Agilent-1260-LC-(液相)现场培训手册.pdf

www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 Agilent 12Agilent 12Agilent 12Agilent 126 6 6 60 LC0 LC0 LC0 LC Agilent OpenLAB C.01.02(中文中文中文中文)现场培训教材现场培训教材现场培训教材现场培训教材 安捷伦科技有限公司 生命科学与化学分析仪器部 www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 1 Agilent 1260 液相现场培训手册 一、目录 二、培训目的.3 三、培训准备.3 1.仪器准备.3 2.溶剂准备.3 四、方法建立.3 1.开机准备.3 2.数据采集方法编辑.9?G1310A(单元泵).9?G1312X(二元泵)/G1311X(四元泵).10?G1313A(标准型自动进样器)，G1329B(自动控温自动进样器).11?G1367E(高性能自动进样器).12?G1328A(手动进样器).14?G1316A/C(柱温箱).15?G1314BC/E/F(可变波长紫外检测器).15?G1315C/D,G4212A/B(二极管阵列检测器)/G1365C/D(多波长紫外检测器).17?G1362A(示差检测器).18?G1321A(荧光检测器).19?G4218A(蒸发光散射检测器).21 3.数据分析方法编辑.22?谱图优化.22?积分参数优化.23?校正.25?打印报告.27?光谱.28 4.建立全新完整方法向导.30 5.进样.30?单针进样.30?序列进样.31 www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 2 Agilent 1260 液相现场培训手册 五、关机.33 1.关闭检测器的灯.33 2.冲洗系统.33 3.封存色谱柱.33 4.关闭电脑.33 5.关闭模块.33 六、RRLC(快速液相)注意事项.33 七、特殊检测器的注意事项.35 八、Agilent 1260 常见问题解决方法.37 附一、维护知识.39 附二、注册 OpenLAB CDS 许可证的流程.41 *注意注意注意注意：本教材仅适用于现场工程师培训讲解参考之用本教材仅适用于现场工程师培训讲解参考之用本教材仅适用于现场工程师培训讲解参考之用本教材仅适用于现场工程师培训讲解参考之用，内容为工作站现内容为工作站现内容为工作站现内容为工作站现场培训的一般要求场培训的一般要求场培训的一般要求场培训的一般要求，请根据用户的仪器配置及现场用户的需求进行相请根据用户的仪器配置及现场用户的需求进行相请根据用户的仪器配置及现场用户的需求进行相请根据用户的仪器配置及现场用户的需求进行相应的培训内容增删应的培训内容增删应的培训内容增删应的培训内容增删。安捷伦公司对本教材可能存在的错误及其后果不承担任何法律责安捷伦公司对本教材可能存在的错误及其后果不承担任何法律责安捷伦公司对本教材可能存在的错误及其后果不承担任何法律责安捷伦公司对本教材可能存在的错误及其后果不承担任何法律责任任任任，我们适时推出新版本的培训教材我们适时推出新版本的培训教材我们适时推出新版本的培训教材我们适时推出新版本的培训教材，恕不另行通知恕不另行通知恕不另行通知恕不另行通知。www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 3 Agilent 1260 液相现场培训手册 二、培训目的培训目的培训目的培训目的?基本了解 1260LC 硬件操作。掌握化学工作站的开机，关机，参数设定,学会数据采集,数据分析的基本操作。三、培训准备培训准备培训准备培训准备 1.1.1.1.仪器准备仪器准备仪器准备仪器准备：Agilent Agilent Agilent Agilent 1260126012601260?G1310B(单元泵)；G1312A/B，G1312C VL(二元泵)；G1311B,G1311C VL(四元泵)?G1313A(标准型自动进样器)；G1329B(自动控温自动进样器)；G1367E(高性能自动进样器);G4226A(1290ALS，1200bar，20uL，可用在 1260 上)?G1328C(手动进样器)?G1330AG1330B(自动进样器恒温模块)?G1316A,G1316C(柱温箱)?G1314B/C（VL）,G1314E/F(可变波长紫外检测器)?G1315C,G1315D VL；G4121A/B(二极管阵列检测器)?G1365C,G1365 VL(多波长紫外检测器)?G1362A(示差检测器)?G1321A(荧光检测器)?G4218A(蒸发光散射检测器)?