YY动物细胞工程12.ppt.ppt

第一页，共四十七页。提问提问(twn)：v植物细胞工程常用植物细胞工程常用(chn yn)的技术手段有哪些？的技术手段有哪些？植物组织培养植物组织培养,植物体细胞植物体细胞(xbo)杂交杂交这些技术的理论基础：这些技术的理论基础：植物细胞的全能性植物细胞的全能性动物细胞全能性如何？动物细胞全能性如何？动物细胞工程动物细胞工程常用的技术有哪些？常用的技术有哪些？第二页，共四十七页。动物动物(dngw)细胞培细胞培养养动物动物(dngw)细胞融合细胞融合单克隆抗体单克隆抗体(kngt)制备制备细胞核移植细胞核移植动物动物细胞细胞工程工程技术技术动物细胞工程的基础动物细胞工程的基础第三页，共四十七页2.2.1动物动物(dngw)(dngw)细胞培养和核移植技细胞培养和核移植技术术第四页，共四十七页。教学教学(jio xu)目标目标简简述述动动物物细细胞胞培培养养的的过过程程、条条件件及及应用。应用。简简述述通通过过动动物物体体细细胞胞核核移移植植技技术术克克隆隆(k ln)动物的过程和应用前景。动物的过程和应用前景。第五页，共四十七页。重点重点动物细胞培养的过程及条件动物细胞培养的过程及条件(tiojin)。用动物体细胞核移植技术克隆动物的用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。过程。难点难点用动物体细胞核移植技术克隆动物的用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。过程。重点难点重点难点第六页，共四十七页。烧伤病人烧伤病人(bngrn)图图片片异体皮肤移植异体皮肤移植(yzh)图图片片第七页，共四十七页。皮肤烧伤，如果创面很小（不大于硬币）只要保皮肤烧伤，如果创面很小（不大于硬币）只要保持清洁，甚至深度烧伤，也可能自愈。如果下层真皮持清洁，甚至深度烧伤，也可能自愈。如果下层真皮受损面积较大受损面积较大(jio d)(jio d)，常常需要植皮。植皮需要的健康，常常需要植皮。植皮需要的健康皮片。植皮需要的健康皮片，可以取自烧伤病人自身皮片。植皮需要的健康皮片，可以取自烧伤病人自身未烧伤的部位（自体植皮），也可取自其他活人或尸未烧伤的部位（自体植皮），也可取自其他活人或尸体（异体植皮等。自体植皮是永久性的，取自其他体（异体植皮）等。自体植皮是永久性的，取自其他人或动物的植皮是暂时性的，是在创面愈合过程中为人或动物的植皮是暂时性的，是在创面愈合过程中为保护创面而采取的措施，保护创面而采取的措施，10101414天后就要被身体排斥。天后就要被身体排斥。如果一个大面积烧伤的病人来说，自体皮肤有如果一个大面积烧伤的病人来说，自体皮肤有限，其他渠道的皮肤来源不足。如何才能限，其他渠道的皮肤来源不足。如何才能(cinng)(cinng)获得获得大量的自体健康皮肤？大量的自体健康皮肤？第八页，共四十七页。人耳鼠“人耳鼠人耳鼠”再出风头再出风头 2001 2001年，一只特别的活老鼠在北年，一只特别的活老鼠在北京引起轰动京引起轰动这是有着一对红眼睛这是有着一对红眼睛的、尾巴长长的、浑身没毛的小白鼠。的、尾巴长长的、浑身没毛的小白鼠。值得一提的是，这只小白鼠的背上，值得一提的是，这只小白鼠的背上，竟长着一只几乎竟长着一只几乎(jh)(jh)与身子一般大小与身子一般大小的的“人耳人耳”。这只老鼠背上的。这只老鼠背上的“人耳人耳”是由上海市第九人民医院副院长、是由上海市第九人民医院副院长、整复外科主任曹谊林教授利用组织工整复外科主任曹谊林教授利用组织工程技术复制出来的。程技术复制出来的。在京展出的数天，尽管在京展出的数天，尽管(jn gun)(jn gun)门票高达门票高达2020元，但还是有将近元，但还是有将近2020万人，心甘情愿地掏钱一睹万人，心甘情愿地掏钱一睹“人耳鼠人耳鼠”的风采。的风采。人耳鼠的出现(chxin)，透露了怎样的信息？第九页，共四十七页。1、概念、概念(ginin)是指从动物是指从动物(dngw)(dngw)机体内取出相关的机体内取出相关的组组织织，将它分散成，将它分散成单个细胞单个细胞，然后放在，然后放在适宜的适宜的培养基培养基中，让这些细胞中，让这些细胞生长生长和和增增殖殖。