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冠心病与肺炎衣原体感染的相关性研究
【摘要】 目的：测定冠心病患者肺炎衣原体感染情况，并与健康对照组比较，探讨CPn感染和冠心病的关系。方法：采集100例冠心病患者空腹静脉血，健康对照者60例，采用ELISA法对血浆中CPn IgG进行检测。结果： 100例冠心病人血浆CPn IgG阳性51例，占5100%；60例健康对照组血浆CPn IgG阳性20例，占3333%。冠心病组CPn IgG阳性率高于健康对照组，经χ2检验，χ2=4472，P=0029，两组肺炎衣原体感染比较有统计学意义。结论：冠心病组血浆CPn IgG阳性率高于健康对照组，肺炎衣原体在冠心病的发病过程中起到一定的作用。
　　【关键词】 冠心病；肺炎衣原体IgG；ELISA
　　【ABSTRACT】 Objective：The main aim of this study is to assess the CPn infection comparing with the controls, and try to discuss the Relationship between CPn Infection and CHD. Methods:100 blood samples from CHD patients and 60 that of health controls were collected,and their CPn IgG by ELISA were tested. Results:The CPn IgG positive cases were 51 (51%) in the patients and 20 (3333%) in controls. Positive rate in patients was higher than that in controls (χ2=4472，P=0029).Conclusion: CPn positive rate is higher in CHD patients than that in controls(χ2=4472，P=0029). CPn plays a certain role in the process of CHDs development.
　　【KEY WORDS】 CHD;CPn IgG；ELISA
冠心病(coronary heart disease,CHD)的病因和发病机制尚未完全阐明，近年来，感染、炎症与冠心病的关系成为研究的热点，从Saikku[1]等首篇报道肺炎衣原体与冠心病相关联的流行病学调查的文章以来，很多研究都显示CPn感染和冠心病之间存在某种关系，但也存在较大争议。因此本研究主要测定冠心病患者肺炎衣原体感染情况，并与健康对照组比较，探讨CPn感染和冠心病的关系，为其预防和治疗提供资料。
　　1 材料与方法
　　11 实验材料主要设备：低温冰柜；酶标仪；普通高速离心机主要试剂：肺炎衣原体 ELISA试剂盒
　　12 实验方法
　　121 标本的收集：空腹静脉血标本用EDTA-K2抗凝管收集。冠心病组:共100例，为河北北方学院附属第一医院20049~200510月住院的冠心病患者，男51例，女49例；年龄45~70岁，平均岁。病例均经心电图、心肌酶谱和临床症状等综合诊断，符合WHO冠心病诊断标准。健康对照组：60例，为来院进行健康体检者，男性32例，女28例；年龄43~71岁，平均岁，病例无冠心病症状、体征，超声心动图及心电图均正常。冠心病组与健康对照组组间年龄无统计学差异。
　　122 标本的处理取1ml全血放入15ml离心管中，5000转/min离心5min，分离血浆，-86℃保存，供测定血浆CPn IgG。
　　123 CPn IgG检测按CPn IgG ELISA试剂盒说明书，基本操作标本及试剂准备 冠心病、健康对照血浆标本从低温冰柜中取出，溶解并恢复至室温，离心。取上清液3μl，用标本稀释液对标本进行1∶41稀释，混匀。操作步骤① 取100μl稀释标本加入酶标板中，同时设阴、阳性对照各一孔，空白对照一孔，轻轻混匀； ② 置37℃温浴30min；③ 甩去板中液体，每孔加入150μl洗板液进行清洗，室温静置3min，弃去洗板液，反复4遍；④ 清洗后，每孔加入100μl酶结合物，37℃ 30min，使酶标抗体与标本充分结合。⑤ 清洗，操作同 ③ ，洗涤5次；⑥ 清洗后，每孔加入显色剂A、B各50μl，37℃ 10min；⑦ 用酶标仪比色测定波长为450nm，在20min内完成。
　　2 结果
　　结果判定 P/N≥21为阳性； P/N21为阴性。P/N为标本/阴性对照OD值；阴性对照小于010时以010计。冠心病组、健康对照组衣原体感染的比较，采用两样本率比较的χ2检验。100例冠心病人血浆CPn IgG阳性51例，占5100%；60例健康对照组血浆CPn IgG阳性20例，占3333%。冠心病组CPn IgG阳性率高于健康对照组，经χ2检验，χ2=4472，P=0029，冠心病组、健康对照组肺炎衣原体感染的比较差别有统计学意义,见表1。
　　表1 冠心病组、健康对照组肺炎衣原体感染比较
　　注：*χ2=4472, P=0029
　　3 讨论