色谱柱：Zorbax Eclipse XDB-C18 150 x 4.6 mm,5um column(P/N 993967-902/5063-6600)或相似填料的色谱柱 2.2.2.2.溶剂准备溶剂准备溶剂准备溶剂准备：?色谱级纯或优级纯乙腈或甲醇。?二次蒸馏水 四、方法建立方法建立方法建立方法建立 Agilent 方法建立包括：数据采集方法(仪器设置方法)以及数据分析方法(积分方法、校正方法等)两部分，下面分述这两部分的方法建立以及序列模板建立。1.1.1.1.开机准备开机准备开机准备开机准备：?启动计算机启动计算机启动计算机启动计算机：打开计算机电源，登陆 windows 操作系统?启动工作站启动工作站启动工作站启动工作站：打开 Agilent 1260 各模块电源。待 Agilent 1260 各模块自检完成后(各模块右上角指示灯为黄色或者无色)，点击屏幕左下角“开始”，选择“所有程序（P）”，选择”Agilent Technologies”选择“Open LAB”，选择 OpenLAB Control,或单击桌面图标,则会进入到下面的界面:www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 4 Agilent 1260 液相现场培训手册 下面步骤如果已经配置过，则不需要操作 通过点击菜单左上方的，可以分别创建位置和仪器，得到如下的界面 输入相关信息，注意仪器类型一栏要选择 Agilent LC System，输入完后点击确定。出现如下界面 www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 5 Agilent 1260 液相现场培训手册 选定刚刚创建的仪器名称，点击“配置仪器”，选择“配置模块”，注意不要选择“使用经典驱动程序”。如果仪器中包括 DAD、FLD，则需要选择“3D 光谱评估”。点击确定 选择“是”，来配置仪器 www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 6 Agilent 1260 液相现场培训手册 选择 IP 地址，输入仪器 IP，默认地址为 192.168.254.11。点击确定 系统会根据指定的 IP 地址来找到所配置的模块及其相关信息，点击确定。再次点击确定，使配置生效 www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 7 Agilent 1260 液相现场培训手册 点击“启动”或者“离线启动”来打开在线或离线工作站，也可点击“创建快捷方式”来生成。这样就不必每次使用都打开 OpenLAB 控制面板了。?开启工作站开启工作站开启工作站开启工作站：工作站打开，点击“方法和运行控制”或者在“视图”中选择“方法和运行控制”。打开仪器控制视图：选择“视图-系统视图”，即可显示仪器控制视图，选择“视图-样品视图”，即可显示样品信息视图 模块右上角状态灯颜色说明：无色，未开电源或者模块准备就绪 黄色，模块未准备就绪 绿色，正在进样分析 红色，模块出错 所有模块红色，仪器有漏液 工作站图形颜色说明：绿色，模块准备就绪 黄色，模块未准备就绪 蓝色，正在进样分析 红色，出错或者不能联机 灰色,此模块没启用?可将鼠标移至系统或各个模块的状态指示栏，系统会自动显示未就绪或出错的原因?配置流动相：将流动相装入溶剂瓶中。设置溶剂瓶参数，在溶剂瓶图形上单击鼠标左键，出现图形如下 www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 8 Agilent 1260 液相现场培训手册，点击“溶剂瓶填充量”设置溶剂瓶中流动相实际体积，也可设定低体积关泵?冲洗流动相管路：反时针旋开泵模块上的溶液排空阀。右键单击泵视图的空白处，选择“方法”，设置“流速”为 5ml/min。对于 G1311X(四元泵)分别将 A,B,C,D 四个通道设置“溶剂”为 100%(点击中各个通道后面的方框，即可开启“%”设置框，输入需要设置的数值百分比后，单击右侧的空白框，A相即可自动配置为100%-(%B+%C+%D)的百分比)，冲洗；对于 G1312X(二元泵)，冲洗 A、B 两个通道；对于 G1310X(单元泵)，冲洗一个通道即可?