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强精煎对模型小鼠睾丸病理损伤的影响
【摘要】 目的探讨强精煎对模型小鼠睾丸病理损伤的影响。方法应用环磷酰胺所致的睾丸生精障碍小鼠模型，观察强精煎对小鼠睾丸病理形态学的影响。结果模型组小鼠睾丸组织可见明显的病理损伤；强精煎治疗组小鼠睾丸生精小管管壁较厚，细胞层次较宽，各级生精细胞排列较规则，基底面至腔面可见精原细胞、初级精母细胞、精子细胞等各个发育阶段的细胞，细胞增殖旺盛，可见到较多分裂期细胞，腔内可见成熟精子，间质稀少，血管丰富，间质细胞发育良好。结论强精煎具有修复睾丸病理损伤的作用。
【关键词】 强精煎 睾丸 病理损伤 形态学
　　Effects of Qiangjing Decoction on the Pathological Damage of Model Mouse‘s Testis
　　Abstract：ObjectiveTo study the effects of Qiangjing Decoction on the pathological damage of modelmouse‘s　spermatogenic disorder(SD)model mice by cyclolophosphamide,observe the effects of Qiangjing Decoction on the pathological morphology of model mouse‘s　damage could be seen in the model group　Qiangjing decoction treated group,seminiferous tubules wall became thicker,cell level was more wider,all of different spermatogenic cells were regular,spermatogonium,primary spermatocyte,spermatid could be found from base to cavity side,cell multiplication was bloomed,many cells in the mitotic time were　sperms were found in the cavity of seminiferous tubules,interstitial was seldom,blood vessels were abundance and interstitial cells grew　decoction can restore pathological damage of testis.
　　Key words：Qiangjing decoction; Testis; Pathological damage ; Morphology
睾丸损害导致生精障碍是男性不育症的常见病因之一，临床上常表现为少精子症和弱精子症。以往的研究表明，采用补肾健脾中药治疗少弱精子所致的不育症具有较好的疗效［1，2］，但其作用于睾丸病理机制的研究少见报道，故笔者就具有补肾健脾作用的治疗男性不育症效方-强精煎做了相关研究，从而为补肾健脾中药防治男性不育症提供病理形态学依据。
　　1 材料和方法
　　材料
　　动物及分组选用8～9周龄昆明种雄性小鼠40只，体重g，清洁级，由广西中医学院实验动物中心提供，动物许可证号：桂医动字11004号。饲养在广西中医学院第一附属医院综合实验室内，室温℃，食用全价营养颗粒饲料，饮用自来水。适应性喂养1周，随机分为4组，每组10只。
