Agilent_1100_使用教程.pdf

A g i l e n t 1 1 0 0 L C现场培训教材 安捷伦科技有限公司 化学分析仪器部1 培训目的 基本了解1 1 0 0 L C 硬件操作 掌握化学工作站的开机关机参数设定,学会数据采集,数据分析的基本操作二 培训准备1 仪器设备 A g i l e n t 1 1 0 0 L C?G 1 3 1 0 A :(单元泵)G 1 3 1 2 A(二元泵)G 1 3 1 1 A(四元泵)?G 1 3 1 3 A 自动进样器?G 1 3 1 6 A 柱温箱?G 1 3 1 4 A V W D 检测器?G 1 3 6 2 A 示差检测器?G 1 3 1 5 A/B (D A D 检测器)?G 1 3 2 1 A (F L D 检测器)?色谱柱:Z o r b a x e c l i p s e X D B C 8,1 5 0 m m 4.6 m m i.d2 溶剂准备?色谱级纯或优级纯乙腈A C N 或甲醇?二次蒸馏水基本操作步骤:(一)开机 1 打开计算机,进入W i n d o w s N T 或W i n d o w s 2 0 0 0 画面,并运行B o o t p S e r v e r 程序 2 打开 1 1 0 0 L C 各模块电源 3 待各模块自检完成后双击I n s t r u m e n t 1 O n l i n e图标化学工作站自动与1 1 0 0 L C 通讯进入的工作站画面如下所示 4 从V i e w 菜单中选择M e t h o d a n d R u n c o n t r o l画面,单击”V i e w”菜单中的S h o w T o pT o o l b a rS h o w s t a t u s t o o l b a rS y s t e m d i a g r a m,”S a m p l i n gd i a g r a m”使其命令前有标志来调用所需的界面 5 把流动相放入溶剂瓶中 6 打开P u r g e阀 7 单击P u m p图标出现参数设定菜单单击S e t u p p u m p选项进入泵编辑画 面 8 设F l o w 5 m l/m i n 单击O K 9 单击P u m p图标出现参数设定菜单单击P u m pc o n t r o l 选项选中O n 单击O K 则系统开始P u r g e 直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止,切换通道继续P u r g e 直到所有要用通道无气泡为止 1 0 单击P u m p 图标出现参数设定菜单单击P u m p C o n t r o l 选项选中O f f 单击O k 关泵 关闭P u r g e v a l v e 1 1 单击P u m p图标出现参数设定菜单单击S e t u pp u m p 选项进入P u m p 编辑画面设F l o w 1.0 m l/m i n 1 2 单击泵下面的瓶图标如图所示以二元泵为例输入溶剂的实际体积和瓶体积也可输入停泵的体积单击O k 二数据采集方法编辑 1 开始编辑完整方法 从M e t h o d菜单中选择E d i t e n t i r e m e t h o d 项如上图所示选中除D a t aa n a l y s i s 外的三项单击O k进入下一画面 2 方法信息?在M e t h o d C o m m e n t s 中加入方法的信息如方法的用途等?单击O k 进入下一画面3 泵参数设定以二元泵为例 在F l o w 处输入流量,如1 m l/m i n 在S o l v e n t B 处输入7 0.0,(A=1 0 0-B),也可I n s e r t一行”T i m e t a b l e”,编辑梯度在P r e s s u r e L i m i t s M a x 处输入柱子的最大耐高压以保护柱子 单击O k 进入下一画面 4 自动进样器参数设定:选择合适的进样方式,如图所示进样体积 1.0 u l,洗瓶位置为6 号“S t a n d a r d I n j e c t i o n”-只能输入进样体积此方式无洗针功能I n j e c t i o n w i t h N e e d l e W a s h-可以输入进样体积和洗瓶位置此方式针从样品瓶抽完样品后会在洗瓶中洗针Us e i n j e c t o r p r o g r a m-可以点击E d i t 键进行进样程序编辑?