luminex原理应用.pptx

常见的细胞因子检测方法常见的细胞因子检测方法ELISAELISpot免疫学功能研究缺点缺点：一次实验只能检测一种细胞因子PCR原位杂交流式细胞术胞内染色缺点缺点：一次实验检测的细胞因子种类有限；不能定量第1页/共24页多功能液相芯片分析系统的优势多功能液相芯片分析系统的优势同时检测几种甚至十种以上细胞因子快速鉴定Th1/Th2特异性免疫应答需要的样本量少（50ul；血清、血浆、培养上清等）节省时间和经费第2页/共24页LuminexLuminex技术原理和优势技术原理和优势LuminexLuminex技术应用技术应用LuminexLuminex相关试剂盒产品相关试剂盒产品主要内容主要内容第3页/共24页 Luminex技术是在有色微球、激光技术、应用流体学及高速数字信号处理技术的基础上发展起来的一种多功能的液相分析平台。基本概念基本概念第4页/共24页基本原理基本原理捕获分子捕获分子待测分子待测分子报告分子报告分子第5页/共24页捕获微球捕获微球聚苯乙烯材料，大小均一，直径5.6 um标记了两种荧光染料，每种染料的浓度有10个梯度，通过调整两种染料的比例可以获得100种不同染色的微球标记了针对检测物的捕获分子作为探针第6页/共24页每种微球的地址由两每种微球的地址由两种红色荧光颜料的掺种红色荧光颜料的掺入比例唯一决定入比例唯一决定颜色编码的微球颜色编码的微球荧光微球荧光微球第7页/共24页红色染料浓度逐渐增大红色染料浓度逐渐增大紫紫色色染染色色浓浓度度逐逐渐渐增增大大第8页/共24页第9页/共24页捕获抗体-抗原-检测抗体夹心复合物捕获微球的检测原理捕获微球的检测原理第10页/共24页检测原理检测原理样本检测区样本检测区第11页/共24页红光用于鉴定微球红光用于鉴定微球绿光用于检测荧光信绿光用于检测荧光信号的强弱号的强弱检测原理检测原理第12页/共24页在一个反应体系内测定多个指标在一个反应体系内测定多个指标在一个反应体系内测定多个指标在一个反应体系内测定多个指标检测原理检测原理第13页/共24页检测原理检测原理第14页/共24页高通量检测高通量检测：可对同一样本中的多种不同目的分子同时进行分析在35-60分钟内可对96个不同样本进行检测。灵活性灵活性，可以随意组合检测指标多元分析多元分析，操作简便，可以节约试剂、时间和精力灵敏度高灵敏度高，重复性好重复性好所用标本量少所用标本量少，尤其适合分析稀有样本液相反应动力学液相反应动力学，更快地达到平衡点，缩短实验时间LuminexLuminex的技术优势的技术优势第15页/共24页Luminex技术 与固相芯片 重复性好，敏感性高 灵活性好 特异性高：因为只读微粒上的信号。检测迅速:液相悬浮杂交比固相扩散杂交快。价格低：设备和试剂的价格都低于芯片。成熟的技术：不需要进一步投入做产品研发。第16页/共24页Luminex技术与ELISA方法高通量检测：用微量标本进行多个指标检测比ELISA的灵敏度高100-10000倍重复性好操作简便、省时省力第17页/共24页液相芯片的应用液相芯片的应用免疫学分析免疫学分析细胞因子检测受体配体分析酶分析蛋白质蛋白质相互作用分析蛋白质DNA相互作用分子核酸研究核酸研究SNP检测基因表达谱分析第18页/共24页Luminex检测体系的组成检测体系的组成Luminex仪器 Luminex 检测试剂 Luminex试剂盒Luminex 附件第19页/共24页Luminex检测配套试剂盒检测配套试剂盒R&D:Fluorokine MAP系列，主要检测各种细胞因子及MMP系列蛋白Biosource：各种细胞因子、生长因子系列Upstate:Beadlyte系列，主要检测细胞因子/趋化因子、信号转导相关蛋白及激酶的活性Linco：各种细胞因子和趋化因子检测Cayman：检测前列腺素E2第20页/共24页R&DR&D配套配套LuminexLuminex试剂盒试剂盒human IFN-g ghuman IL-2human IL-4human IL-5human IL-6human IL-10human IL-17human TNF-a ahuman TNF-Human CCL系列系列Human VEGF mouse GM-CSF mouse CCL2 mouse IFN-g mouse IL-1 mouse IL-2 mouse IL-4 mouse IL-5 mouse IL-6 mouse IL-10 mouse TNF-a mouse VEGF 第21页/共24页BiosourceBiosource配套试剂盒配套试剂盒Human/Mouse Th1/Th2 CytokinesHuman/Mouse ChemokinesHuman/Mouse Inflammatory CytokinesHuman/Mouse Growth Factor第22页/共24页LincoLinco配套试剂盒配套试剂盒人/小鼠/大鼠 Cytokine/Chemokine疾病相关研究试剂盒：内分泌（糖尿病、肥胖病、垂体激素等）脂肪组织分泌代谢心血管疾病皮肤疾病细胞代谢骨代谢等第23页/共24页UpstateUpstate配套试剂盒配套试剂盒各种总/磷酸化的信号转导蛋白Human/Mouse/Rat CytokinesHuman/Mouse ChemokinesHuman Growth factor第24页/共24页