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复方火炭星胶囊抗鼠白血病病毒作用实验研究
【摘要】 目的观察复方火炭星胶囊体内抗鼠白血病病毒作用。方法BALB/C小鼠60只，随机分成正常组、模型组、复方火炭星胶囊大、中、小剂量组(剂量分别为1 000/500/100 mg·kg-1·d-1 )，叠氮脱氧胸苷(AZT)组(剂量为150 mg·kg-1·d-1 )；除正常组外，其他组小鼠均腹腔接种Friend型鼠白血病病毒(FLV)，复制小鼠艾滋病模型；病毒攻击后4 h，各组均按设计剂量给药，连续给药21 d，剖杀小鼠，观察火炭星对模型小鼠的脾指数(质量比)及脾指数抑制率、外周血白细胞、红细胞和淋巴细胞计数的影响。结果复方火炭星胶囊高剂量组能抑制模型小鼠的睥肿大()，改善病毒引起的外周血白细胞、红细胞异常升高和淋巴细胞异常降低等血象指标变化(或)，与模型组比较差异均具有显着性意义。结论 复方火炭星胶囊对小鼠体内感染鼠白血病病毒具有显着抑制作用。
【关键词】 复方火炭星胶囊 Friend型鼠白血病病毒 动物模型
　　Abstract：ObjectiveTo observe the in vivo therapeutic effect of capsule of Huotanxing on the infection of Friend leukemia virus in　BALB/C mice were randomly divided into six groups：normal group，model group，Huotanxing groups(1000，500,100 mg·kg-1·d-1 respectively)and zidovudine (AZT)group(100 mg·kg-1·d-1）．Except for the normal group，the mice in other groups were inoculated intraperitoneally with Friend leukemia virus(FLV) to establish MAIDS model．Four hours after inoculation,the mice were given corresponding drugs according to the experimental design for 21 days．After treatment，the mice were executed and the effects of the capsule of Huotanxing on the spleen index,swollen spleen,peripheral white blood cells(WBC) and red blood cells(RBC) and lymph-cell count were observed. ResultsHigh-dose Huotanxing had inhibitory effect on the swelling of spleen and improved abnormally changed hemogram index，including abnomally increased peripheral WBC、RBC count and decreased lymph-cell count,caused by Friend leukemia virus ( or　compared with the model group). ConclusionThe capsule of Huotanxing has an obvious in vivo inhibitory effect on Friend leukemia virus.
　　Key words：Capsula of Huotanxing; Friend leukemia virus; Animal model
艾滋病(AIDS)， 即获得性免疫缺陷综合征，是人类获得性免疫缺陷病毒(HIV)引起的传染性疾病。免疫缺陷的主要原因是HIV侵入,杀伤CD4+,CD8 +等免疫细胞，令这些免疫细胞大量减少。其可严重地摧毁人的免疫系统而对生命构成极大的威胁，并因其具有传染性而危害到世界每一角落，而且还在不断蔓延，故有“世界瘟疫”之称，至今尚无理想的治疗方法。目前报道虽有不少西药能够抑制HIV ,但有3个缺点,即副作用大,价格昂贵,易产生耐药性。在此情况下,中医药学因其独特的理论体系及丰富的实践经验为AIDS的防治开辟了新途径［1,2］。笔者对火炭星胶囊的体内抗Friend型鼠白血病病病毒作用进行了观察。现报道如下。
　　1 材料

　　复方火炭星胶囊；阳性对照药物叠氮脱氧胸苷(东北制药总厂生产，批号：H20020325)；BALB/C小鼠60只，体重13～15ɡ，雌性〔南通大学医学院实验动物中心提供，动物生产许可证：SCXK20022005动物使用许可证：SYXK20020022）〕;Friend型鼠白血病病毒(Friend Leukemia virus，FLV)购自美国典型培养物收藏中心(American Typical Culture Centre，ATCC)，经腹腔注射小鼠，传代一次增强毒力后，制成100 g/L脾悬液，70℃冻存备用。
　　2 方法