　　药物及试剂强精煎，为提高实验结果的可重复性，本实验使用单味中药配方颗粒剂，由江苏省江阴市天江药业有限公司生产，批号0602054，加入蒸馏水，配成100％浓度的混悬液，置4℃保存备用；黄精赞育胶囊，上海新亚药业邗江有限公司生产，批号：国药准字Z20050267，除去胶囊壳，将药物颗粒磨粉，80目过筛，加入蒸馏水，配成％浓度的混悬液，置4℃保存备用。环磷酰胺注射液，江苏恒瑞医药股份有限公司生产，批号：国药准字H32020857 。用时用生理盐水配制成10 mg/ml水溶液，现配现用。
　　仪器设备
　　LEICA－RM2135型切片机，LEICA－DME光学显微镜，由上海徕卡显微系统有限公司制造。
　　方法
　　小鼠生精障碍模型的制作与用药采用环磷酰胺致小鼠生精障碍模型，方法参照陈小野法［3］稍加改进，除正常组外，其余各组以环磷酰胺25 mg/kg体重，隔日1次，腹腔注射2次即可成模，正常组以生理盐水代替。造模结束后第1天开始给予中药灌胃治疗，对照组及治疗组每只分别灌胃以黄精赞育胶囊混悬液及强精煎混悬液 ml/d，正常组及模型组以等量蒸馏水代替，1次/d，连续30 d。
　　观察症状体征实验自开始起，称重1次/周，观察小鼠的体形、毛色、步态、觅食及活动情况，并记录动物每天死亡只数。
　　观察睾丸病理形态第31天用颈椎脱臼法处死小鼠，取左侧睾丸，用Bouin液固定24 h，石蜡包埋，分别制成4张厚约4 μm连续石蜡切片，将石蜡切片置于37℃烤箱过夜后，经二甲苯脱蜡后梯度乙醇复水，苏木精染色5 min，经1%盐酸乙醇分色，自来水充分冲洗蓝化后，再用%伊红复染5 min，最后经梯度乙醇脱水，二甲苯透明后，封片。光镜下观察睾丸组织切片病理形态的改变。
　　2 结果
　　症状体征观察除正常组外，其它各组小鼠均于造模后逐渐出现体重、体温下降，活动减少，反应迟钝，畏寒倦卧，体毛疏松，失去光泽，进食量、饮水量减少，尿量增多等肾精亏虚表现，模型组最严重，治疗组比较轻微。于造模后第13天左右，上述症状达到最高锋。造模后第15天开始，上述症状逐渐减轻，治疗组的上述症状缓解最明显。
　　光镜观察结果正常组小鼠睾丸，生精上皮厚，细胞层次宽，各级生精细胞排列规则，基底面至腔面可见精原细胞、初级精母细胞、精子细胞等各个发育阶段的细胞，细胞增殖旺盛，可见到较多分裂期细胞，腔内可见成熟精子，间质稀少，血管丰富，间质细胞发育良好；模型组生精小管大部分退化变性，萎缩，生精上皮明显变薄，细胞层次减少，各级生精细胞排列紊乱甚至缺失，数量明显减少，生精小管腔内空虚，少见甚至未见成熟的精子，间质成分增宽，并且出现较大空隙，血管稀少，间质细胞减少或消失；治疗组的镜下表现与正常组基本相同，生精小管管壁较厚，细胞层次较宽，各级生精细胞排列较规则，基底面至腔面可见精原细胞、初级精母细胞、精子细胞等各个发育阶段的细胞，细胞增殖旺盛，可见到较多分裂期细胞，腔内可见成熟精子，间质稀少，血管丰富，间质细胞发育良好；对照组的镜下表现与治疗组相似，但其病理损伤的恢复程度较治疗组稍差。结果见图4。
　　3 讨论
环磷酰胺是一种较强的烷化剂，到体内经代谢后产生的活性产物与亲核基团结合，使链断裂，影响DNA，RNA的复制，导致蛋白质合成障碍，干扰细胞增殖，对快速增殖的生殖细胞尤其是精原细胞和细线期前初级精母细胞很敏感，因而具有睾丸毒性作用， 最终导致睾丸生精功能损害［4］。环磷酰胺导致睾丸生精功能损害的机理，从中医的角度出发，可以认为是邪气太盛，损伤肾精所致。本实验的结果：①模型组小鼠于造模后逐渐出现体重、体温下降，活动减少，反应迟钝，畏寒倦卧，体毛疏松，失去光泽，进食量、饮水量减少，尿量增多等肾精亏虚的症状。②模型组小鼠睾丸病理切片显示：生精小管大部分退化变性、萎缩，生精上皮明显变薄、细胞层次减少，各级生精细胞排列紊乱甚至缺失，数量明显减少，生精小管腔内空虚，少见甚至未见成熟的精子，间质成分增宽，并且出现较大空隙，血管稀少，间质细胞减少或消失，睾丸的生精功能受到损害。这说明本实验的造模是成功的。
