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沙苑子调节小鼠免疫功能作用的实验研究
【摘要】 目的 探讨沙苑子及其复方制剂对小鼠免疫功能的调节作用。方法 二级昆明小鼠174只，雌雄各半，体重18～22g，随机分3组。用沙苑子及其复方制剂给小鼠灌胃15d后活杀，用称重法测量脏器系数；用足跖厚度增加法评价细胞免疫功能；用溶血空斑法评价体液免疫功能；用腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的方法评价巨噬细胞吞噬功能。结果 沙苑子能明显提高小鼠DTH反应程度；巨噬细胞吞噬功能明显增强；溶血空斑数明显增多；白细胞介素-1、6、8(IL-1、6、8)水平增高，与对照组比较具有显着的统计学意义(P＜)。结论 沙苑子具有调节小鼠免疫功能的作用。
【关键词】 沙苑子免疫功能；小鼠
The effect of flatstem milkvetch seed and its compound preparation on
regulation of immunological function of mice

【Abstract】 Objective To investigate the effect of flatstem milkvetch seed and its compound preparation on the regulation of immunological function of　One hundred seventy four of second order Kunming mice(weight 18～22g)，male and female each occupying one half，were randomly divided into three　the mice were sacrificed after they had been given flatstem milkvetch seed and its compound preparation in intragastric administration for fifteen　organ’s index of mice was calculated by determining the organ’s weight and the cell immunity were evaluated by determining the thickening of　plaque test was used to appraise humoral immunity，and peritoneal macrophage swallowing chicken red blood cell test was used to appraise the phagocytes　Compared with the control group，the DTH reaction and phagocytes function were improved obviously(P＜)，and the quantity of hemolytic plaque and the concentration of IL-1，IL-6，IL-8 were increased significantly(P＜) in flatstem milkvetch seed and its compound preparation　spleen and thymus index had no statistic difference among all the　Flatstem milkvetch seed can regulate the immunological function of mice.
【Key words】 flatstem milkvetch seed；immunological function；mice
沙苑子(Semen astragali complanati)为豆科植物扁茎黄芪(Astragulus complanatus )的干燥成熟种子。现代医学研究发现，沙苑子含有丰富的硒、铜、铁、锌、锰及脂肪油、鞣质、维生素A等成分，具有养肝明目、强腰健骨、滋润肌肤等功效［1］。笔者通过对实验动物IL-1、6、8，胸腺及脾脏重量指数等免疫指标测定，探讨沙苑子对小鼠调节免疫功能的生物作用。
1 材料与方法

　实验动物 二级昆明小鼠174只，雌雄各半，体重18～22g，购自军事医学科学院实验动物中心(动物合格证号：BDW95007)。
受试药物 沙苑子水煎剂，含生药量200mg/ml；复方沙苑子由沙苑子、玄驹、红景天、北五味子、枸杞子、麦冬、川芎等水煮提取组成，含生药量400mg/ml。均由本所制剂室配制。沙苑子产于陕西，蚂蚁为广西产双齿多刺蚁(Polyrhachis dives smith)，其他中药材均购自北京康玉药店。
试剂 绵羊红细胞由采自健康成年绵羊血制备，豚鼠血清由卫生部环境卫生监测所毒理室提供，鸡红细胞采自健康成年来杭雄鸡血制备，其余为国产分析或优级纯试剂。
仪器 放免计数仪为上海产SN-682型。
实验方法 将174只小鼠按体重编号后，用随机表分成4大组，分别进行巨噬细胞吞噬功能实验、溶血空斑实验、迟发型变态反应、测定胸腺、脾脏指数实验。每项实验的动物又分为沙苑子组、复方沙苑子组和生理盐水对照组，各组均为12只小鼠。沙苑子组、复方沙苑子组分别用沙苑子、复方沙苑子水煎剂灌胃，每日1次；生理盐水对照组同时用等量的生理盐水灌胃，连续15天。
巨噬细胞吞噬功能的实验 按照文献［2］方法，末次给药后，给每只小鼠腹腔注射2%鸡红细胞悬液1ml。间隔30min，颈椎脱臼处死，仰位固定于鼠板上。正中剪开腹壁皮肤，经腹膜注入生理盐水2ml，转动鼠板1min。然后吸出腹腔洗液1ml，平均分滴于两片载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，移置37℃孵箱温育30min。孵毕，于生理盐水中漂洗，以除去未贴片细胞。晾干，以1：1丙酮-甲醇溶液固定。4%(V/V)Giemsa-磷酸缓冲液染色3min，用蒸馏水漂洁，晾干，在油镜下计数巨噬细胞，每片200个，按下式计算吞噬百分率和吞噬指数：
吞噬百分率=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数〖〗200个巨噬细胞×100%
溶血空斑实验 应用溶血空斑实验进行抗体生成细胞检测［2］。取羊血，用生理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射SRBC 1×108个。将用SRBC免疫5天后的小鼠处死，取脾，制成细胞悬液。将表层培养基加热溶解后与等量双倍的Hanks液混合，分装小试管，每管，再向管内加μl体积分数为10%的SRBC(用SA液配制)、10μl脾悬液，迅速混合后倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培养箱中温育，然后将用SA缓冲液稀释的补体(1：5)加入到玻片架凹槽内，继续培养后计数溶血空斑数，以空斑数代表分泌抗体的细胞数。
迟发型变态反应 采用足底增厚法进行DTH检测［3］。给小鼠腹腔注射1%SRBC /每鼠，将其致敏，4天后测量左后足跖部厚度，然后在测量部位皮下注射体积分数为20%的SRBC(20μl/每鼠)，注射后24h测量左后足跖部厚度，同一部位测量3次，取平均值。以注射前后足跖厚度的差值，表示DTH的程度。
对小鼠胸腺、脾脏指数的影响 末次前称其体重，给药30min断头处死，立即取出，称量脾脏、胸腺湿重，计算其指数。计算公式脾(胸腺)指数=脾(胸腺)重量(g)
体重(g)
　沙苑子对小鼠血清IL-1、6、8水平的影响 将上述30只小鼠按上述方法分组给药，按文献［4］的方法，末次给药后，30min断头取血，3000r/min离心10min分离血清，取足量血清待测。
统计学分析 计量数据均用SAS软件进行方差分析。
2 结果
沙苑子对小鼠3项免疫功能的影响 结果见表1。表1 沙苑子对小鼠3项免疫功能的影响 (x±s)
注：与生理盐水对照组比较*P＜，**P＜；用药组比较#P＜
表1数据表明，小鼠服用沙苑子及其复方制剂，能明显增强小鼠吞噬鸡红细胞的能力；增加小鼠抗体生成细胞数。尤其是复方沙苑子组与对照组比较，具有显着的统计学意义。同时沙苑子与复方沙苑子比较，前者更能增加抗体生成细胞数。用药组与对照组比较DTH明显增强，具有明显提高小鼠细胞免疫功能的作用，具有显着的统计学意义(P＜)。
对小鼠胸腺、脾脏指数的变化 结果见表2。
沙苑子对小鼠血清IL-1、6、8水平的影响 结果见表3。表2 沙苑子对小鼠胸腺、脾脏重量与指数的影响 (x±s)
注：结果显示各用药组小鼠与对照组小鼠比较胸腺与脾脏以及其指数差异无显着性(P＞)。
表3 沙苑子对免疫实验小鼠血清IL-1、6、8的影响 (x±s)
注：与对照组比较*P＜，**P＜
从表3可以看出，用药组血清IL-1、6、8水平明显高于对照组(P＜)，特别是沙苑子对IL-1、复方制剂对IL-1、8水平的影响较对照组尤为显着(P＜)，差异具有显着性。
3 讨论

