蛋白酶抑制剂.docx

蛋白酶抑制剂
破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度。由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低，尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。在宝灵曼公司的目录上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制剂表。

常用抑制剂
PMSF PMSF即Phenylmethanesulfonyl fluoride，中文名为苯甲基磺酰氟。分子式为C7H7FO2S，分子量为174.19，纯度>99%。
常用生化试剂，用于抑制蛋白酶.
【配制方法】用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。
【注意】PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节 为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。

蛋白水解酶抑制剂啊!!!实验室常用的啊!!!

主要用于组织匀浆时用!!
1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶);
2)10mg/ml溶于异丙醇中;
3)在室温下可保存一年;
4)工作浓度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L);
5)在水液体溶液中不稳定，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF。
EDTA
1)抑制金属蛋白水解酶
2)0.5mol/L水溶液，pH8~9;
3)溶液在4℃稳定六个月以上;
4)工作浓度:0.5~1.5mmol/L. (0.2~0.5mg/ml);
5)加入NaOH调节溶液的pH值，否则EDTA不溶解。

胃蛋白酶抑制剂(pepstantin)
l)抑制酸性蛋白酶如胃蛋白酶，血管紧张肽原酶，组织蛋白酶D和凝乳酶;
2)1mg/ml溶于甲醇中;
3}储存液在4℃一周内稳定，-20℃稳定6个月;
4)1作浓度:0.7ug/ml(1umol/L)
5)在水中不溶解。

亮抑蛋白酶肽(leupeptin)
1)抑制丝氨酸和巯基蛋白酶，如木瓜蛋白酶，血浆酶和组织蛋白酶B;
2)lOmg/ml溶于水;
3)储存液4℃稳定一周，-20℃稳定6个月;
4)工作浓度0.5mg/ml。

胰蛋白酶抑制剂(aprotinin)
1)抑制丝氨酸蛋白酶，如血浆酶，血管舒缓素，胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶;
2)lOmg/ml溶于水，pH7~8
3}储存液4℃稳定一周，-20℃稳定6个月;
4)工作浓度:0.06~2.0ug/ml(0.01~0.3umol/L);
5)避免反复冻融:
6)在pH>12.8时失活。

蛋白酶抑制剂混合使用
35ug/ml PMSF………………………丝氨酸蛋白酶抑制剂
0.3mg/ml EDTA……………………金属蛋白酶抑制剂
0.7ug/ml胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin)…………酸性蛋白酶抑制剂
0.5ug/ml亮抑蛋白肽酶(Leupeptin)…………广谱蛋白酶抑制剂

亮抑酶肽(Leupeptin) Molecular Formula C20H38N6O4·1/2H2SO4

storage temp.-20°C
Product Description
Specificity: Inhibits serine and thiol proteases such as trypsin, plasmin, proteinase K, kallikrein, papain, thrombin, and cathepsin A and B. Not affected are α-, β-, γ-, and δ-chymotrypsins, pepsin, cathepsin D, elastase, renin, and thermolysin.
Suggested working concentration: 0.5 - 10 μg/ml (1 - 20 μM)
Solubility/Stability: Highly soluble in water (1 mg/ml). Stable for at least 1 week at +2 to +8°C and 6 months frozen in aliquots at -15 to -25°C.

Quality Function test: Performance-controlled with trypsin

Pepstatin A (抑肽素),

又称培普他丁, 胃酶抑素,抑胃肽。分子式C34H63N5O9,分子量685,91 g/mol,一种酸性蛋白酶抑制剂。由链霉菌Streptomyces testaceus产生的，能抑制胃蛋白酶、胃亚蛋白酶、组织蛋白酶D、各种天门冬氨酸蛋白酶，例如组织蛋白酶D、肾素、胃蛋白酶、细菌天门冬氨酸蛋白酶和HIV蛋白酶和血管紧张素释放酶.熔点228～229℃。旋光度[α]D27-90°(0.288％，甲醇)。对Rydon-Smith、高锰酸钾呈阳性反应，对坂口和埃利氏呈阴性反应。易溶于甲醇、乙醇、乙酸，不溶于乙酸乙酯、醚、苯、氯仿等有机溶剂。紫外光谱为末端吸收，有13个组分。