开启模块：鼠标右键点击每个模块的空白处都会弹出提示框，选择“控制”即可在新的窗口中选择打开或者关闭各个模块。也可在仪器视图中选择“打开”?监视基线监视基线监视基线监视基线：点击“视图-在线信号”打开“在线图谱”点击“改变”按钮，选择“可选信号”中需要监视的信号，“添加”到“选定信号中”。调整“窗口”中“X 周范围”，如需要画“0”点基线，请选择“画零线”。调整 Y 轴“Y 轴范 www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 9 Agilent 1260 液相现场培训手册 围”与“偏移量”或者选择“Y 轴自动调整”来选择合适的监视图形?平衡色谱柱平衡色谱柱平衡色谱柱平衡色谱柱、进样分析进样分析进样分析进样分析：关闭溶液排空阀(确认泵流量为 1ml/min)，监视压力和信号基线等待平稳后，可以进样采集分析 2.2.2.2.数据采集数据采集数据采集数据采集方法编辑方法编辑方法编辑方法编辑：?G1310A(单元泵单元泵单元泵单元泵)：?设置泵 右键点击泵模块视图空白处，选择“方法”或者点击进入泵的参数设置界面 流速-设置泵的流速，在“压力限-上限”200 时，流速设置范围为：05.00ml/min；在“压力限-上限”样品信息”后，将手动进样阀扳至“load”状态进样(将样品装入到定量环内)。对于 7725i 或者 3725(i)手动进样阀，样品进样量为定量环体积的 50%以下或者满定量环进样，对于 7750(i)或者 3750(i)手动进样阀，只能满定量环进样，否则进样量不准确。进样后，将手动进样器扳至“inject”状态，工作站自动开始记录采集数据。?分析完成后，将手动进样阀扳至“load”状态，用定量环的 5 倍体积左 www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 15 Agilent 1260 液相现场培训手册 右的甲醇清洗定量环，再在“inject”状态下清洗排空管路。清洗进样口，防止残留样品污染下次进样?G1316A,G1316C(柱温箱柱温箱柱温箱柱温箱)：右键点击柱温箱模块视图空白处，选择“方法”进入柱温箱的参数设置界面 温度-控制柱温箱温度。限值：-5.0 到 80.0 度(G1316A)或者-5.0 到 100.0度(G1316C)。柱温箱只能冷却到比环境温度低 10 度的温度 与检测池相同(G1316C)-可将温度设置为与配置检测器的池温度。只有在配置了 G1315C/D DAD 或者 G1365C/D MWD 的情况下，才会启用此选项 停止时间-设置柱温箱停止分析的时间。一般设置为“与泵一致”即可 时间表-此处可以变化的参数包括左右加热模块的温度?更多信息 启用分析-在任何温度下，选项可以指定是否开始分析与柱温箱温度无关；当温度在设定值之内，可以指定仅当温度位于指定的温度范围内时才开始分析 若系统中加装了柱切换阀，则会看到阀的图标和切换位置，根据时间选择和设定切换阀的方式即可?G1314B/C/E/F(可变波长紫外检测器可变波长紫外检测器可变波长紫外检测器可变波长紫外检测器 VWD)：?设置 VWD 右键点击 VWD 模块视图空白处，选择“方法”进入 VWD 的参数设置界面 www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 16 Agilent 1260 液相现场培训手册 波长-设置 VWD 检测波长 峰宽-设置为色谱图中的预期的最窄峰。峰检测器将忽略比峰宽设置窄很多或者宽很多的所有峰 停止时间-设置 VWD 停止分析时间。一般设置为“与泵一致”即可 杂项-当 VWD 与其他检测器一起工作或者设定冲洗色谱柱的梯度方法时，关闭检测器的灯，分析将停止。如果希望关闭检测器的灯时也能进行分析，将“采集所需的等已打开”一栏不选定即可。时间表-此处可以变化的参数包括自动平衡、改变波长、执行扫描?控制 右键点击 VWD 模块视图空白处，选择“控制”进入 VWD 的控制界面 www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 17 Agilent 1260 液相现场培训手册 灯-控制检测器灯的开关 接通电源时-选择，则在打开电源的同时也点灯。