大学分子生物学期末考试大题.pdf

1.1.试比较原核生物和真核生物启动子结构的差别。试比较原核生物和真核生物启动子结构的差别。答：原核生物启动子：Pribnow box（-10 序列）：共同序列 TATAAT，-4-13bp 之间。决定转录的方向，是 RNA pol的牢固结合位点，称为结合位点。Sexfama box（-35 序列）：共同序列 TTGACA，TTG 十分保守，RNA pol 全酶依靠因子的起始识别位点，也称识别位点。真核生物启动子：TATA box：TATAAAA，两侧富含GC，位于-26-34，-30 左右，决定转录起始的选择。CAAT box：GGC/TCAATCT，位于-75，-70-80，开头两个 G 的重要性等于CAAT 部分，非常保守，可能是真核生物RNA pol II的结合部位，决定转录起始的频率。GCbox：GGGCGG，位于-80-110，GC 区与 sp1 等转录因子结合，可提高转录起始的频率。2.2.试比较原核生物和真核生物基因转录的差异试比较原核生物和真核生物基因转录的差异RNA pol 的差别：原核生物只有一种 DNA pol 负责转录所有类型的 RNA；而真核生物有三种 RNA pol（RNA pol），负责不同类型基因的转录，合成不同类型的RNA。转录产物的差别：原核生物的初始产物与Pr 序列成线性关系。真核生物的初始产物包含内含子序列，因此转录产物需经过剪切，连接等过程除去内含子。转录产物的加工：真核生物转录产物要经过修饰作用，即与5端帽化和 3端聚合化。与基因结构相吻合，原核生物mRNA 是多顺反子，而真核生物mRNA 是单顺反子。时空差异：原核生物的转录和翻译在细胞的同一部位进行。真核生物成熟的mRNA 转移到细胞质内参与 Pr 的生物合成，转录和翻译相对独立。3.3.什么是基因表达？可用哪些技术来检测一个基因是否表达？什么是基因表达？可用哪些技术来检测一个基因是否表达？基因表达，指生物基因组中结构基因所携带的遗传信息经转录和翻译等一系列过程，合成特定的蛋白质，进而发挥其特定的生物学功能和生物学效应的全过程。转录水平上的表达检测：Northern 杂交、RTPCR、荧光定量 PCR蛋白水平上的表达检测：Western 杂交、含量、酶活等。4.mRNA4.mRNA 前体加工中加尾和加帽的生物学功能有哪些？前体加工中加尾和加帽的生物学功能有哪些？加尾的功能：有利于 mRNA 穿过核孔；稳定 mRNA；增强翻译效率。加帽的功能：mRNA 稳定；增加蛋白质合成效率；帽子结构对mRNA 前体剪接是必需的。1.1.论述论述 PCRPCR 技术的基本原理及其应用。技术的基本原理及其应用。依据体内 DNA 的半保留复制机理及 DNA 分子在不同温度下双链和单链可以相互转变的性质，人为地控制体外合成系统的温度，使双链DNA 变成两条单链 DNA，单链DNA 用 4 种 dNTPs 在引物和 DNA pol 的作用下合成新生的 DNA 互补链。包括高温变性、低温退火和适温延伸三个阶段。PCR 的应用：在分子生物学中的应用；在临床医学中的应用；在法医鉴定方面的应用。1.1.什么是什么是 C C 值矛盾，值矛盾，C C 值矛盾具体表现在哪些方面值矛盾具体表现在哪些方面一般而言，随着生物的进化，生物体的结构与功能越复杂，其 C 值也越大。但真核生物中DNA 含量并不与生物的复杂性相一致，这种反常现象称为C 值矛盾。C 值矛盾表现在：1）、结构、功能相似的同一类生物中，甚至亲缘关系十分接近的物种之间，它们的 C 值可相差 10 倍乃至上千倍。