卡式配血讲座.pptx

Diana System戴安娜戴安娜凝胶卡式血型配血系统凝胶卡式血型配血系统李晓荣李晓荣血库血库内 容临床输血历史的简单回顾红细胞血型血清学检测技术简介如何保证临床输血配型相符Diana Gel凝胶卡式检测法的工作原理、特点以及方法学评价Diana Gel凝胶卡式检测法的临床应用回顾总结临床输血历史的简单回顾1667年法国御医Jean用羊血治疗精神病患者临床输血历史的简单回顾1818年英国产科医生James 首次用人血输治患者 临床输血历史的简单回顾1900、1940年奥地利科学家Landsteiner等人先后发现了ABO和RH血型系统，使输血治疗有了牢固的科学基础，从而极大地提高了临床输血的安全性1937年世界上第一个血库在芝加哥Cock County医院建立，标志着输血开始成为临床医学的重要组成部分和常规治疗手段现在输血已经发展成一门涉及多学科的独立的边缘学科输血学，今天我要讲的免疫血液学检测技术只是其中一部分 红细胞血型血清学检测技术简介盐水凝集法低离子强度盐水法酶技术凝聚胺技术抗人球蛋白检测法凝胶卡式检测法一、盐水凝集法红细胞和抗血清在盐水溶液中直接反应特点是操作简便，设备简单，缺点是影响因素多，灵敏度低二、低离子强度盐水法通过降低介质溶液的离子强度，减少红细胞外围离子云的强度，促进IgG分子在两个红细胞间桥联，而促进凝集特点是缩短抗原抗体反应时间，提高反应灵敏度三、酶技术利用木瓜酶或菠萝酶破坏红细胞表面唾液酸，使红细胞失去电荷，缩小细胞间距离同时改变红细胞膜表面结构，使某些隐蔽的抗原暴露，从而增强凝集反应主要用于一些不完全抗体的检测四、凝聚胺技术利用多聚季胺盐在介质溶液中产生大量正电荷中和红细胞表面的负电荷，减少红细胞间排斥，促进凝集五、抗人球蛋白检测法Coombs试验在盐水凝集法或低离子强度盐水法的基础上，在盐水凝集法或低离子强度盐水法的基础上，加入抗人球蛋白抗体，通过抗人球蛋白抗体的加入抗人球蛋白抗体，通过抗人球蛋白抗体的特异性桥连作用，促进红细胞的凝集特异性桥连作用，促进红细胞的凝集六、凝胶卡式检测法是微柱凝胶技术与上是微柱凝胶技术与上述所有技术相结合的述所有技术相结合的产物产物1986年由法国人年由法国人Dr.Yves Lappierre发明发明1994年获得美国年获得美国FDA认证，目前在许多发认证，目前在许多发达国家已经作为常规达国家已经作为常规技术应用于临床技术应用于临床如何保证输血配型相符如何保证输血配型相符?掌握准确的病人信息：掌握准确的病人信息：了解病人的输血史和实了解病人的输血史和实验室检查结果验室检查结果选用最可靠的实验方法：选用最可靠的实验方法：尽可能采用灵敏度和尽可能采用灵敏度和特异性最高的实验技术特异性最高的实验技术避免人为错误：避免人为错误：实现自动化，减少人为错误的实现自动化，减少人为错误的发生发生引入全面质量控制的观念：引入全面质量控制的观念：实验室所有操作程实验室所有操作程序要标准化，要有质量控制标准（如引进序要标准化，要有质量控制标准（如引进GMP和和ISO9000质量控制体系）质量控制体系）戴安娜凝胶卡式检测法的工作原理凝胶微柱：试管上端、柱体过滤介质：颗粒直径26-103 nm的葡聚糖100凝胶，凝胶间缝隙只允许游离红细胞通过缓 冲 