为了延长灯的寿命，建议不选此项，以便在冲洗系统或者其他不需要检测器工作的情况下节省灯的消耗 开启时间-可以设定自动开启的时间来提前预热氘灯准备分析?G1315C/D;G4212A/B(二极管阵列检测器二极管阵列检测器二极管阵列检测器二极管阵列检测器 DAD)G1365C/D多波长紫外检测器多波长紫外检测器多波长紫外检测器多波长紫外检测器MWD)：?设置 DAD 右键点击 DAD 模块视图的空白处，选择“方法”进入 DAD 的参数设置界面 信号-样品：检测到的样品吸光度所对应的波长。参比波长对应的吸光度将从样品波长对应的吸光度中扣除；带宽：样品波长的带宽。带宽决定了检测吸光度的波长范围通常小于20nm，例如，样品波长为254nm，样品带宽为 20nm，则从 244 到 264nm 的波长范围检测吸光度；参比：参比吸光度对应的波长。参比波长可以补偿由于基线吸光度中的变化(例如，由于梯度洗脱中溶剂组成的变化)而引起的波动；带宽：参比波长的带宽通常设定为小于 100nm。G1315C/D 和 G4212A/B 二极管阵列检测器可以存储 8 个信号 停止时间-设置 DAD 停止分析时间。一般设置为“与泵一致”即可 光谱-存储：定义了在信号 A 上提取并保存光谱的点。“无”，未提取光谱；“顶点+基线”，在风的顶点和基线处提取光谱；“顶点+斜率+基线”，在峰的顶点、基线、上升斜率和下降斜率提取光谱；“峰中的全部”，提取峰内的所有光谱；“每个一条光谱”，选择“全部”，将连续提取光谱，但是只每个一条光谱存储一条光谱，其他光谱将被弃 www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 18 Agilent 1260 液相现场培训手册 用，这样可以减少必要的数据存储量；“全部”，根据“峰宽”设置连续提取光谱。每个峰宽采集八条光谱，一条光谱的采集时间略少于峰宽除以 8，即大于或者等于 0.01s 且小于或等于 2.55s 范围-定义光谱存储的波长范围。从 190nm 到 950nm 步长-定于光谱存储的波长分离度。从 0.10nm 到 100.00nm 阈值-预期的最小峰高度。峰检测器忽略低于阈值的所有峰且不保存光谱。限值：0.001 到 1000.00mAU，步长为 0.001mAU 狭缝-设置检测器的光学带宽；狭缝越窄，仪器的光学带宽就越小，但其灵敏度也越低。光学带宽越小，光谱的分离度就越高 温度控制-G1315C/D 二极管阵列检测器的光学设备的温度控制。保持光学设备在一个恒定的温度可以提高不稳定高温环境下的基线稳定性 时间表-DAD 中可改变的参数包括自动平衡、更改信号、更改阈值、更改峰宽、更改光谱采集模式?控制 DAD 的控制界面与 VWD 类似?设置 MWD MWD 的设置于二极管阵列检测器相类似，但是没有“光谱”部分选项 G1365C/D 多波长紫外检测器可以存储 8 个信号?G1362A(示差检测器示差检测器示差检测器示差检测器 RID)：?设置 RID 右键点击 RID 模块视图空白处，选择“方法”进入 RID 的参数设置界面 光学部件温度-设置光学设备温度。限值：高出环境5 度到 55 度之间，建议为高出环境 5 度，以提高基线稳定性 www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 19 Agilent 1260 液相现场培训手册 极性-设置 RID 信号的极性。由于分析物和洗脱液的特性，即使在一个运行内示差折光检测器也可以显示负峰和正峰。从“正极性”或“负极性”数据中选择需要的“信号极性”自动循环-选择在运行后是自动循环排出物(打开)还是直接将其排除到 RID 的废液口(关闭)停止时间-设置 RID 停止分析时间。一般设置为“与泵一致”即可 峰宽-设置为色谱图中的预期的最窄峰。峰检测器将忽略逼峰宽设置窄很多或者宽很多的所有峰 时间表-RID 中可改变的参数包括极性和峰宽?控制 右键点击 RID 的模块视图空白处选择“控制”进入 RID 的控制界面 加热器-可以打开 RID 加热器，控制光学设备温度。限值：高出环境 5度到 55 度之间，建议为高出环境 5 度，以提高基线稳定性 再循环阀-“打开”可以打开排出物的循环；“关闭”，打开 RID 的废液出口 清洗参比池-“打开”，在溶剂发生变化或者参比池被污染时交换参比池的内容物 打开电源时-打开电源是即“打开加热器”?G1321A(荧光检测器荧光检测器荧光检测器荧光检测器 FLD)：?设置 FLD 右键点击 FLD 模块视图的空白处，选择“方法”进入 FLD 的参数设置界面 激发-激发波长。