2、原理、原理(yunl)细胞分裂增殖细胞分裂增殖一、动物细胞培养一、动物细胞培养如何进行细胞培养如何进行细胞培养?第十页，共四十七页。请同学阅读教材请同学阅读教材(jioci)(jioci)和图和图2-12-16 6来描述细胞培养的基本过程：来描述细胞培养的基本过程：第十一页，共四十七页。取动物取动物(dngw)动的动的组织块组织块胰蛋白酶胰蛋白酶(y dn bi mi)剪碎剪碎单个单个细胞细胞(xbo)加培加培养液养液细胞细胞悬浮悬浮液液接触接触抑制抑制部分细胞部分细胞“癌变癌变”，无限传代，无限传代动物细胞培养不能动物细胞培养不能最终培养成动物体最终培养成动物体10代代细胞细胞原原代代培培养养传代培养传代培养细细胞胞贴贴壁壁胰蛋白酶胰蛋白酶处理、处理、细胞株细胞株细胞细胞细胞系细胞系2.动物细胞培养过程：动物细胞培养过程：50代代细胞细胞培养瓶培养瓶适宜条适宜条件培养件培养分瓶分瓶培养培养第十二页，共四十七页。强调一：细胞强调一：细胞(xbo)贴壁过程贴壁过程细胞贴壁：细胞贴壁：在培养在培养(piyng)瓶悬液中分散的细胞很快就贴瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。附在瓶壁上，称为细胞贴壁。培养瓶或培养皿壁要求培养瓶或培养皿壁要求(yoqi)：表面光滑、无毒、易表面光滑、无毒、易于于 贴贴 附。附。第十三页，共四十七页。当贴壁细胞分裂生长到当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触表面相互接触(jich)(jich)时时,细细胞就会停止分裂增殖，胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接这种现象称为细胞的接触抑制。触抑制。强调强调(qing dio)二：接触抑二：接触抑制制第十四页，共四十七页。有关有关(yugun)概概念念:1 1、原代培养：原代培养：将动物组织消化后的初次将动物组织消化后的初次 培养培养。（分瓶前）（分瓶前）2 2、传代培养：传代培养：将将贴满瓶壁的需要重新用胰蛋贴满瓶壁的需要重新用胰蛋白酶等处理，然后白酶等处理，然后(rnhu)(rnhu)分瓶继续分瓶继续培养培养，让细，让细胞继续增殖。这样的胞继续增殖。这样的培养培养过程过程称为传代培养。称为传代培养。（分瓶后）（分瓶后）第十五页，共四十七页。在传代培养过程在传代培养过程(guchng)中中 10代以前的代以前的细胞核型不变细胞核型不变 1050代，增殖逐渐减慢，以至于完全停代，增殖逐渐减慢，以至于完全停止，部分细胞的细止，部分细胞的细胞细胞核型可能发生改变胞细胞核型可能发生改变 50代以后的细胞发生突变，获得不死性，代以后的细胞发生突变，获得不死性，朝着等同于癌细胞的方向发展。朝着等同于癌细胞的方向发展。应用应用(yngyng)(yngyng)：目前：目前使用的使用的或或冷冻保存的冷冻保存的正常细胞通正常细胞通常为常为1010代以内代以内，以保持细胞，以保持细胞正常的二倍体核型正常的二倍体核型。第十六页，共四十七页。有关有关(yugun)概念概念3 3、细胞株：细胞株：10到到40、50代的细胞，遗传代的细胞，遗传物质没发生物质没发生(fshng)改变。改变。4 4、细胞系：、细胞系：超过超过50代的细胞，遗传物代的细胞，遗传物质发生改变，可无限增殖。质发生改变，可无限增殖。细胞株和细胞系的区别细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。容易传代培养。第十七页，共四十七页。细胞细胞悬浮悬浮液液1010代代细胞细胞5050代代细胞细胞无限传无限传代代原代培养原代培养传代培养传代培养细胞株细胞株细胞系细胞系如何界定如何界定(ji dn)(ji dn)原代培养和传代培养；细胞株和细胞系原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？多数组织细胞固定在表面生多数组织细胞固定在表面生长和分裂长和分裂。