点击O k 进入下一画面5 柱温箱参数设定:在”T e m p e r a t u r e”下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击”m o r e ”键,如图所示,选中”S a m e a s l e f t”-使柱温箱的温度左右一致 点击o k 进入下一画面6 V W D 检测器参数设定:在”W a v e l e n g t h”下方的空白处输入所需的检测波长,如2 5 4 n m,在”P e a kw i d t h (R e s p o n s e t i m e)”下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间,如 0.1 m i n(2 s)在T i m e t a b l e 中可以I n s e r t 一行输入随时间切换的波长如1 m i n波长=3 0 0 n m 点击o k 进入下一画面 7 D A D 检测器参数设定:色谱条件:流动相:7 5%A C N,2 5%水 进样量:5 u l;检测波长:2 5 4 n m,B W=3 0 n m,参比波长=3 5 0 n m,B W=1 0 0 n m;柱温:3 0;流量:1 m l/m i n;停止时间:出峰完毕 样品波长-一般选择最大吸收处的波长样品带宽B W一般选择最大吸收值一半处的整个宽度B WN o i s e?参比波长一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域 参比带宽B W至少要与样品信号的带宽相等许多情况下用1 0 0 n m 作为缺省值P e a kw i d t h R e s p o n s e t i m e其值尽可能接近要测的窄峰峰宽S l i t狭缝窄光谱分辨率高宽时噪音低同时可以输入采集光谱方式步长范围阈值选中所用的灯 点击O k 进入下一画面8 R I D 检测器参数设定:色谱条件:进样体积:2 0 u l 光学单元温度:O f f 极性:正 峰宽(响应时间):4 s 如图所示:“O p t i c a l U n i t T e m p e r a t u r e”-若环境温度控制在2,设定为O f f,若环境温度不稳定,则设定光学单元温度为高于环境温度5 度,以防样品在池中沉淀P e a k w i d t h-大多数分析设为4 S 只有在高速分析下设为更短A u t o m a t i cr e c y c l i n g a f t e r a n a l y s i s-在不进行分析时可以让流动相循环节省流动相检测器连续运行可随时投入使用 *点击R I D 图标选择R I D C o n t r o l H e a t e r设为O n 若要循环流动相必须将R e c y c l i n g V a l v e 设为O N 手动p u r g e参比池将其设为O n 并输入P u r g e 时间 点击O k,进入下一F L D 画面9 F L D 检测器参数设定:色谱条件 样品P/N 0 1 0 1 8-6 8 7 0 4 用甲醇稀释为1:1 0 进样体积5 u l 柱温箱:3 0 E X=2 4 6 n m,E M=3 1 7 n m ,P M T=1 0 响应时间=4 s.