限值：200 到 1200nm，步长 1nm。“零级”：氙气灯 www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 20 Agilent 1260 液相现场培训手册 发出的光全部 光谱照射流通池。每种化合物可以吸收其具有特性波长的光，然后最大限度的发射荧光。这将增加该设置中固有的杂散光级别，并降低灵敏度(信噪比)发射-发射波长。限值：200 到 1200nm，步长 1nm。“零级”：将单色器至于零级位置，是样品发射的所有光都被反射到检测器 点击“全部”，设置荧光多波长和光谱选项 停止时间-设置 FLD 停止分析时间。一般设置为“与泵一致”即可 时间表-“PMT”：是指光电倍增管增益。在高浓度下使用较低设置。“PMT 增益”高可以提高信号值，但 PMT 寿命短，选择“测试”按钮以获取给予噪音的倍增器增益建议值；“基线”：设置信号基线初始位置 使用其他波长和使用其他发射-只等三个附加激发波长或者发射波长 采集光谱-如果选择多个激发波长或发射波长，还可以选择采集光谱。“无”：未提取光谱；“顶点”：在峰顶点采集光谱；“峰中的全部”：采集峰中的所有光谱；“全部无信号”：所有闪烁均用于光谱采集。所有已采集波长的平均值显示在通道 A 中 PMT-是指光电倍增管增益。在高浓度下使用较低设置。“PMT 增益”高可以提高信噪比，选择“测试”按钮以获取给予噪音的倍增器增益建议值?点击“特殊设定”，设置 FLD 特殊设定 打开“磷光检测”模式时，将激活“延迟”和“门”两个参数 延迟-设置 FLD 开始检测之前的等待时间，在此期间内灯会闪烁。限值：0 到 5000.0us，步长为 0.01us 闸门-可以设置灯闪烁后的检测时间。限值：20.0 到 5000.0us 步长为 www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 21 Agilent 1260 液相现场培训手册 0.01us 荧光扫描范围-荧光扫描可以收集单个任务重的发射光谱信息和激发光谱信息。适合于检测单个化合物特性或检查洗脱液的浓度。激发：波长限值：200 到 700nm，步长为 1 到 20nm，发射：波长限值：280 到 900nm，步长为1到20nm。要开始荧光扫描，点FLD图标并选择“使用荧光扫描”，也可以在“仪器-更多 FLD”子菜单重执行 基线行为-选择当波长或PMT增益发生改变后基线如何变化，“添加”：可以将极限重置为先前的基线位置；“自由”将不进行调整；“零”：将基线重置为运行开始时的基线位置 拟合光谱范围-调整光谱范围，使激发波长和发射波长之间始终保持至少 25nm 的差值。这样可以确保不会由于激发波长和发射波长距离太近而检测到一级散射光 灯-“仅在运行时打开”：指定灯在运行时间内打开，并在运行结束后关闭；“节电模式”：以低频率、低电流模式运行，这样可以在损害灵敏度的情况下延长灯的寿命；如果配有多个检测器，不想将 FLD 用于下次分析，选择“灯关闭后启用分析”；“灯能量参比”：可以使用参比二极管对灯闪烁之间的强度变化进行补偿，以提高信噪比 时间表-FLD 的时间表中，可改变的参数包括更改基线模式、更改发射信号、更改激发信号、更改 PMT 增益?控制 FLD 检测器的控制界面设定与 VWD 类似?G4218A(蒸发光散射检测器蒸发光散射检测器蒸发光散射检测器蒸发光散射检测器 ELSD)：右键点击 ELSD 模块视图的空白处，选择“方法”进入 ELSD 参数设定界面 www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 22 Agilent 1260 液相现场培训手册?参数设置 温度-ELSD 漂移管的温度，可设置的范围为 20-100，但最低要比室温高 5 增益-可以输入从1 到12，数值每增加1 就会使灵敏度增加2倍，Gain 值推荐使用 6 或 7 偏移量-可以输入-999 到 1000mV，使得基线不同于 0mV。采样时间-可让您选择用于分析的色谱峰的响应时间(以毫秒/赫兹为单位)噪声过滤器-其数值是优化信噪比和峰型的，off 为未过滤，数值为0.5 至 10。?启动分析 两个启动分析选项分别是气体压力和漂移管温度满足方法开始的范围关灯 运行后关灯和运行后关气，可以是方法运行结束后关闭LED灯和氮气，延长灯的寿命和节省氮气 注意：我们建议方法运行后保持温度和氮气30分钟，使检测器被吹干后再关机，这样有利于仪器的维护和保养。?