随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖遗传物质改变遗传物质改变(gibin)第十八页，共四十七页。思考题：思考题：1 1、选用、选用(xunyng)(xunyng)健康动物体内什么样的组织块做细胞培养健康动物体内什么样的组织块做细胞培养材料？为什么？材料？为什么？因为这些组织因为这些组织(zzh)(zzh)或器官，分裂能或器官，分裂能力旺盛，易于培养。力旺盛，易于培养。动物胚胎或幼龄个体动物胚胎或幼龄个体(gt)(gt)的器官或组织的器官或组织拓展拓展-动物组织或细胞培养的难易程度动物组织或细胞培养的难易程度幼体组织或细胞幼体组织或细胞 老龄组织或细胞老龄组织或细胞分化程度低的组织或细胞分化程度低的组织或细胞 分化程度高的组织分化程度高的组织 或细胞或细胞肿瘤组织或细胞肿瘤组织或细胞 正常组织或细胞正常组织或细胞第十九页，共四十七页。3、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明(shumng)细胞细胞间的物质是什么成份？间的物质是什么成份？催化蛋白质水解。细胞间的物质催化蛋白质水解。细胞间的物质(wzh)(wzh)主要是蛋主要是蛋白质白质(胶原蛋白等胶原蛋白等)。4、细胞膜的主要、细胞膜的主要(zhyo)成份是什么？成份是什么？蛋白质和磷脂蛋白质和磷脂成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长和增殖，成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长和增殖，且细胞不能与培养液充分接触，不利于培养。且细胞不能与培养液充分接触，不利于培养。2 2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？第二十页，共四十七页。6 6、既然胰蛋白酶能将细胞消化、既然胰蛋白酶能将细胞消化(xiohu)(xiohu)掉，那将动物组掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？织分散成单个细胞要注意什么问题呢？7 7、能够用胃蛋白酶、能够用胃蛋白酶(wi dn bi mi)(wi dn bi mi)代替胰蛋白酶吗？为代替胰蛋白酶吗？为什么什么？注意注意(zh y)时间的控制时间的控制 不能，因为两者的最适不能，因为两者的最适PHPH不同，而正常组织细不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PHPH较接近较接近5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？能能第二十一页，共四十七页。3.3.总结总结(zngji)(zngji)：动物细：动物细胞培养过程胞培养过程动物胚胎动物胚胎(piti)或幼龄动或幼龄动物的组织、器官物的组织、器官细胞细胞(xbo)悬浮液悬浮液剪碎用胰蛋白酶处理剪碎用胰蛋白酶处理1010代细胞代细胞转入培养瓶转入培养瓶40-5040-50代细胞代细胞传传代代培培养养无限传代无限传代单个细胞单个细胞加培养液稀释加培养液稀释传代传代1010代以内，代以内，遗传物质不改变，遗传物质不改变，保持正常二倍体核型保持正常二倍体核型。传代传代10-5010-50代左右，增长缓慢以至于代左右，增长缓慢以至于完全停止，完全停止，部分细胞核型可能发生变部分细胞核型可能发生变化化（遗传物质可能改变（遗传物质可能改变）为什么用胰蛋白酶处理？为什么用胰蛋白酶处理？原代培养特点：原代培养特点：细胞贴壁、接触抑细胞贴壁、接触抑制制继续传代培养少部分细胞继续传代培养少部分细胞获得不死性获得不死性，细胞突变细胞突变，遗传物质已经改变遗传物质已经改变，等同等同于癌细胞于癌细胞。原原代代培培养养第二十二页，共四十七页归纳归纳(gun)过程过程取取 的组织的组织(zzh)(zzh)、器官、器官细胞细胞(xbo)悬浮悬浮液液 酶酶 细胞贴壁、接细胞贴壁、接触抑制触抑制 培养培养 10 10代细胞代细胞 培养培养细胞株细胞株无限传代无限传代细胞系细胞系单个细胞单个细胞加加 液液遗传物质遗传物质 改变改变遗传物质遗传物质 改变改变动物胚胎或幼龄动物动物胚胎或幼龄动物胰蛋白胰蛋白培养培养原代原代传代传代未未已已50代细胞代细胞第二十三页，共四十七页。