　　中医认为“肾为先天之本，主生长发育生殖”，肾精是化生精液的物质基础，肾精充足才能使精子保持正常的密度活力、活率；“脾为后天之本，气血生化之源”，肾中精气亦有赖于脾所运化之水谷精微的培育和补养，才能不断充盈和成熟。脾与肾相互资助，相互促进，共同发挥作用使精子保持正常的密度、活力、活率。强精煎由菟丝子、枸杞子、党参、黄芪、当归、牡蛎、益母草等组成。方中菟丝子、枸杞子补肝肾益精血；党参、黄芪健脾益气；当归补血活血；牡蛎入肝、肾经，有固精的作用；益母草活血清热利湿。全方共奏补肾健脾、活血生精、清热利湿的功效。现代药理研究表明，菟丝子提取物具有促性腺激素样作用，能明显增加睾丸和附睾的重量，促进离体培养大鼠睾丸间质细胞睾酮的基础分泌［5］；枸杞子提取物对受损伤的大鼠生殖系统具有良好的保护作用，能降低高温引起的生精细胞损伤，促进睾丸生殖细胞正常发育［6］，并且对环磷酰胺造成的染色体损伤具有修复保护作用［7］；党参能显着增加红细胞、血红蛋白，增强网状内皮系统功能，对环磷酰胺等化疗药物及放射疗法所致白细胞下降亦有治疗作用［8］；黄芪提取物可以增强机体免疫功能，调节细胞免疫状态的水平［9］，并能促进自然杀伤细胞的功能，延长组织细胞在体内的存活［10］；当归对免疫器官及细胞的再生以及机体的修复具有促进作用［11］；牡蛎提取物对小鼠免疫功能有正向调节作用，不仅增加淋巴细胞和NK细胞活性，并可恢复和缓解环磷酰胺引起的免疫反应低下［12］；益母草既可以改善血液循环，也可以通过对淋巴循环的调控作用来实现其活血化淤和维持机体稳态的作用［13］，对环磷酰胺所致的遗传物质损伤起到一定的防护和抑制作用［14］。
强精煎治疗组小鼠体重、体温下降，活动减少，反应迟钝，畏寒倦卧，体毛疏松，失去光泽，进食量、饮水量减少，尿量增多等肾精亏虚的症状明显缓解；小鼠睾丸病理切片显示生精小管管壁较厚，细胞层次较宽，各级生精细胞排列较规则，基底面至腔面可见精原细胞、初级精母细胞、精子细胞等各个发育阶段的细胞，细胞增殖旺盛，可见到较多分裂期细胞，腔内可见成熟精子，间质稀少，血管丰富，间质细胞发育良好。治疗组小鼠肾精亏虚的症状及睾丸病理损伤的程度均较对照组减轻。本实验的结果说明，补肾健脾方—强精煎对环磷酰胺致小鼠睾丸的病理损伤具有修复作用，并且能改善小鼠肾精亏虚的症状。
【参考文献】
　　［1］李秀莲．健脾补肾治疗男性不育31例［J］．陕西中医，2006，27：983．
　　［2］谢玉梅，李善谱．自拟健脾强肾灵治疗男性不育134例［J］．黑龙江中医药，2002，5：38．
　　［3］陈小野．实用中医证候动物模型学［M］．北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1993：137．
　　［4］李杜娟，徐正顺，张朝晖，等．维生素E对环磷酰胺致小鼠睾丸损伤的保护作用［J］．中华男科学杂志，2006，12：318．
　　［5］熊跃斌，周楚华．淫羊藿及菟丝子提取物对雄性生殖功能的影响［J］．中国药学杂志1994，29：89．
　　［6］黄晓兰，杨明亮，吴晓文，等．枸杞多糖对大鼠生殖系统保护作用的机制探讨［J］．武汉大学学报(医学版)，2004，25：29．
　　［7］吴若芬，张 宁，张 炜，等．枸杞多糖对小鼠生精细胞染色体损伤的修复作用［J］．陕西中医，2000，21(5)：231．
　　［8］焦红军．党参的药理作用及其临床应用［J］．临床医学，2005，25：92．
　　［9］周金黄，邢善田，耿长山．补益中药有效活性成分的免疫药理研究及应用［J］．中药药理与临床，1989，5：58．
　　［10］殷静先．黄芪药理研究与临床应用［J］．时珍国医国药，1998，9：230．
　　［11］吴 琦，王娟娟，赵琳．当归补血汤及其单味药对照射小鼠免疫功能的影响［J］．北京中医学院学报，1993，16(4)：53．
　　［12］张冬青,沈伯华,高 颖,等．牡蛎提取物对小鼠免疫功能的正向调节［J］．上海免疫学杂志，1995，15(1)：18．
　　［13］任君旭，刘艳凯，张利民，等．益母草、当归注射液对大鼠淋巴循环的调节作用［J］．中药材，2005，28：930．
　　［14］温得中，朱玉琢，陆培信．益母草的遗传学研究［J］．深圳中西医结合杂志，2000，10：154.