；生化分析仪OLYMPUS AU400，日本；切片机LeicaJungBiocut2035 德国；AXIOSKOP2PLUS光学显微镜,德国ZEISS公司。2 动物及分组大耳白色家兔72只，全部雄性，体重kg，湖北民族学院动物实验中心提供。对家兔随机分为3组，即模型对照组、接骨膏实验组、骨折挫伤散治疗组，每组24只。3 动物模型制备及检测方法3组实验动物均在戊巴比妥钠的麻醉下，按无菌操作术切开家兔右后腿，作胫腓骨中段横形骨折，再用克氏针内固定，缝合伤口术后进行3 d抗感染治疗，以防感染。造模成功后次日起灌胃给药进行实验研究。实验组采用接骨膏煎膏剂按 g/kg·bw剂量灌胃给药，1次/d，相当于正常成人剂量5倍； 治疗组采用骨折挫伤散按 g/kg·bw剂量用蒸馏水调成混悬液灌胃治疗，1次/d，相当于正常人剂量5倍； 对照组采用等容积的生理盐水灌胃。 在实验研究过程中的第7，15，30天，每组随机抽取家兔8只，先行X线观察骨痂阴影的形成和血清学检测，再用空气栓塞法处死，作病理组织学检查观察骨折处组织愈合程度。X线拍片判断采用5分制标准［2］：未发现骨痂阴影；可见到骨痂阴影，骨折线比较模糊；有明显骨痂生长，骨折线显着模糊；有丰富骨痂生长，骨折线接近消失；骨折线消失，完全连接，接近骨化。血清学检测：抽取各组中家兔空腹血5 ml，用生化分析仪直接测定血清碱性磷酸酶(AKP)、血钙、血磷的含量；病理组织学检查：动物按计划处死后，切取包括骨质缺损两端的大体标本，经脱钙后常规处理标本，行石蜡切片，用HE、Masson、PTAH 3种染色，观察骨缺损处血肿、细胞、胶原和新生骨情况。4 数据分析
　　实验数据采用SPSS FOR WINDOWS 软件进行t检验统计处理。
　　2 结 果
　　X 线拍片观察与对照组比较，实验组和治疗组骨缺损处骨痂阴影均出现早， 骨痂生长速度快，骨痂阴影密度高()。结果见表1。表1 接骨膏对家兔骨折愈合的影响(略)
　　对血清碱性磷酸酶(AKP)的影响造模后实验观察第7天，实验组和治疗组血AKP活性与对照组比较无明显差异；造模后第15，30天，实验组和治疗组血AKP活性升高与对照组比较差异显着(或)，且实验组和治疗组之间无差异性。结果见表2。表2 接骨膏对血清碱性磷酸酶(AKP)的影响(略)
　　对血钙(Ca)、磷(P)的影响造模后实验观察第7天，实验组和治疗组血Ca含量的降低、血P含量的升高及Ca，P乘积等指标均有明显变化，但与对照组比较无统计学意义；造模后15，30 d，实验组和治疗组血Ca含量仍处于较低水平，但血P含量明显的升高和Ca，P乘积值的增大与对照组比较差异显着()。结果见表3。表3 接骨膏对血钙(Ca)、磷(P)的影响
　　病理组织学检查
　　切片检查发现实验组和治疗组动物两骨端生长新骨的时间较早，软骨区范围大， 软骨内成骨过程较快；对照组两骨端出现新骨的时间较晚，软骨区范围较大， 软骨内成骨过程较长， 因而骨痂生长缓慢，直到第30天两端骨痂均不能连接， 中间仍存在着大片纤维组织区。
　　3 讨论
　　骨折愈合过程是一个复杂的组织学、生物学、神经内分泌学及骨生物力学的动态过程。临床上，各种原因所致的骨折延迟愈合和骨折不愈合是常见病。中草药接骨膏主要用于闭合性骨折早中期的治疗，方中药物功用： 独正杆祛风活络、止痛止血、散热解毒、强筋健骨；刺老苞活血止痛、散淤消肿 刺五加祛风除湿、接骨续筋。此方配伍符合骨折治疗淤去、新生、骨合的传统理论。本实验我们采用了X线观察，了解对骨痂形成的影响；病理组织学检查，了解对骨折周围血肿、骨痂形成、软骨生成的影响；血清学检测了解用药后血清钙、磷、AKP酶的变化。

　　实验X线检查结果，实验组和治疗组与对照组比较，骨缺损处骨痂阴影均出现早， 骨痂生长速度快，骨痂阴影密度高，骨折修复明显增快。病理学组织检查，用药组两骨端生长新骨的时间较早，软骨区范围大， 软骨内成骨过程较快，新生骨出现早、范围大。血清学检查显示，用药组血清中的碱性磷酸酶含量丰富，血钙、血磷及钙磷乘积值的增高等指标均发生明显变化。现代医学证实，AKP酶主要由成骨细胞产生，它是成骨细胞分化的早期指标，是骨形成所必需的酶，其活性间接反映骨重建活跃性的改变和成骨细胞活动性的强弱，是一项观察骨折愈合的重要指标［3］。而血中钙磷含量的高低又直接影响骨的钙化与溶解。它们相互影响相互制约并受1,25-(OH)2D3、甲状旁腺素及降钙素的调节和控制［4］。血中钙磷相互作用，其乘积在一个水平，超过一定限度，则沉淀为骨盐。因此，钙磷乘积升高有利于钙盐的沉积。
　　本实验研究进一步表明，中草药接骨膏能增加AKP活性，促进成骨细胞活动，并且降低血钙，升高血磷，使钙磷乘积高峰提前出现，促进钙盐沉积，有利于骨折愈合。由此可见，中草药接骨膏能够缩短骨愈合过程和提高骨折愈合质量，为临床应用提供了可靠的理论依据。
【参考文献】
　　［1］袁昌锦，付天明，刘 敏，等.中草药接骨膏对家兔创伤性骨折愈合作用的实验研究［J］.四川中医，2005，23：34.
　　［2］甘银凰，余南才.接骨膏对骨折愈合作用的研究及临床应用［J］.中华医药学杂志，2003， 2：42.
　　［3］董华，胡乃武，董清平.骨痛仙胶囊对家兔骨折血清碱性磷酸酶、钙、 磷影响的实验研究［J］.中医药学报，2003，31：51.
　　［4］金惠铭，王建枝.病理生理学［M］.北京：人民卫生出版社，2004：44.