多细胞多细胞(xbo)动物和人体的细胞动物和人体的细胞(xbo)都生活在内环境中，根据你所都生活在内环境中，根据你所学的知识，思考并讨论下列问题学的知识，思考并讨论下列问题？1、体外培养细胞时需要哪些提、体外培养细胞时需要哪些提供那些物质？供那些物质？2、体外培养的细胞需要什么样、体外培养的细胞需要什么样的环境条件？的环境条件？第二十四页，共四十七页。1 1、无菌、无毒的环境（先、无菌、无毒的环境（先培养液培养液、培养器具培养器具无无菌处理；添加一定量的菌处理；添加一定量的抗生素抗生素，防止污染，防止污染(wrn)(wrn)；定期；定期更换培养液更换培养液，清除代谢产物清除代谢产物)2 2、营养、营养 糖糖（葡萄糖）、（葡萄糖）、氨基酸氨基酸、促生长因子促生长因子、无机无机盐盐和和微微 量元素量元素等（合成培养基）；通常等（合成培养基）；通常+血血清或血浆清或血浆等天然成分。等天然成分。（二）（二）动物动物(dngw)细胞培养的条件细胞培养的条件第二十五页，共四十七页。第二十六页，共四十七页。3 3、温度温度(36.5(36.50.5)0.5)和和P PH H(7.2(7.27.4)7.4)4 4、气体环境：、气体环境：主要主要(zhyo)(zhyo)有有O O2 2和和COCO2 2（操作中用的是（操作中用的是95%95%空气空气和和5%CO5%CO2 2 ）提醒提醒 CO2 2作用作用调节调节(tioji)培养基培养基pH;O2 2作用作用细胞有氧呼吸，细胞代谢必需细胞有氧呼吸，细胞代谢必需 所用装置所用装置培养皿或松盖培养瓶培养皿或松盖培养瓶+培养箱。培养箱。第二十七页，共四十七页。获得获得(hud)(hud)细胞细胞细胞细胞(xbo)(xbo)的全能的全能性性细胞株、细胞系细胞株、细胞系植物体植物体培养培养(piyng)(piyng)结果结果或细胞产物或细胞产物快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株等无病毒植株等培养目的培养目的葡萄糖、动物葡萄糖、动物血清血清蔗糖、植物激蔗糖、植物激素素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较项目植物组织和动物细胞培养的比较植物组织和动物细胞培养的比较第二十八页共四十七页。（三）（三）动物细胞培养技术动物细胞培养技术(jsh)的应用的应用v1大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）扰素、单克隆抗体）v2作为基因工程中的受体细胞作为基因工程中的受体细胞v3培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性判断某种物质的毒性v4培养正常或各种病变培养正常或各种病变(bngbin)的细胞，用于生的细胞，用于生理、病理、药理等研究，为治疗和预防癌理、病理、药理等研究，为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据症及其他疾病提供理论依据第二十九页，共四十七页。二二.动物细胞核移植技术动物细胞核移植技术(jsh)(jsh)和克隆动物和克隆动物 将动物的一个将动物的一个细胞核细胞核，移入一个已经，移入一个已经去掉去掉细胞核细胞核的的卵母细胞卵母细胞中，使其中，使其重组重组并发育成一个并发育成一个新的胚胎新的胚胎(piti)，这个新的胚胎最终发育为，这个新的胚胎最终发育为动物个动物个体体（克隆动物）（克隆动物）分分类类胚胎细胞核移植：胚胎细胞核移植：体细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，恢复细胞分化程度低，恢复(huf)全能性容易全能性容易 细胞分化程度高，恢复全能性不细胞分化程度高，恢复全能性不容易容易1、动物细胞核移植概念：动物细胞核移植概念：第三十页，共四十七页。2、体细胞核移植的过程体细胞核移植的过程(guchng)：第三十一页，共四十七页。