停止时间 出峰完毕 E x c i t a t i o n A:激发波长:2 0 0-7 0 0 n m,步长为1 n m,或Z e r o O r d e r E m i s s i o n:发射波长:2 8 0-9 0 0 n m,步长为1 n m,或Z e r o O r d e r P M T:大多数应用适当的设定值为1 0,若高浓度样品峰被切平头,则减少 P M T 值 P e a k w i d t h大多数应用设为4 s 只有快速分析采用小的设定值 M u l t i E x 多波长及光谱激发 M u l t i E m多波长及光谱发射 同时可以输入范围R a n g e 步长s t e p 采集光谱 1 0 在 R u n t i m e c h e c k l i s t 中选中D a t a a c q u i s i t i o n单击O k 1 1 单击M e t h o d 菜单选中S a v e m e t h o da s输入一方法名如t e s t单击O k 1 2 从菜单“V i e w”中选中”O n l i n e s i g n a l”,选中W i n d o w s 1,然后单击C h a n g e钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击O k.(如同时检测二个信号,则重复1 2,选中Wi n d o w s 2)1 3 从R u n c o n t r o l 菜单中选择S a m p l ei n f o 选项如上图所示输入操作者名称在D a t a f i l e 中选择M a n u a l 或P r e f i x区别:M a n u a l-每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉 P r e f i x 在P r e f i x 框中输入前缀在C o u n t e r框中输入计数器的起始位仪器会自动命名如v w d 0 0 0 1 v w d 0 0 0 2 1 4 从I n s t r u m e n t 菜单选择S y s t e m o n 1 5 等仪器R e a d y 基线平稳从M e t h o d 菜单中选择R u n m e t h o d进样三数据分析方法编辑:1 从V i e w 菜单中单击D a t a a n a l y s i s 进入数据分析画面2 从F i l e 菜单选择L o a d s i g n a l选中您的数据文件名如下图所示单击O k3 做谱图优化,从G r a p h i c s”菜单中选择S i g n a lo p t i o n s选项从R a n g e s中选择A u t o s c a l e 及合适的显示时间单击o k,或选择”U s eR a n g e s”调整反复进行直到图的比例合适为止4 积分:(1)从I n t e g r a t i o n 中选择“A u t oi n t e g r a t e”,如积分结果不理想,再从菜单中选择I n t e g r a t i o n E v e n t s 选项选择合适的S l o p es e n s i t i v i t y P e a k w i d t h A r e a r e j e c t H e i g h t r e j e c t(2)从I n t e g r a t i o n 菜单中选择I n t e g r a t e 选项 则数据被积分(3)如积分结果不理想则修改相应的积分参数直到满意为止(4)单击左边图标将积分参数存入方法 5 打印报告:(1)从R e p o r t 菜单中选择S p e c i f y r e p o r t 选项进入如上画面(2)单击Q u a n t i t a t i v eR e s u l t s 框中C a l c u l a t e 右侧的黑三角选中P e r c e n t 面积百分比其它选项不变(3)单击O k.(4)从R e p o r t 菜单中选择P r i n tr e p o r t则报告结果将打印到屏幕上如想输出到打印机上则单击R e p o r t底部的P r i n t 钮(四)关机:关机前用1 0 0%的水冲洗系统2 0 分钟然后用有机溶剂冲洗系统1 0 分钟如A C N然后关泵适于反相色谱柱 正相色谱柱用适当的溶剂冲洗 退出化学工作站及其它窗口关闭计算机用s h u t d o w n 关 关掉A g i l e n t 1 1 0 0 电源开关(五)A g i l e n t 1 1 0 0 L C 维护保养1 色谱柱长时间不用存放时柱内应充满溶剂两端封死如A C N 适于反相色谱柱正相色谱柱用相应的有机相2 对于手动进样器当使用缓冲溶液时要用水冲洗进样口同时搬动进样阀数次每次数毫升 *3 流动相使用前必须过滤不要使用多日存放的蒸馏水易长菌 *4 带s e a l-w a s h 的 1 1 0 0 要配制9 0%水+1 0%异丙醇以每分2 3 滴的速度虹吸排出溶剂不能干涸 5 其它主意事项见说明书或由现场工程师介绍维护知识1 为什么溶剂和样品要过滤?