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棉酚原料药的理化性质及稳定性研究
【摘要】　　目的在前研究中，考察棉酚原料药的理化性质和稳定性。方法采用红外光谱、薄层色谱法等方法进行理化鉴别，以相关评价指标为依据考察棉酚的稳定性。结果研究方法操作简便、灵敏度和准确度高、重复性好。结论棉酚对高热、光照、高湿均不稳定。
【关键词】　棉酚　理化性质　稳定性
　　Abstract：ObjectiveTo investigate the physico-chemical property and stability of Gossypol．MethodsIR and TLC methods were used to identify the characterization，and the stability was investigated on the base of correlated evaluation index．ResultsThe method was convenient,sensitive,accurate and repeatable．ConclusionThe stability test showed that Gossypol is unstable under the high fever,light and humidity．
　　Key words：Gossypol； Physico-chemical property； Stability
棉酚(Gossypol)又称棉籽醇，是一种天然存在于锦葵科的黄色酚类化合物，化学名为2,2′联二萘-8,8′二醛基-1,1′6,6′7,7′六羟基-5,5′二异丙基-3,3′二甲基，结构见图1。可溶于多种有机溶剂，如丙酮、氯仿、乙醇及乙醚等，但不溶于水及低沸点的石油醚。　研究表明，棉酚具有抗生育作用、抗肿瘤作用、抗病毒和抗菌作用等［1～3］。
目前，在临床前研究中尚无棉酚原料药理化性质及其稳定性研究的 文献 报道。本实验对采用新工艺自制的高纯度棉酚进行了理化性质和稳定性研究。
　　1 器材
日本岛津UV-2401PC紫外分光光度计；Nicolet-380型智能傅立叶红外光谱仪；德国SartoriusBP211D 电子 天平；北京泰克X-5型显微熔点测定仪；宁波东南RXZ-300C型智能人工气候箱； 中国 上海 科学 院2X-91旋转蒸发仪；成都唐氏AKRY-1860艾柯超纯水机。
棉酚对照品(美国SIGMA公司，Lot20k4057)；棉酚样品(自制，批号：071016、071228、080313)；聚酰胺薄层层析板(安徽皖西硅源材料厂，批号：071126)；氯仿、正己烷、冰醋酸均为分析纯；水为超纯水；其余试液均按《中国药典》(2005版)Ⅱ部附录XVB配制。
　　2 方法与结果
　　理化性质
　　熔点与溶解度取60℃减压干燥至恒重的棉酚样品适量，以X-5显微熔点测定仪(使用前已校正)测定，每份样品重复测定3次。按照溶解度测定的方法，考察样品的溶解情况。棉酚的熔点为～℃，在丙酮、氯仿、甲醇、乙醇及乙醚中易溶；在环己烷、高沸点石油醚中微溶；在水、低沸点石油醚中不溶。
　　薄层色谱以重蒸氯仿为溶剂，配制质量浓度为 mg·ml-1的棉酚对照品及样品溶液，分别以自动定量点样器点样20 μl于聚酰胺板。于20℃条件，以正己烷-氯仿-冰醋酸(80∶20∶7)为展开剂上行展开1 h， 自然 光下目视观察，棉酚样品斑点与对照品一样，呈现亮黄色，比移值Rf为。
　　红外吸收光谱按《中国药典》2005年版Ⅱ部附录Ⅳ C红外分光光度法，采用溴化钾压片法测定。见图2。红外吸收光谱特征与棉酚结构相符。
　　稳定性实验
　　对照品储备液的制备
　　称取棉酚对照品约2 mg，精密称定，重蒸氯仿溶解并转移至100 ml容量瓶中，定容至刻度，即得。
　　检测波长的确定
　　以对照品储备液在紫外全波段扫描，其在，， nm处均有较强吸收。而 nm处吸收峰无干扰，且正态分布，故选定 nm为检测波长。
　　标准曲线的制备分别精密量取对照品储备液，，，， ml至10 ml容量瓶，定容至刻度，摇匀，得系列浓度的棉酚对照品溶液。以重蒸氯仿为空白对照，在 nm处测吸光度，以吸光度(A)为横坐标，质量浓度(C)为纵坐标进行线性回归，得标准曲线方程C= 7，(r= 8，n=5)，在～μg·ml-1范围内C与A呈良好的线性关系。
　　精密度实验
　　称取棉酚对照品约1mg，精密称定，重蒸氯仿溶解并转移至50 ml容量瓶中，按“”项下同法处理，分别于0，15，30，45，60，120 min测定棉酚含量， 计算 日内精密度；1次/d，一共6次，计算日间精密度。结果日内RSD为%；日间RSD为%，表明棉酚比较稳定，重复性较好。