(2 2）核移植的受体细胞核移植的受体细胞M中期中期(zhngq)卵母细胞卵母细胞用物理或化学方法激活受体细胞，完成细胞分裂用物理或化学方法激活受体细胞，完成细胞分裂和发育和发育(fy)进程。进程。（4 4）.再激活受体细胞，构建重组再激活受体细胞，构建重组(zhn z)(zhn z)胚胎方法胚胎方法 归纳：归纳：(1 1).原理：动物原理：动物 细胞核细胞核 的全能性的全能性(不能说动物细胞不能说动物细胞 全能性全能性)（3 3）核移植时，先用核移植时，先用 电刺激电刺激 使供、受体细胞使供、受体细胞融合融合 第三十二页，共四十七页。（5 5）选卵母细胞做受体细胞原因选卵母细胞做受体细胞原因(yunyn)体积大，易操作体积大，易操作 ；含有促使细胞核全能性表含有促使细胞核全能性表达的达的物质物质(wzh)(wzh)和营养条件。和营养条件。（6 6）去掉去掉(q dio)(q dio)受体卵母细胞的核的原因受体卵母细胞的核的原因保证核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自保证核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自（有重要利用价值的动物提供的）供体细胞。（有重要利用价值的动物提供的）供体细胞。（8.8.）属无性生殖，基因型不变（与供属无性生殖，基因型不变（与供核核动物动物基因基因型一型一致）致）（7 7核移植的供体细胞选用传代核移植的供体细胞选用传代1010代以内细胞的代以内细胞的原因原因因为因为1010代以内的细胞一般能代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核保持正常的二倍体核型型,保证了供体细胞正常的遗传基础。保证了供体细胞正常的遗传基础。第三十三页，共四十七页。（9.9.）移植产生的克隆动物与提供细胞核的亲本移植产生的克隆动物与提供细胞核的亲本(qn bn)(qn bn)不不100%100%相同的原因相同的原因1)1)绝大部分绝大部分DNADNA来自来自(li z)(li z)于供体细胞核，但其核外还有少量于供体细胞核，但其核外还有少量的的DNADNA，即线粒体中的，即线粒体中的DNADNA（细胞质遗传）是来自（细胞质遗传）是来自(li z)(li z)于受体于受体卵母细胞。卵母细胞。2)2)外界外界环境条件环境条件(tiojin)的影响引起的影响引起不可遗传的变异不可遗传的变异。3)3)在发育过程中可能发生在发育过程中可能发生 基因突变基因突变,染色体变异染色体变异 导导 致性状改变。致性状改变。（10.10.）该过程用到的技术手段：该过程用到的技术手段：动物细胞培养动物细胞培养、动物细胞融合动物细胞融合、早期胚胎培养早期胚胎培养 和和 胚胎移植胚胎移植。第三十四页，共四十七页。3、体细胞核移植技术的应用体细胞核移植技术的应用(yngyng)前景：前景：（1）、在畜牧业中可、在畜牧业中可以以加速家畜遗传加速家畜遗传(ychun)改改良的进程良的进程（2）、保护保护濒危濒危(bnwi)物种物种（3）、医药卫生领、医药卫生领域域生产医用蛋白质生产医用蛋白质及及组组织器官的移植织器官的移植（4）、了解胚胎发育和衰老过了解胚胎发育和衰老过程程；追踪研究疾病的发展过程和追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病治疗疾病第三十五页，共四十七页。4、体细胞核移植技术体细胞核移植技术(jsh)存在的问题：存在的问题：成活率低成活率低;克隆克隆(k ln)(k ln)动物的健康问题动物的健康问题;克隆动物食品的安全性问题。克隆动物食品的安全性问题。克隆人的伦理问题克隆人的伦理问题第三十六页，共四十七页。思考思考(sko)与探究与探究2.动物细胞培养要经过脱分化动物细胞培养要经过脱分化(fnhu)的过程吗？的过程吗？为什么？为什么？动物细胞培养不需经过脱分化过程。因高度分化动物细胞培养不需经过脱分化过程。因高度分化的动物细胞发育的动物细胞发育(fy)潜能变窄，失去了发育潜能变窄，失去了发育(fy)成成完整个体的能力，所以，动物细胞也就没有类似完整个体的能力，所以，动物细胞也就没有类似植物组织或细胞培养时的脱分化过程了。