　　肺炎衣原体感染与冠心病之间的关系一直是近年来倍受关注的课题。1988年Saikku等[1]首次报道肺炎衣原体与冠心病相关联的流行病学调查，自此冠心病的感染机制日益受到人们重视，进行了大量的基础、血清流行病学和临床研究，并得出了不同的结论。顾向明等采用酶联免疫法测定50例冠心病患者、33例冠脉造影正常的非冠心病组患者和44例正常对照者血清CPn IgG和IgM，探讨肺炎衣原体(CPn)与冠心病(CHD)的相互关系，结果冠心病组与非冠心病组和正常对照组CPn IgG比较有显着性差异(P001)，得出CP感染与CHD的发生密切相关的结论。Davidson等对60例尸检病例进行回顾性研究，发现肺炎衣原体感染血清IgG的检出早于冠状动脉硬化的早期损害，提示肺炎衣原体慢性感染在冠心病进展中的重要作用。Liu R 等研究急性冠脉综合征中CP的免疫学反应及其血清学反应的关系，对急性冠脉综合症22例和非急性冠脉综合症18例，用免疫组化方法检测标本中的CPn并作数量上的比较，测量血清中CPn IgA、IgG抗体以及hs-CRP。分析血清和组化相关性。结果急性冠脉综合征病人血栓中经常检出CPn+细胞，病人CPn IgA伴CPn+ cells浓度增高，而IgG则不。相反，也有的报道肺炎衣原体与冠心病无相关性。Wald等报告了一项研究,随访8年,肺炎衣原体的IgG和IgA抗体检测结果提示肺炎衣原体与冠心病的关系尚不能肯定。随访12年,得出肺炎衣原体的IgG抗体与冠心病无显着关系。在Altman等的研究中,159例经冠脉造影确诊的稳定心绞痛患者,按CPn IgG抗体结果分成阳性组和阴性组,以发生急性心肌梗死(AMI)、不稳定型心绞痛(UA)、需做经皮冠状动脉介入治疗(PCI),或冠脉搭桥术为观察终点,随访2年,结果无显着差异,说明CPn感染与急性心血管事件无关。马丽雅等采用酶标法测定冠心病组(120例)和对照组(120例)血清CPn特异性抗体IgM，结果稳定心绞痛组、急性冠脉综合症组、冠心病合并心衰与正常对照组相比,差异无显着性(P005)，得出CPn IgM 感染与冠心病没有良好的相关性。Mendiss对北部亚洲人进行血清学调查，认为不能确定CPn感染为这个地区人群慢性冠心病(CCAD)发病的独立因素，CPn可能是在冠心病的传统因素的基础上对CHD发挥作用。本文应用酶标法检测健康对照组与冠心病组血浆CPn IgG抗体，结果100例冠心病人血浆CPn IgG阳性51例，占5100%；60例健康对照组血浆CPn IgG阳性20例，占3333%。经χ2检验，χ2=4472，P=0029，冠心病组、健康对照组肺炎衣原体感染的比较差别有统计学意义，这与国内外的一些研究一致。说明肺炎衣原体感染在冠心病的发生、发展中可能起到一定的作用。但同时从前面论述可以看出也有相当数量的研究者认为肺炎衣原体感染与冠心病的发病及进展无关，总之，CPn在冠心病发病机制的研究结果未能达成共识，无论是临床流行病学还是治疗上都出现了矛盾的结果，因此对CPn在冠心病中作用有待进一步研究。
　　参考文献
　　1 Saikku P，Leinonen M，Mattila K，et at．Serological evidence of an association of a novel Chlamydia,TWAR, with chronic coronary heart disease and acute myocardial infarction[J].Lancet,1988,2 (8618):983986
　　2 顾向明,许翠锦,黄阶胜,等.肺炎衣原体、幽门螺杆菌抗体及超敏CRP检测与冠心病关系的临床研究[J]. 国外医学临床生物化学与检验学分册,2005,26(8):484487
　　3 Davidson M, Kuo CC, Middaugh JP，et at．Confirmed previous infection with Chlamydia pneumoniae (TWAR) and its presence in early coronary atherosclerosis[J]．Circulation，1998，98(7)：628633
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　　5 Wald NJ, Law MR, Morris JK, et al．Chlamydia pneumoniae infection and mortality from ischaemic heart disease: large prospective study[J]. BMJ, 2000, 321(7255):204207
　　6 Altman R,Rouvier J,Scazziota A,et　of association between prior infection with Chlamydia pneumonias and acute or chronic artery disease[J].Clin Cardiol,1999,22(2):8590
　　7 马丽雅,卢启明,马华,等.肺炎衣原体感染与冠心病相关性研究[J].兰州大学学报(医学版),2005,31(2):3536
　　8 Mendiss N,Arseculeratne YM,Withana N,et　pneumoniae infectionandits association with coronaryheart diease and cardiorascular riskfactors in a sample south asian populationint[J]. J Cardiol,2001,79 (2-3):191196