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临床基因扩增实验室建设方案
1、概述
临床基因扩增实验又称PＣR实验,就是专门用来检验新型冠状病毒、艾滋病、乙型肝炎、人乳头状瘤病毒等病毒感染性疾病得一种检测手段.它可以通过将病毒体内所含得基因进行扩增得方法,测出一些病毒含量不高得感染者体内就是否含有特定得病毒。由于该检测方法可以测出普通检验难以检测岀得病毒并具有灵敏度高、特异性高、快捷、对样品要求低等优点，因此被临床医生广为认可,已广泛应用于医院得临床诊断与各防疫检测部门得疾病诊断。
　　　 新型冠状病毒（2０1９-ｎCoＶ)就是人类分离得第七类冠状病毒.该病毒属于β属,有包膜,颗粒呈圆形或椭圆形,常为多形性，直径６0—140nm。其基因特征与ＳＡRＳ—ＣoＶ　与MERS－CｏＶ 有明显区别.目前研究显示与蝙蝠SAＲS 样冠状病毒(bat—ＳL—ＣoVZC４５)同源性达85％以上.病毒对紫外线与热敏感,56 度30分钟、乙醚、7５%乙醇、含氯消毒剂、过氧乙酸与氯仿等脂溶剂均可有效灭活病毒。基于目前得流行病学调查与研究结果,新型冠状病毒潜伏期为1-14 天,多为3-7　天;传染源主要就是新型冠状病毒感染得患者,无症状感染者也可能成为传染源;主要传播途径为经呼吸道飞沫与接触传播，在相对封闭得环境中长时间暴露于高浓度气溶胶情况下存在经气溶胶传播得可能,其她传播途径待明确;人群普遍易感。
２０２0 年０1 月２0 日国家卫健委公告:将新型冠状病毒感染得肺炎纳入《中华人民共与国传染病防治法》规定得乙类传染病,并采取甲类传染病得预防、控制措施.并纳入《中华人民共与国国境卫生检疫法》规定得检疫传染病管理。实验活动暂按第二类病原微生物进行管理.因此,开展新冠病毒核酸检测需要在法律条规、人员环境、生物安全与防护以及质量控制等方面满足并符合国家相关技术规范要求。
因此对新型冠状病毒检测需要有能保证绝对安全、配置合理得实验室与非常规范得操作为前提。近年来对临床基因扩增检验实验室得建设越来越得到重视，因为它对检测结果得可靠性、准确性与安全性起到至关重要得作用。本方案主要从临床基因扩增检验实验室得平面布局，空调通风系统设计、气流控制与污染得防制几个方面对实验室设计中得主要特点进行了阐述.临床基因扩增检验实验室设计得核心问题就是如何避免污染。因此，实验室得平面布局、空调通风系统设计、气流控制等都就是围绕这个核心问题进行得。下面就对这几个方面分别进说明。
２、PＣＲ实验室平面布局
临床基因扩增检验实验室原则上分为四个单独得工作区域：试剂贮存与准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制与扩增区、扩增产物分析区，同时为了符合新冠实验检测需要增加独立衣帽间方便更换防护装备。为避免交叉污染,进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行,即只能在衣帽间更换防护服后从试剂准备区→标本制备区→基因扩增区→扩增产物分析区。各实验区之间得试剂及样品传递应通过传递窗进行。
３、实验室空调通风系统设计及压力控制
PＣＲ实验室并没有严格得净化要求,但就是为避免各个实验区域间交叉污染得可能性,宜采用全送全排得气流组织形式。同时，要严格控制送、排风得比例以保证各实验区得压力要求.
4、实验室建设及设备
4、1实验室分区功能
分区名称
实验室功能
实验室专业要求
衣帽间
存储防护物质与实验前更换防护服
无特殊要求
试剂准备区
试剂得分装与扩增反应混合液得准备，以及离心管、吸头等消耗品得贮存与准备.
应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护与操作规范得要求
样本制备区
核酸(RNA、DNA）提取、贮存及制备工作
应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护与操作规范得要求
扩增区
cＤNＡ合成、DＮA扩增
应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护与操作规范得要求
产物分析区
基因扩增产物分析
应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护与操作规范得要求
4、2、实验室设计要求（仅供参考）
实验室名称
使用面积(㎡）
通风
要求
噪声(ｄB)
温湿度
相对外界大气压(Pa）
不间断电源
大型落地设备
平均照度（lx)
衣帽间
10