液：LISS（加或不加抗血清）戴安娜凝胶卡式检测法的工作原理将红细胞和抗血清加在凝胶上部反应，离心后观察凝集的红细胞，被阻挡在小柱中凝胶的上部或中央，证明发生凝集反应，判断凝集反应阳性游离的红细胞，被挤过装有过滤介质的小柱，而到达小柱的底部，证明未发生凝集，判断凝集反应阴性 结果判读模式灵敏度和准确性高，重复性好灵敏度和准确性高，重复性好不需要清洗红细胞不需要清洗红细胞自动化程度高自动化程度高 可以实现全自动操作实验全过程标准化实验全过程标准化 标准化的孵育时间、离心时间以及结果判读 消除了主观因素对弱反应结果的判读，减少了人为错误的发生实验结果客观性强，而且稳定，可以长期保存实验结果客观性强，而且稳定，可以长期保存获得获得ISO9000CE认证认证戴安娜凝胶卡式检测法的特点凝胶抗人球试验凝胶凝集试验与抗人球技术结合 事先在凝胶微柱中的事先在凝胶微柱中的LISS缓冲液中加入缓冲液中加入AHG,实验中实验中,将将红细胞与抗血清加入凝胶上部红细胞与抗血清加入凝胶上部,离心后观察离心后观察如果抗体能结合在红细胞表面如果抗体能结合在红细胞表面,那么通过凝胶内那么通过凝胶内AHG桥联桥联,红细胞发生凝集红细胞发生凝集,判断凝集实验阳性判断凝集实验阳性如果抗体未能结合在红细胞表面如果抗体未能结合在红细胞表面,那么红细胞不能凝集那么红细胞不能凝集,判断凝集实验阴性判断凝集实验阴性凝胶酶试验凝胶技术与酶技术结合在凝胶上层加入酶试剂，利用木瓜酶或菠萝酶减在凝胶上层加入酶试剂，利用木瓜酶或菠萝酶减小红细胞间阻力，促进红细胞凝集小红细胞间阻力，促进红细胞凝集凝胶卡式检测法的方法评价卡式检测法与低离子强度盐水法、手工凝聚胺法的比较 1990年，卡式检测法的发明人Dr.Yves Lapierre等用低离子强度盐水法（试管法）、聚凝胺试验（试管法）和卡式检测法（凝胶）研究了400例已知抗体的样本。血清与细胞的比例是按照试管法标准配置。结果为：卡式检测法检出卡式检测法检出359例（检出率为例（检出率为90%）聚凝胺试验检出聚凝胺试验检出301例（检出率为例（检出率为75%）低离子强度盐水法检出低离子强度盐水法检出243例（检出率为例（检出率为61%）结论灵敏度高凝胶卡式检测法灵敏度比低离子盐水法、凝聚胺法都高；与Coombs法相近，但是在实验的标准化、重复性方面具有更大优势，更适合常规的红细胞血型血清学检测避免了试管法中必须清洗红细胞的烦琐步骤方法容易掌握，易于标准化塑料卡可以长期保存，也容易销毁凝胶卡式配血的临床应用简单地讲，凝胶卡式检测法就是利用实验中红细胞在凝胶微柱中的移动，来指示肉眼所不能见的红细胞与相应抗体发生的血清学反应，因此只需要更换不同的试剂卡，就能广泛地应用在：红细胞血型鉴定红细胞血型鉴定交叉配血交叉配血抗体筛查抗体筛查新生儿溶血病的检测新生儿溶血病的检测 戴安娜卡式配血的优点灵敏度好 特别是做抗体筛查和交叉配血时，能捕捉到十分微 弱 的抗原抗体反应特异性强 许多实验中都加入了抗人球，大大促进了红细胞的特异性凝集重复性好 采用标准定量操作，最大限度地减少了操作人员的随意性简化操作 实验中不用清洗红细胞，检测结果可以较长时间保存，有仪器判读的结果可以长期保存自动化操作 最大限度减少实验中人为错误的发生，同时保障了操作人员的安全可以实现输血科信息的管理，这是我国安全输血的发展方向演 讲 完 毕谢 谢