2）、较低等生物的 C 值大于较高等生物的 C 值3）、真核生物的 C 值之大，远远超过其基因编码所需试比较原核生物基因组和真核生物基因组的特点试比较原核生物基因组和真核生物基因组的特点原核生物基因组的特点：原核生物基因组的特点：不具备明显的核结构，只有核类，即DNA 相对集中的区域.基因组小，一般只有一个染色体，大多为双链环状，少数为单链或线形.染色体 DNA 并不于 Pr 固定地结合，不具核小体结构.结构简练，重复序列和非编码序列很少，体现经济原则.功能密切相关的基因构成转录单元，并常转录成含多基因信息的mRMA 分子，称为多顺子反子 mRMA.有重叠基因：同一段 DNA 片段可以编码 2-3 中 Pr 分子.真核生物基因的特点：真核生物基因的特点：结构复杂，基因极庞大。有若干个染色体，一般不呈环状，DNA与 Pr 紧密结合形成染色体，具多个复制起始点。存在核膜，DNA 的转录和翻译存在时空差别。有很多不编码序列或介入序列。有大量的重复序列功能上密切相关的基因集中程度中程度不如原核生物高，大多分散在不同的染色体上，但有许多基因家族和假基因存在。有细胞器基因，chl-DNA mit-DNA，其密码子有特异性。如何确定如何确定 RNARNA 提取的质量？提取的质量？测 OD 值，A260/280 为 1.8-2.0 之间说明纯度可以，还可将RNA 跑个电泳，一般来说要有较清晰的三条带，分别为5s,18s,28s rRNA，如果条带弥散看不清，说明RNA 有降解现象。1.1.简述简述 DNADNA 复制过程中需要哪些酶和蛋白质参与，各具何作用。并以大肠杆菌为例，简述复制过程中需要哪些酶和蛋白质参与，各具何作用。并以大肠杆菌为例，简述DNADNA 复制的起始过程。复制的起始过程。DNA 聚合酶：DNA 合成。引物酶和 RNA 聚合酶：合成引物。解螺旋酶：解开螺旋SSB：使解开的螺旋保持单链状态。DNA 连接酶：冈崎片段的连接旋转酶：超螺旋变为负超螺旋1、DnaA 结合到 OriC 右侧的 4 个 9bp 共同序列上，直到达20-40 个 DnaA 单体蛋白结合成一个核心。然后 DnaA 蛋白作用于 OriC 左侧的 3 个 13bp 重复序列上，这几个位点的DNA 融化解链，形成开放复合物。2、DnaB 和 DnaC 以聚集体的形式与开放复合物偶联，形成一个复合物。3、每个 DnaB 六聚体结合 6 个 DnaC 单体，产生的蛋白聚集体为480KD，直径 6nm 球状体。4、DnaA 旋转酶使解旋产生的正超恢复为负超，SSB 使产生的单链保持单链状态。5、DNA pol 从 Ori 区阅读，并在 Ori 区终止，产生一段 RNA 引物，其 3-OH 引导 DNA pol的合成反应。试阐述原核生物试阐述原核生物 DNADNA 复制与真核生物复制与真核生物 DNADNA 复制的异同点：复制的异同点：相同点：相同点：都是保留和半不连续复制，复制过程都有起始，延长和终止三阶段，都必须有相应功能的 Pr（如 SSB）和 DNA pol 参加。不同点：不同点：DNA pol，其中DNA pol是主要的 DNA pol。真核生物有DNA pol、，其中 DNA pol、DNA pol是主要的 DNA pol；复制起点和速度不同：原核生物只有一个复制起点，而真核生物有多个复制起点。原核生物复制速度大于真核生物；真核生物在完成复制之前，各个起始点上的 DNA 的复制不能再开始，而在快速生长的原核生物中，复制起始点上可以连续开始新的DNA 复制。引物酶：原核细胞中引物酶同解族酶偶联，而真核细胞内引物酶同后滞链的复制酶DNA