溶剂和样品过滤非常重要它会对色谱柱仪器起到保护作用消除由于污染对分析结果的影响色谱柱由于填料颗粒很细色谱柱内腔很小溶剂和样品中的细小颗粒会使色谱柱和毛细管容易堵塞仪器溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损同时也会增加泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损样品过滤头的类型3 0 m m 内径适用于大进样量的过滤由0.2 m 和0.4 5 m 两种规格,材料有纤维素,醋酸纤维,聚四氟乙烯处理样品体积少于5 0 l1 3 m m 内径适用于范围广的过滤由0.2 m 和0.4 5 m 两种规格,材料为纤维素3 m m 内径适用于小进样量的过滤由0.2 m 和0.4 5 m 两种规格处理样品体积为7 l滤膜类型聚四氟乙烯滤膜适用于所有溶剂酸和盐并无任何可溶物醋酸纤维滤膜 不适用于有机溶剂特别适用于水基溶液推荐 用于蛋白质和其相关样品尼龙6 6 滤膜适用于绝大多数有机溶剂和水溶液可用于强酸 7 0%乙醇二氯甲烷不适用于二甲基甲酰胺再生纤维素滤膜具有蛋白吸收低同样适用水溶性样品和有机溶剂2 为什么H P L C 用缓冲盐时要加在线S e a l-w a s h 选项H P L C 用缓冲盐时,由于泵头内的缓冲盐溶液存在高压析盐现象,析出的细小盐粒非常坚硬,它附着在蓝宝石活塞杆上,随着蓝宝石活塞杆的往复运动,容易产生划痕,并磨损密封垫,造成漏液等故障现象在线S e a l-w a s h 选项能有效的带走可能存在的缓冲盐结晶缓冲盐的浓度在0.1 m o l 或大于0.1 m o l 时,必须使用该在线冲洗选项.清洗液配制:9 0%水+1 0%异丙醇.该混合液可抑制菌类生长和减小水的表面张力以2-3 滴/m i n 的速度虹吸流下不能干涸3 为什么A g i l e n t 1 1 0 0 L C 的流动相管路非常细?在使用H P L C 时,应特别注意”柱外效应”对分析结果的影响由于样品分子在液体流动相中的扩散系数比在气体中小4 5 个数量级液体流动相的流速也比气相慢1-2 个数量级因此样品进入色谱柱后在柱子以外的任何死体积进样器柱接头连接管检测器中样品分子的扩散和滞留都会引起色谱峰的展宽而使柱效降低为使柱外效应减之最小获得理想的分析结果A g i l e n t 1 1 0 0 L C使用加工工艺难度高的毛细管线作为流动相管路毛细管线分类0.1 7 m m 内径-绿色;0.1 2 m m 内径-红色 P E E K 管线内径-0.1 3 m m;0.1 8 m m;0.2 5 m m;0.5 m m 毛细管线优点:柔韧性好.*A g i l e n t 公司同时备有1/1 6 i n的粗外径毛细管线,适用于不同习惯的用户,优点是刚性好,但柔韧性差一些4 流动相使用前为什么要脱气 流动相使用前必须进行脱气处理以除去其中溶解的气体如O 2以防止在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时因压力降低而产生气泡气泡会增加基线的噪音造成灵敏度下降甚至无法分析溶解的氧气还会导致样品中某些组份被氧化柱中固定相发生降解而改变柱的分离性能若用F L D 可能会造成荧光猝灭常用的脱气方法比较氦气脱气法利用液体中氦气的溶解度比空气低连续吹氦脱气效果较好但成本高加热回流法效果较好但操作复杂且有毒性挥发污染抽真空脱气法易抽走有机相超声脱气法流动相放在超声波容器中用超声波振荡1 0-1 5 m i n 此法效果最差在线真空脱气法A g i l e n t 1 1 0 0 L C真空脱机利用膜渗透技术在线脱气智能控制无需额外操作成本低脱气效果明显优于以上几种方法并适用于多元溶剂体系5 