停止时间 可以单独设置 ELSD 的运行时间或是与泵一致?后运行时间 使下一个分析延迟开始，例如使梯度洗脱后柱子有足够的时间来平衡?自动归零 杂项-每次分析前自动归零?增益更改后自动归零 可用-当增益改变时，不做自动归零 自动归零-每次 gain 改变时都要做自动归零 添加-当增益改变时，基线保持不变?时间表 在方法中创建一个时间表，在不同时间中执行不同的温度、增益、偏移量和噪声滤波器 3.3.3.3.数据分析数据分析数据分析数据分析方法编辑方法编辑方法编辑方法编辑：从“视图”菜单中，点击“数据分析”进入数据分析画面。从“文件”菜单中选择“调用信号”选项，选中您的数据文件名，点击确定，数据被调出?谱图优化谱图优化谱图优化谱图优化：?从“图形”菜单中选择“信号选项”，如下图所示：www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 23 Agilent 1260 液相现场培训手册?从“范围”中选择“满量程”或“自动量程”及合适的显示时间或选择“自定义量程”手动输入 X、Y 坐标范围进行调整，点击“确定”。反复进行，直到图的显示比例合适为止。选中化合物的名称前的空白框?选择“图形-新建标注”或者点击即可在工作站窗口右边打开图形编辑菜单，可以在色图谱中任意位置添加文字、图形等内容?选择“图形-信号选项”中选择“化合物名称”即可将命名的化合物名称添加到当前的色谱图中?积分参数优化积分参数优化积分参数优化积分参数优化:积分事件参数详细介绍，请参看“了解您的工作站”的用户手册 www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 24 Agilent 1260 液相现场培训手册?自动积分方法，从“积分”菜单中选择“积分事件”选项，选择合适的“斜率灵敏度”，“峰宽”，“最小峰面积”，“最小峰高”。从“积分”菜单中选择“积分”选项，则数据被积分。如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。点击左边图标，将积分参数存入方法，点击为不保存退出。点击进行积分，点击则由工作站自动查找适合当前谱图的积分参数积分。最后，选择“方法-保存方法/方法另存为”或者按下保存数据分析方法?手动积分方法，选择“积分-积分事件”或点击-，选择“手动积分事件”，如需更改，更改自动积分方法后，按保存并关闭“积分事件”。按删除指定峰，选择(手动积分：绘制峰基线并积分；手动积分：绘制负峰的基线并积分；手动积分：切线撇去一个峰并积分；手动积分：手动分裂已积分的峰)对峰进行手动积分。手动积分完成后可以点击撤销上一步操作或者点击撤销所有操作，修改完成后，按保存 www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 25 Agilent 1260 液相现场培训手册(手动积分：将当前显示的图谱事件保存到相应数据文件中)。选择“积分-更新方法中的手动积分事件”，保存手动积分方法；选择“积分-应用方法中的手动积分事件”，将手动积分方法应用到当前谱图中；选择“积分-删除方法中的手动积分事件”，将从当前方法中删除手动积分事件。最后，选择“方法-保存方法/方法另存为”或者按下保存数据分析方法?校正校正校正校正：为“标准样品”建立校正曲线(工作曲线/标准曲线)注意：在色谱图正确积分后才可进行校正设置校正设置：从“文件”菜单中选择“调用信号”选项，选中您的标样数据文件名，点击确定，数据被调出。选择“校正-校正设置”或者点击-设置校正参数 参考峰/其他峰-分钟栏留空，修改“%”以改变确认保留时间范围内的峰都被认为是参考/其他峰 含量单位-填写样品含量单位 选择缺省校正曲线方法，“确定”退出。?建立校正表：选择“校正-新建校正表”或者点击。出现“新建校正表”菜单，“确定”即可。出现“校正表”表格，在图谱中选择需要校正的色谱峰，后在表格中“化合物”中填写化合物名称，“含量”中填写色谱峰对应物质含量。右侧“校正曲线”即可实时更新校正曲线图，并标注 RSD 和相关系数。“确定”保存退出。最后，选择“方法-保存方法/方法另存为”或者按下保存数据分析方法 www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 26 Agilent 1260 液相现场培训手册?