Aprotinin 蛋白酶抑制剂(抑肽酶)
Synonym Trypsin inhibitor (basic)
Molecular Formula C284H432N84O79S7
Molecular Weight 6511.44
Application
Protection of proteins and enzymes during isolation/purification.
Purification of urokinase, trypsin, and chymotrypsin on immobilized aprotinin.
Quantification of kallikrein activity in mixtures of esterases and proteases.
Guarantee the controlled degradation of substrates by avoiding nonspecific proteolysis in clinical chemical tests.
Inhibition of protease activity, which increases the lifetime of cells in cell and tissue culture studies.
Aprotinin as a model protein in protein-folding studies.
Molecular weight marker in SDS-polyacrylamide gel electrophoresis.

Product Description
Trypsin inhibitor, pancreas type (BPTI)
Activity: approx. 630 U/mg (25°C, Chromozym TRY as the substrate) = approx. 200 U/mg (trypsin inhibitor units, 25°C, BAEE as the substrate)

Specificity: Serine protease inhibitor not acting on thrombin or factor X. Inhibits plasmin, kallikrein, trypsin, and chymotrypsin with high activity.
Working concentration: 0.06 to 2 μg/ml (0.01 - 0.3 μM)
Solubility/Stability: Freely soluble in water (10 mg/ml) or aqueous buffer solution (e.g., Tris, 0.1 M, pH 8.0). A solution adjusted to pH 7–8 is stable for approximately 1 week at +2 to +8°C. Aliquots stored at 15 to -25°C are stable for approximately 6 months.
Note: Avoid repeated freezing and thawing and exposure to strongly alkaline solutions (inactive at pH >12.8).

Contents Lyophilizate

Quality Purity: Electrophoretically homogeneous

离心力Centrifugal force (F) 离心力作为真实的力根本就不存在，在非惯性系中为计算方便假想的一个力。请看下面的说明： 向心力使物体受到指向一个中心点的吸引、或推斥或任何倾向于该点的作用。 笛卡儿把离心力解释为物体保持其“限定量”的一种趋势。 它们的区别就是，向心力是惯性参考系下的，而离心力是非惯性系中的力。我们处理物理题时都是在惯性系下（此时牛顿定律才成立），所以一般不用离心力这个概念。 由于根本不是一个情况下的概念，我们无法对他们的方向和大小进行比较。
F=mω2r
ω：旋转角速度(弧度／秒) r:旋转体离旋转轴的距离(cm) m：颗粒质量
相对离心力 Relative centrifugal force (RCF)
RCF 就是实际离心力转化为重力加速度的倍数
g为重力加速度(9.80665m/s2)
同为转于旋转一周等于2π弧度，因此转子的角速度以每分钟旋转的次数(每分钟转数n或r/min)表示： 一般情况下，低速离心时常以r／min来表示。
3、分离因素计算公式：
RCF=F离心力／F重力= mω?2r/mg= ω?2r/g= （2*π*r/r*rpm） ?2*r/g 注：rpm应折换成 转/秒
例如：直径1000mm，转速1000转/分的离心机，分离因素为：
RCF(1000)=(2*3.1415*16.667)^2*0.5/9.8 =104.72^2*0.5/9.8 =560

DEPC(diethypyrocarbonate，焦碳酸二乙酯)处理过并经高温高压消毒的MiliQ纯水。
DEPC水可以用于RNA沉淀的溶解，含有RNA的各种反应体系如反转录、siRNA的退火等，以及其它各种要求无RNase、DNase和proteinase的反应体系。
内容总结

（1）蛋白酶抑制剂
破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解
（2）5)避免反复冻融:
6)在pH>12.8时失活
（3）2r/mg= ω