要想使植物组织或细胞培养时的脱分化过程了。要想使培养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动培养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。第三十七页，共四十七页。3.1997年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛达年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛达（Lucinda）的奶牛，年产奶量为）的奶牛，年产奶量为30.8 t，创造了世界奶牛产奶，创造了世界奶牛产奶量最高新纪录。目前世界各国高产奶牛场奶牛，年平均产奶量一般量最高新纪录。目前世界各国高产奶牛场奶牛，年平均产奶量一般(ybn)为十几吨，而我国奶牛产奶量年平均水平仅为为十几吨，而我国奶牛产奶量年平均水平仅为34 t。（1）能利用体细胞核移植技术克隆高产奶牛卢辛达吗？请说明理）能利用体细胞核移植技术克隆高产奶牛卢辛达吗？请说明理由。由。可以。卢辛达的产奶量很高，有高产奶的遗传基础，可以。卢辛达的产奶量很高，有高产奶的遗传基础，利用卢辛达的体细胞克隆的奶牛其遗传物质基本上全利用卢辛达的体细胞克隆的奶牛其遗传物质基本上全部部(qunb)来自该奶牛，其克隆牛具有高产的遗传基础，来自该奶牛，其克隆牛具有高产的遗传基础，如果精心培育和饲养，有可能在世界范围内推广，克如果精心培育和饲养，有可能在世界范围内推广，克隆牛再与高产的公牛自然繁殖，可得到很多高产的后隆牛再与高产的公牛自然繁殖，可得到很多高产的后代，从而加快奶牛改良进程。代，从而加快奶牛改良进程。该克隆牛不能无限制地推广，其数量不宜过多，尤其是在该克隆牛不能无限制地推广，其数量不宜过多，尤其是在小范围内不能无限的繁殖，以避免奶牛群出现近亲繁殖小范围内不能无限的繁殖，以避免奶牛群出现近亲繁殖(jn qn fn zh)而引起种质衰退。而引起种质衰退。第三十八页，共四十七页。（2）如果）如果(rgu)将克隆高产奶牛卢辛达的任务交给你，你将如将克隆高产奶牛卢辛达的任务交给你，你将如何对它进行克隆？何对它进行克隆？从卢辛达耳朵（也可用别的组织、器官，耳朵在活体上从卢辛达耳朵（也可用别的组织、器官，耳朵在活体上容易取）上剪取一小块组织，在体外培养获得该组织容易取）上剪取一小块组织，在体外培养获得该组织（如软骨组织）的细胞。从屠宰场取废弃的牛卵巢，抽（如软骨组织）的细胞。从屠宰场取废弃的牛卵巢，抽取卵母细胞体外培养成熟。用显微针去除卵母细胞的核，取卵母细胞体外培养成熟。用显微针去除卵母细胞的核，再将耳细胞注入卵母细胞，用电刺激方法使卵母细胞与再将耳细胞注入卵母细胞，用电刺激方法使卵母细胞与体细胞融合，这时供体核就进入了受体卵母细胞，再用体细胞融合，这时供体核就进入了受体卵母细胞，再用电刺激或化学物质激活注入了体细胞核的卵母细胞，使电刺激或化学物质激活注入了体细胞核的卵母细胞，使其完成减数分裂和发育过程其完成减数分裂和发育过程(guchng)。核移植胚胎在体外短。核移植胚胎在体外短时间培养后，挑选正常卵裂的胚胎植入经同期发情处理时间培养后，挑选正常卵裂的胚胎植入经同期发情处理的受体母牛体内。的受体母牛体内。第三十九页，共四十七页。4.体细胞核移植技术在研究和应用上还存在什么问体细胞核移植技术在研究和应用上还存在什么问题？请你查阅题？请你查阅(chyu)资料，了解这方面的前沿动态。资料，了解这方面的前沿动态。研究方面：克隆动物基因组重新编程的机制尚不清楚，研究方面：克隆动物基因组重新编程的机制尚不清楚，克隆技术效率低，克隆动物畸形率高、死亡率高、易克隆技术效率低，克隆动物畸形率高、死亡率高、易出现早衰出现早衰(zoshui)等问题。这些问题尚在研究中。等问题。这些问题尚在研究中。应用上：生产克隆动物费用昂贵，距大规模应用还有一定距应用上：生产克隆动物费用昂贵，距大规模应用还有一定距离。离。第四十页，共四十七页。