添加校正级别：调用新的标样数据文件后，选择“校正-添加级别”或者点击，如上述方法添加新的校正级别?添加校正峰：调用新的标样数据文件选择需要添加的峰后，选择“校正-添加峰”或者点击，在“添加峰”的菜单中填写需要添加到校正表中那个级别，含量即可将峰添加到校正表中，保存方法即可 通过“添加峰”可以将不同色谱图中需要校正的峰添加到同一个校正表中，保存在同一个方法文件里?打印带校正表的报告：选择“报告-设定报告”，在“定量设置”中的计算模式一栏选定“外标法”，“报告设置”为“完整报告”后，打印报告即可在“视图-信号选项”中选择“化合物名称”即可将命名的化合物名称添加到打印的色谱图中 www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 27 Agilent 1260 液相现场培训手册?打印报告打印报告打印报告打印报告:?选择“报告-设定报告”选项，进入如下画面。点击“定量结果”框中“定量”右侧的黑三角，选中“外标法”，其它选项不变。选择“类型”，点击“确定”?从“报告”菜单中选择“打印”或者点击，则报告结果将打印到屏幕上。如想输出到打印机上，则在上图中左下角“目标”处，将打印机选上。若要生成其他格式的报告，则选定“文件”，然后选择相应的格式即可。?在方法菜单中，选择“运行时选项表”，确认“数据分析选项”也被选 www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 28 Agilent 1260 液相现场培训手册 中，点击“确定”。点击“保存”按钮，存储修改的方法。此方法包含校准表，建立完毕?光谱光谱光谱光谱：?G1315C/D；G4212A/B(二极管阵列检测器DAD)、G1321A（荧光检测器FLD）查看光谱：从“文件”菜单中选择“调用信号”选项，选中您的数据文件名，点击确定，数据被调出。选择“光谱选择光谱”：通过游标定位到信号中的任何位置，显示一个光谱；“选择峰顶点光谱”()：选择峰顶点强度最高的光谱；选择平均光谱”()：得到峰中许多光谱的平均光谱；“选择峰光谱”：选择并显示峰光谱的峰组中所有光谱或者点击。选择“光谱-选择参比光谱 1/2”或点击：可以补偿流动相和基质化合物光谱吸收所带来的影响。可以选择两个参比光谱，在每个选定光谱的这些时间段内内插参考光谱 查看等吸收图：选择“光谱-等吸收线图”可以查看当前色谱图的 2D吸收等高谱图 查看 3D 图：选择“光谱-3D 图”可以查看当前色谱图的 3D 吸收全扫描图 峰纯度检查：选择“光谱-选择峰纯度”或点击后，在选择待考察峰，显示峰纯度图形报告 如果峰的纯度值大于设定的纯度阈值，则色谱图中会用绿色框标记此峰，否则为红色框 查看峰的峰纯度信息：在色谱图中选中要查看峰纯度的峰，点击按钮，弹出峰的峰纯度信息。在“峰光谱”中可以查看“差异”、“比较”、“参比”等光谱图 查看选定峰的光谱图：点击按钮，可以查看选定峰的等吸收线 www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 29 Agilent 1260 液相现场培训手册 图或者 3D 图 如何设定“光谱选项”或，请参考“了解您的工作站”用户手册 如何使用谱库搜索：建立谱库 选择“光谱-谱库-新建谱库”，保存谱库在任意文件夹(默认为：cchem32speclibs)。填写“谱库表头”信息，后选择“光谱-保存谱库/谱库另存为”或者 添加条目 选择需要添加的色谱峰，出现此峰光谱图，选择“光谱-添加条目”或者，编辑相应物质名称等信息内容。选择“编辑波表”，打开“波表编辑器”，选择“自动”。如需要添加或者替换、删除请选择相应按钮编辑，“确定”保存退出。点击“添加”将此条目添加到库中，“确定”保存退出 管理条目 选择“光谱-谱库-管理条目”或者。选择需要编辑的物质信息条目进行编辑 打开谱库 选择“光谱-谱库-打开谱库”或者打开需要的谱库 编辑检索模板 选择“光谱-谱库-编辑检索模板”或者。在“左窗口”与“右窗口”设置认定峰保留时间范围，“阈值”设置一下的峰将被忽略，“确定”保存退出 库检索 打开需要检索的色谱图数据，打开谱库。选择色谱图中需要检索的峰，选择“光谱-谱库-检索光谱”或者，将出现“光谱偏差”www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 30 Agilent 1260 液相现场培训手册 图和“谱库检索结果”报告。