从20世纪80年代起，不少学者对沙苑子进行了较为集中的研究，现代药理研究证实，沙苑子可以调节血液流变学、血压和脑血流量，具有明显的保肝、降脂、抗疲劳等作用，并能提高免疫功能［4］。机体对抗原物质的免疫应答，是由免疫系统中各免疫细胞(包括巨噬细胞、T细胞、B细胞等)相互协调、共同完成的［5］。PFC是反映抗体生成细胞水平的指标之一，它的完成需上述各项免疫细胞的协调作用，本文中经沙苑子作用后，小鼠对SRBC的免疫应答能力明显提高，从表1结果可以看出，用药组小鼠形成的溶血空斑数明显高于对照组，即产生特异性抗体的B淋巴细胞数明显增多。DTH是反应T细胞功能的指标之一，实验中用药组小鼠的足跖肿胀度明显高于对照组，说明沙苑子具有增强机体的特异性细胞免疫功能的作用。巨噬细胞是一具有多种功能的免疫细胞，在机体非特异性免疫、体液免疫以及肿瘤免疫方面起着重要的作用［6，7］。沙苑子及其复方制剂，能使小鼠的巨噬细胞吞噬功能明显增强，与对照组小鼠比较差异显着。
白细胞介素是一类具有重要生物活性的免疫细胞因子，IL-1主要由单核巨噬细胞产生，在细胞免疫激活中发挥调节作用。IL-6是一种来源于单核巨噬淋巴细胞以及非淋巴细胞类产生的多功能细胞因子。除参与机体的抗感染防御机制外，还与某些肿瘤和自身免疫病的发生和转归密切相关。IL-8对特异和非特异性的免疫反应细胞具有强烈的趋化作用。因此，机体IL-1、6、8含量下降，必然造成机体免疫功能低下［8］。本文研究表明，服用沙苑子及其复方制剂的小鼠，其IL-1、6、8水平与对照组比较明显升高。因此，通过本文各项指标实验分析表明，沙苑子及其复方制剂有增强小鼠免疫功能的作用。
　　【参考文献】
1 李国坤.沙苑子的神奇疗效.家庭中医药，2003，12：99.
2 徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学.北京：人民卫生出版社，1985，936-937；946-948.
3 陈奇.中药药理研究方法学，第2版.北京：人民卫生出版社，1993，738；920-923.
4 李昌勤.沙苑子化学成分及药理作用研究进展.时珍国医国药，2000，11(11)：1041-1042.
5 徐月清，曹志然，李立萍，等.灵芝对小鼠免疫功能调节作用的研究.实验动物科学与管理，1999，16(1)：18-21.
6 戴玲，王华，陈彦.白头翁糖蛋白对小鼠腹腔巨噬细胞免疫的增强作用.中国生化药物杂志，2000，21(5)：230-231.
7 陈阳述，余宙耀，张海松，等.胎牛骨髓多肽对小鼠和人巨噬细胞以及NK活性的影响.上海免疫学杂志，1996，16：357.
8 辛益妹，王忠，谷顺才，等.芦荟对缺氧与疲劳应激小鼠血清白细胞介素-1、6、8含量的影响.航空军医，2003，31(1)：18-20.