2 2、在动物细胞、在动物细胞(xbo)(xbo)培养过程中遗传物质发生改变的培养过程中遗传物质发生改变的细胞细胞(xbo)(xbo)是是 （）A A获得不死性的细胞获得不死性的细胞 B B1010代以内细胞代以内细胞 C C原代细胞原代细胞 D D传代细胞传代细胞1 1、动物细胞工程技术的基础是、动物细胞工程技术的基础是 （）A.A.动物细胞融合动物细胞融合 B.B.单克隆抗体单克隆抗体(kngt)(kngt)C.C.胚胎移植胚胎移植 D.D.动物细胞培养动物细胞培养A AD D课堂课堂(ktng)反馈练习反馈练习第四十一页，共四十七页。3 3、在动物细胞培养的有关叙述中正确的是：（、在动物细胞培养的有关叙述中正确的是：（）A A、动物细胞培养的目的只是为了、动物细胞培养的目的只是为了(wi le)(wi le)获得大量的细胞获得大量的细胞 分泌蛋白分泌蛋白B B、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散C C、细胞的癌变发生在原代培养向传代培养的过渡、细胞的癌变发生在原代培养向传代培养的过渡 过过程中程中D D、培养至、培养至5050代后传代细胞遗传物质没有发生改变代后传代细胞遗传物质没有发生改变B B第四十二页，共四十七页。4 4、一般说来，动物细胞体外培养需要满足以下、一般说来，动物细胞体外培养需要满足以下(yxi)(yxi)条件（条件（）无毒的环境无毒的环境 无菌的环境无菌的环境 培养基需要加入血清培养基需要加入血清 温度与动物体温相似温度与动物体温相似(xin s)(xin s)需要需要O O2 2，不需要，不需要COCO2 2 CO CO2 2能调节培养液能调节培养液PHPHA A、B B、C C、D D、D D第四十三页，共四十七页。5 5、动物细胞培养的特点、动物细胞培养的特点(tdin)(tdin)（）细胞贴壁细胞贴壁 有丝分裂有丝分裂 细胞分化细胞分化 接触抑制接触抑制 减数分裂减数分裂 原代培养一般传原代培养一般传1 11010代代A A、B B、C C、D D、A A第四十四页，共四十七页。6 6、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答：答：（1 1）容器）容器A A中放置的是动物器官或组织。它一般取自中放置的是动物器官或组织。它一般取自_。（2 2）容器）容器A A中的动物器官或组织首先要进行的处中的动物器官或组织首先要进行的处理理(chl)(chl)是是 ，然后用，然后用 酶处理，酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是 。动物动物(dngw)胚胎或幼龄胚胎或幼龄动物动物(dngw)剪碎剪碎胰蛋白胰蛋白(dnbi)使细胞与培养液充分接触，便于培养使细胞与培养液充分接触，便于培养第四十五页，共四十七页。（3 3）培养首先在）培养首先在B B瓶中进行，瓶中的培养基成分有瓶中进行，瓶中的培养基成分有 _等。在此瓶中培养一段时间后，有等。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第许多细胞衰老死亡，这是培养到第 代。代。（4 4）为了把）为了把B B瓶中的细胞分装瓶中的细胞分装(fn zhun)(fn zhun)到到C C瓶中，用瓶中，用 处理，然后配置成处理，然后配置成 ，再分，再分装。装。动物动物(dngw)血清血清10胰蛋白酶胰蛋白酶(y dn bi mi)细胞悬浮液细胞悬浮液第四十六页，共四十七页。内容(nirng)总结动物细胞工程。这只老鼠背上的“人耳”是由上海市第九人民医院副院长、整复外科主任曹谊林教授利用组织工程技术复制出来的。细胞悬浮液。培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于。3、细胞株：10到40、50代的细胞，遗传物质没发生改变。3、温度(wnd)(36.50.5)和PH(7.27.4)。所用装置培养皿或松盖培养瓶+培养箱。1大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）第四十七页，共四十七页。