匹配度范围从 0 到 1000?G1321A(荧光检测器)在“方法和运行控制”界面，选择“仪器-更多 FLD”中“单荧光等高图”、“3D 荧光图”查看 FLD 3D 数据文件 4.4.4.4.建立建立建立建立全新全新全新全新完整方法完整方法完整方法完整方法向导向导向导向导：?新建完整方法新建完整方法新建完整方法新建完整方法：选择“方法-新建方法”后，点击“方法-编辑完整方法”编辑新方法 选择“方法信息”、“仪器/采集”、“数据分析”,“数据分析”也可以在“数据采集后”后再加入方法中 写入方法注释，而后按照数据采集方法编辑与数据分析方法编辑中所述内容，根据具体的仪器配置完成所有模块参数的设置。?保存方法保存方法保存方法保存方法：选择“方法-保存方法/方法另存为”?保存保存保存保存即时即时即时即时改变的方法改变的方法改变的方法改变的方法：通过在线改变数据采集或者在线/离线改变数据分析参数而变更方法，可以通过选择“方法-保存方法/方法另存为”或者保存新的参数到现在的方法中或者另存为新方法?调用方法调用方法调用方法调用方法：通过选择“方法-调用方法”或者调用已有的方法。方法一经调用便立即生效 5.5.5.5.进样进样进样进样：?单针进样单针进样单针进样单针进样：选择“运行控制-样品信息”。查看单针，点击 www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 31 Agilent 1260 液相现场培训手册 路径-选择数据文件存储路径 选择手动或者前缀/计数器-命名数据文件名 样品位置-设置样品位置，直接填写数字即可，不需要写“样品瓶”运行方法-保存样品信息并运行方法 确定-保存样品信息，后“运行控制-运行方法”?序列进样序列进样序列进样序列进样：利用自动进样器自动批量进样。查看序列，点击?选择“序列-序列参数”如单针进样方法设置数据路径 www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 32 Agilent 1260 液相现场培训手册 在调用新方法后等待-序列进样时更改某个样品方法后平衡色谱柱时间 后序列命令/宏-在运行序列后运行命令：LAMPALL OFF关闭检测器灯；PUMPALL OFF关闭泵;STANDBY系统待机;SHUTDOWN.MAC关闭系统?选择“序列-序列表”样品瓶-填写样品瓶位置，G1313A(标准型自动进样器),G1329A/B(自动控温自动进样器),G1367B/C/D(高性能自动进样器)样品名称-填写样品名称 方法名称-点击，出现下拉框，选择方法 进样次数/瓶-填写每个样品瓶进样次数 样品类型-选择样品类型：样品，标准样品、控制样品(一般选样品)校正级别-在选择标准样品后，填写此瓶标准样品的校正级别 进样量-如空缺则为自动进样器设置进样量 确定-保存样品信息，后“运行控制-运行序列”?保存序列模板：选择“序列-保存序列模板/序列模板另存”或者?调用序列模板：选择“序列-调用序列模板“或者 五、关机关机关机关机 1.1.1.1.关闭检测器的灯关闭检测器的灯关闭检测器的灯关闭检测器的灯：G1314B/C/E/F(可变波长紫外检测器)，G1315C/D,G4212A/B(二极管阵列检测器)，G1365C/D(多波长紫外检测器)，G1362A(示差检测器)，G1321A(荧光检测器)，G4218A(蒸发光散射检测器)，关闭检测器的灯后冲洗系统，可以延长检测器灯的寿命。G4218A(蒸发光散射检测器)，分析结束后，不要马上关闭氮气和漂移管温度；我们建议在停止流动相后再保持氮气和漂移管温度约 30 分钟，使得检测器被吹干后再关闭氮气并立刻关闭漂移管加热 www.lsca- 800-820-3278 Agilent OpenLAB C.01.02 33 Agilent 1260 液相现场培训手册 2.2.2.2冲洗系统冲洗系统冲洗系统冲洗系统：没有盐缓冲溶液的流动相，(反相系统)用 85%90%有机相+15%10%水相冲洗系统和反相色谱柱或者适宜的流动相冲洗系统和反相色谱柱 有盐缓冲溶液的流动相，(反相系统)用 85%90%水相水相水相水相+15%10%有机相有机相有机相有机相冲洗系统和反相色谱柱(反相系统)，除去反相色谱柱与系统中的盐溶液。然后用85%90%有机相有机相有机相有机相+15%10%水相水相水相水相冲洗系统和反相色谱柱。3.3.3.3.封存色谱柱封存色谱柱封存色谱柱封存色谱柱：(反相系统)用 90%95%有机相+10%5%水相封存反相色谱柱，两端封死。（如长时间存放可将柱子完全侵泡有