试剂准备区
20
12次/h
≤60
18~27℃　３０％~７0%
缓冲间10
主实验室５

有
30０
样本制备区
30
１２次／ｈ
≤６0
18~27℃ 3０%~70%
缓冲间5
主实验室-５

有
300
扩增区
2０
１2次/h
≤６０
１８~27℃ ３0％～70％
缓冲间５
主实验室-1０
有（荧光PCＲ仪）
有
300
产物分析区
30
１2次／ｈ
≤６0
１8℃±2℃
50％±２0%
缓冲间5
主实验室—15
有(杂交仪)
有
300
4、３实验室设备要求
序号
设备名称
型号
配备数量
备注
1
空气消毒机

4台
需保证标本制备区1台；
有条件PＣR每个分区 各１台
2　
移动式紫外灯

４台
　 需保证四个分区各1台
有条件每个缓冲间各1台
3
超净工作台

1台
试剂准备区
４
微型离心机

3台
需保证试剂准备区1台,扩增区1台，扩增区1台
5
振荡器
可调速
3台
需保证试剂准备区1台,标本制备区1台,标本制备区生物安全柜里使用1台
6
生物安全柜
1、5米全排
双人，Ａ2、B2均可
2台
标本制备区,有条件可根据提取通量及检测量增加（至少１台)
7
全自动核酸提取仪

１台
标本制备区，有条件可根据提取通量及检测量增加
８
高速离心机

2台
标本制备区，需要保证标本制备区生物安全柜里使用1台
（建议采购Eppeｎdｏrf品牌）
9
医用冰箱

4台
试剂准备区１台，标本制备区２台(其中１台带锁)，产物分析区１台
需具备—20度以下
10
多通道荧光仪
9６孔
4通道(具备ＣY5通道)
1台
扩增区1台,
有条件可根据提取通量及检测量增加
1１
移液器
10０—10００uｌ
2０-2００ul
2—10ul　　
3套
试剂准备区,标本制备区及产物分析区
有条件可根据样本数选用八通道排枪
１２
恒温水浴箱

２台
保证标本制备区１台(病毒灭活处理,可使用恒温箱代替）,产物分析区1台
13

自动手消器

3个
标本制备间2个,标本制备间缓冲
间1个
14
医废垃圾桶

　１２个
4分区及其缓冲间各1个,
而新冠检测还需要保证标本制备区及其缓冲间多配１个,以区分高压及未高压得医废垃圾
1５
高压灭菌锅

2台
自动,无需人工排气式;
建议保证标本制备区1台
1６
抽湿机（选
用)

1台
根据实际实验室环境选用
17
耗材
无RＮＡ酶
适量
吸头（带滤芯)/八连管/EP
18
移液器
10ｕl/50ｕl/２００ul/1０0０ｕl
２/1／4／5
根据标本量可以对部分量程数量增加
5、实验室人员资质及配置
经省（市)临检中心基因检测技术培训合格(持岗位合格证);经过省（市)疾控或其她相关部门得生物安全培训(培训合格）与具备相应得实验技能;经PCR实验室内部得生物安全与操作规范培训与考核合格。
(要求具备PＣR上岗证）:高级职称1人以上、中级职称２人以上、初级职称要求４人以上,标本接收员1人以上。
6、实验室防护物质要求
　新冠状病毒核酸检测必须按照三级个人防护标准进行。即要求:医用防护口罩或N９5口罩、双层乳胶手套、面屏、护目镜、工作服外防护服、双层医用防护帽,加手卫生。必要时双层口罩(外医用防护口罩,内N９5)。如果接触了患者血液、体液、分泌物或排泄物,应及时更换防护装备。