　　重复性实验称取6份棉酚样品约1 mg，精密称定，重蒸氯仿溶解并转移至50 ml容量瓶中，定容至刻度，按“”项下同法处理，测得含量的RSD为%。
　　回收率实验以样品处理原液(μg·ml-1)为对象，分别精密量取3份 ml至3支10 ml容量瓶中，各加入棉酚对照品溶液(μg·ml-1)，， ml，定容至刻度，按“”项下方法处理。每个浓度平行处理3份，测定总含量。平均回收率为%，RSD为%。表明UV法测定棉酚含量的方法回收率较高，能够满足定量分析的要求。
　　温度影响实验
　　取样品适量，均匀平摊于表面皿内，厚度小于5mm，置人工气候箱内，于40℃恒温条件下放置10 d，分别在5，10 d取样。评价指标包括：外观性状、样品含量(%)、TLC、熔距(℃)。经过10 d高温的变化，表明棉酚对高温不稳定。结果见表1。表1 棉酚高温稳定性实验
　　湿度影响实验取样品适量，均匀平摊于表面皿内，厚度小于5mm，置人工气候箱内，于相对湿度75%、温度25℃条件下放置10d，分别在5、l0d取样。按“”项下方法操作。经过10 d高湿的变化，表明棉酚对高湿不稳定。结果见表2。表2 棉酚高湿稳定性实验
　　光照影响实验取样品适量，均匀平摊于表面皿内，厚度小于5mm，置人工气候箱内，于照度4500Lx±500Lx条件下放置10d，分别在5，10 d取样。按“”项下同法操作。经过10 d高湿的变化，表明棉酚对光照不稳定。结果见表3。表3 棉酚光照稳定性实验
　　3 讨论
　　定性鉴别　
　　在薄层鉴别方法中，分别就其分离效能、检测灵敏度、比移值Rf等参数进行了考察。棉酚以正己烷-氯仿-冰醋酸(80∶20∶7)为展开剂展开效果最好，斑点圆整，Rf值适中。一般定性鉴别时，点样量以20μl为最佳；相关物质检查时，以30μl为最佳。在该薄层色谱条件下，最低检出限为μg。
　　含量测定
　　棉酚及其类似物的含量测定，主要有手性高效液相色谱法［4］、电化学检测高效液相色谱法［5］和红外法［6］。这些方法普遍存在着样品前处理复杂、昂贵、耗时费力等缺点，远不能适应棉酚的快速准确地测定。而我们采用的紫外法具有分析仪器普及率高、简便、价廉、快速、灵敏度高等优点。但注意在分析过程中应尽量避光操作。
　　稳定性实验
　　棉酚在高温、高湿、强光条件下均不稳定，含量明显下降，尤以光照影响最为明显。因此，棉酚原料药及其制剂产品应在避光、阴凉、干燥处保存。
【 参考　文献 】
　　［1］Ko CH，Shen SC，Yang LY，et al．Gossypol reduction of tumor growth through ROS-dependent mitochondria pathway in human colorectal carcinoma cells［J］．Int J Cancer，2007，121(8)：1670.
　　［2］Xu L，Yang D，Wang S，et al．Gossypol enhances response to radiation therapy and results in tumor regression of human prostate cancer［J］．Mol Cancer Ther，2005，4(2)：197.
　　［3］Baram NI，Ismailov AI，Ziyaev KL，et al．Biological activity of gossypol and its derivatives［J］．Chem Nat Compd，2004，40(3)：199.
　　［4］Cass QB，Olivra RV，Pietro AC．Determination of gossypol enantiomer ratio in cotton plants by chiral higher-performance liquid chromatography［J］．J Agr Food Chem，2004，52(19)：5822.
　　［5］Bing Chun XUE，Bao LIU．Determination of Gossypol in Trace Level by Flow Injection Analysis with Chemiluminescence Detection［J］．Chinese Chemical Letters，2006，17(1)：57.
　　［6］Mirghani MES，Man YBC．A new method for determining gossypol in cottonseed oil by FTIR spectroscopy［J］．Journal of the American Oil Chemists‘ Society，2003，80(7)：625.