如何防止溶剂瓶内溶剂过滤器的堵塞以及堵塞后的处理溶剂的质量或污染以及藻类的生长会堵塞溶剂过滤器从而影响泵的运行尤其水溶液或磷酸盐缓冲液P H=4 7以下几种方法可以有效防止溶剂瓶内溶剂过滤器的堵塞A 请严格执行溶剂过滤B 请勿使用多日存放的蒸馏水及磷酸盐缓冲液C 如果应用许可可在溶剂中加入0.0 0 0 1-0.0 0 1 M 的叠氮化钠.D:在溶剂瓶内溶剂的上方小流量连续吹氩气,以隔绝空气E 避免使溶剂瓶暴露在直射阳光下尽量使用琥珀色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲液堵塞后的处理法方法将过滤头从组件中取下在浓硝酸3 5%中浸泡1 h 然后用二次蒸馏水冲洗干净并超声处理6 A g i l e n t 1 1 0 0 L C 泵如何维护A g i l e n t1 1 0 0 L C 泵给色谱柱提供稳定无脉动流量准确的流动相及时合理的维护非常重要A 流动相使用前请必须脱气过滤B 使用缓冲盐时要加在线S e a l-w a s h 选项C 关机前用1 0 0%的水冲洗系统2 0 分钟然后用有机溶剂冲洗系统1 0 分钟如甲醇然后关泵适于反相色谱柱 正相色谱柱用适当的溶剂冲洗 D 及时更换P u r g e V a l v e 内的过滤芯当打开P u r g eV a l v e 时压力高于1 0 b a r 表明过滤芯已堵E 使用合适的密封圈7 如何选择合适的泵头活塞密封圈泵头活塞的标准密封圈能适合于大多数应用但使用正相溶剂如正己烷不适合使用标准活塞密封圈特别是长时间使用时需更换另一种不同的密封圈我们建议使用聚四氟乙烯密封圈p/n 0 9 0 5-1 4 2 0 2/p k*注意聚四氟乙烯密封圈的压力范围为0 2 0 0 b a r 建议在泵的压力限制中将最大压力设为2 0 0 b a r8 使用梯度比例发时要注意那些事项当盐溶液与有机溶剂溶液混合时盐溶液能与有机溶剂溶液完全混溶而不会出现沉淀但是在比例阀的混合点重力作用使盐颗粒沉淀下来通常阀A 接水相/盐溶液D 接有机溶剂此法连接可有效使盐回落到盐溶液中并被溶解若颠倒过来盐可能落在有机溶剂中出现问题强烈建议当使用缓冲盐溶液和有机溶剂时推荐将缓冲盐通道接在A 通道上有机溶剂通道直接接在A 通道的上方D 通道上定期用水冲洗所有的通道以除去阀口上可能出现的盐沉淀9 在线真空脱气机使用要注意那些事项 一般来说A g i l e n t 1 1 0 0 L C的真空脱气机无需过多维护只需注意几个注意事项就可以了A 第一次使用要用随仪器附带的注射器抽满脱气机腔体更换不同类型的溶剂时要先抽空再抽满B 不用的通道要充满溶剂或密闭起来1 0 更换色谱柱时要注意什么事项?在使用H P L C 时,应特别注意”柱外效应”对分析结果的影响由于样品分子在液体流动相中的扩散系数比在气体中小4 5 个数量级液体流动相的流速也比气相慢1-2 个数量级因此样品进入色谱柱后在柱子以外的任何死体积进样器柱接头连接管检测器中样品分子的扩散和滞留都会引起色谱峰的展宽而使柱效降低为使柱外效应减之最小获得理想的分析结果仪器的流动相管路连接非常重要,一般A g i l e n t1 1 0 0 L C在第一次安装时,均有受过专业培训的安装工程师负责安装,各种接头会处理的非常完美客户只需在更换色谱柱时注意接头处理就可以了一般柱子入口接头为不锈钢卡套接头柱子出口为不锈钢卡套接头或P E E K 管线手拧街头当完成第一次安张后不锈钢卡套已固定死当接不同的柱子时要注意柱子接头处的形状和长度否则会产生一个非常大的死体积下面是不同厂家柱子接头的形状和长度请参考1 1 手动进样阀需做那些维护使用时要注意什么对于手动进样器当使用缓冲溶液后或者进浓度差异比较大的样品时要用专用工具而不是用带针头的注射器冲洗进样口同时搬动进样阀数次每次数毫升注意事项A 安装时六通阀的5 6 出口要与注射器在同一水平线上以防止虹吸现象的发生导致进样量的重复性变异B 进样量的多少要根据定量管的L O O P 体积决定当样品量少时 进样体积由注射器的进样体积决定但最大进样体积要小于1/2 l o o p 体积当样品量较多时进样体积由定量管的体积决定为保证样品完全把定量管的流动相置换干净需注射5 6 倍的L O O P 体积C 要使用专用的液相注射器进样绝对不可以用气相的注射器