　　病毒半数感染量(ID50 )滴定 腹腔注射FLV，制成 g/L脾悬液，收集脾悬液按文献方法［3］计算ID50，实验时以60倍ID50为鼠逆转录病毒小鼠模型的实验浓度。
　　动物实验［4］BALB/C小鼠60只，随机分为6组，每组10只，分别为正常小鼠对照组、阳性对照组、病毒模型对照组、复方火炭星胶囊大、中、小剂量组。除正常组外，均在碘酒和酒精消毒后，用已滴定鼠白血病病毒液腹腔注射。复方火炭星胶囊给药剂量为1 000，500，100 mg/kg。 阳性药物对照组用药量为150 mg/kg。以上药物均在病毒攻击后4 h开始给药。共给药21 d，1次/d，均灌胃给药。正常组和模型组均给予蒸馏水灌胃。给药21 d后，剖杀小鼠，剖杀前禁食禁水4 h以上且称小鼠体重。处死后取出小鼠脾脏，称脾重。按以下公式计算脾指数和抑制率：脾指数＝小鼠脾重/小鼠体重，脾指数抑制率＝/对照组平均脾指数×100%。
　　小鼠血象测定摘眼球抗凝取血，全自动血液生化仪检测红细胞计数白细胞计数，血红蛋白计数，淋巴细胞计数。
　　统计学处理数据用±s表示，对所得实验数据进行t检验F检验，统计软件：Stata 版，求统计学的显着性差异。
　　3 结果
复方火炭星胶囊显着抑制白血病病毒感染引起的小鼠脾脏肿大，给药大、中、小剂量组脾指数抑制率分别为%,%,%，并能改善其病毒引起的WBC，HGB，PLT异常升高及淋巴细胞异常降低等血象指标变化，且呈剂量依赖性。见表1～3。表1 复方火炭星胶囊对小鼠实验感染鼠白血病病毒抑制作用(略)表2 复方火炭星胶囊对小鼠实验感染鼠红白细胞、血红蛋白及血小板的作用(略)表3 复方火炭星胶囊对小鼠实验感染鼠白细胞、淋巴细胞的作用组别WBC
　　4 讨论
　　自1981年美国首先发现艾滋病以来，国际上对艾滋病及其病原病毒—人免疫缺陷病毒(HIV)进行了深入、广泛的研究，力求找到有效的防治措施。而目前AIDS在全球的大流行仍未得到控制，因此各国均投入大量资金寻找、开发新的抗AIDS药物。药物研究中，动物模型尤其是小动物模型在评价药效、药物毒性及药物代谢等方面是必不可少的［4］。对药物体内抗HIV的研究， 目前认为使用鼠艾滋病模型(MAIDS)较为简便而实用，为此我们从美国ATCC引进了复制MAIDS的病毒FLV。FIV与HIV同属于逆转录病毒科，能较好地模拟人类艾滋病的症状特点，MAIDS模型多用于筛选评价抗HIV药物、疫苗，如临床已经使用的AZT、双脱氧肌苷(DDI)、双脱氧胞苷(DDC)等，并可运用该模型研究AIDS的发病机制［2］。
临床治疗艾滋病的药物自1987年第1个抗HIV药物叠氮脱氧胸苷(AZT)用于治疗艾滋病以来．已有7种核苷类和3种非核苷类HIV逆转录酶抑制剂及5种蛋白酶抑制剂共l5种抗HIV药物通过美国食品药品监督管理局(FDA)批准上市。由于单独用药易产生耐药性，1995年美籍华裔科学家何大一教授提出了联合疗法—高效抗逆转录病毒治疗(HAART)，被称为艾滋病治疗的里程碑［5］。目前部分西药已经国产化，降低了药价，但使用的覆盖面仍有限，同时西药的耐药性使其疗效受到影响，其毒副作用降低了病人的依从性。而我国中医药有着几千年的历史，其以辨证施治为理论精髓且具有复方、低毒、有效、可长期服用等特点。在此形势下，众多研究者转向价廉物美的中草药，希望借鉴中医药理论的精粹，寻求抗HIV活性的天然药物。
复方火炭星胶囊是由紫花地丁、黄芪、甘草、天花粉、香菇、柴胡等22味中药制成，其含有多种生物碱、多糖类、蛋白质、黄酮类、酚类、苷类、萜类、氨基酸以及醇类。现代药理研究表明紫花地丁、天花粉、甘草、黄芪均具有很强的抗HIV作用。天花粉能通过切开核糖体,消灭艾滋病病毒感染细胞,从而抑制艾滋病病毒的进一步扩散，在体外有选择性的杀伤被HIV 侵犯的T细胞和巨噬细胞的作用,并对正常的T 细胞有保护作用甘草中的甘草甜素除对HIV 有抑制作用外,在疗程试验性治疗艾滋病患者中,发现其还有增强免疫力的作用。黄芩中的黄芩苷元和黄芩苷有抑制逆转录酶作用［6］。本实验结果显示，复方火炭星胶囊可抑制FLV引起的脾肿大且改善病毒引起的血象指标变化。脾脏为病毒的主要靶器官，FLV感染鼠的脾增重大小可定量反映病毒量，因此药物能否抑制病毒，脾指数为一个直观而可靠的指标。脾脏有丰富的淋巴细胞和巨噬细胞，它们都参与体液免疫反应［2］。所以在实验中复方火炭星胶囊可抑制脾肿大，显示其不仅具有体内抗FIV作用，还可能具有提高体液免疫功能的作用。复方火炭星胶囊治疗小鼠艾滋病的具体机制有待于进一步研究探讨。
【参考文献】
　　［1］郭卫中,卢耀增,吴小闲,等.中药复方艾达康治疗慢性猴艾滋病病毒感染的实验研究［J］.广州中医药大学学报,2005,22(4):296.
　　［2］杨子峰,洪志哲,唐明增,等.白藜芦醇对小鼠艾滋病治疗作用的实验研究［J］.广州中医药大学学报,2006,23(2):148,155.
　　［3］蒋 岩,王红霞,鲍作义,等.用鼠艾滋病模型评价虎杖水提液的抗病毒作用［J］.中国病毒学,1998,13(4):306.
　　［4］陶佩珍,蒋景仪,陈鸿珊,等.鼠逆转录病毒小鼠模型的建立［J］.中华实验和临床病毒学杂志,1995, 9(4):353.
　　［5］贺金华,买尔旦.中药防治艾滋病研究概况［J］.中国药物与临床,2004, 6(4):454.
　　［6］吴维萍，朱 琳，聂 勇.灭艾灵汤剂治疗早中期艾滋病70例［J］.中医研究，2004,17：30.