生物学常用染色液汇总.doc

常用染料介绍
（一）天然染料
1、苏木精
苏木精就是从南美得苏木(热带豆科植物）干枝中用乙醚浸制出来得一种色素,就是最常用得染料之一。苏木精不能直接染色,必须暴露在通气得地方，使她变成氧化苏木精(又叫苏木素）后才能使用,这叫做“成熟".苏木精得“成熟”过程需时较长,配置后时间愈久,染色力愈强。被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力.所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。常用得媒染剂有硫酸铝按、钾明矾与铁明矾等。　
　 苏木精就是淡黄色到锈紫色得结晶体,易溶于酒精，微溶于水与甘油,就是染细胞核得优良材料,她能把细胞中不同得结构分化出各种不同得颜色。分化时组织所染得颜色因处理得情况而异,用酸性溶液（如盐酸—酒精)分化后呈红色，水洗后仍恢复青蓝色,用碱性溶液（如氨水)分化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。
2、洋红
洋红又叫胭脂红或卡红。一种热带产得雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末，提取出虫红,再用明矾处理，除去其中杂质,就制成洋红.单纯得洋红不能染色，要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。常用得酸性溶液有冰醋酸或苦味酸,碱性溶液有氨水、硼砂等.
洋红使细胞核得优良染料,染色得标本不易褪色。用作切片或组织块染都适宜，尤其适宜于小型材料得整体染色。用洋红配成得溶液染色后能保持几年。洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。
(二)人工染料
人工染料，即苯胺染料或煤焦油染料,种类很多,应用极广.它们得缺点就是经日光照射容易褪色,苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。在制片中注意掌握酸碱度,并避免日光直射，也能经几年不褪色。
1、酸性品红
酸性品红就是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0、３％).她就是良好得细胞制染色剂,在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞与纤维素壁。她跟甲基绿同染，能显示线粒体。
组织切片在染色前先浸在带酸性得水中,可增强它得染色力。酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度,易在自来水中褪色.
2、刚果红　
刚果红就是酸性染料，呈枣红色粉末状，能溶于水喝酒精,遇酸呈蓝色。她能作染料,也用作指示剂。她在植物制片中常作为苏木精或其她细胞染料得衬垫剂。她用来染细胞质时,能把胶制或纤维素染成红色。在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。刚果红可以跟苏木静作二重染色,也可用作类淀粉染色，由于她能溶于水与酒精,所以洗涤与脱水处理要迅速.
3、甲基蓝
甲基蓝就是弱酸性染料,能溶于水与酒精.甲基蓝在动植物得制片技术方面应用极广。她跟伊红合用能染神经细胞,也就是细菌制片中不可缺少得染料。它得水溶液就是原生动物得活体染色剂.甲基蓝极易氧化,因此用她染色后不能长久保存。
４、固绿
固绿就是酸性染料，能溶于水(溶解度为４％）与酒精（溶解度为9％)。固绿就是一种染含有浆质得纤维素细胞组织得染色剂，在染细胞与植物组织上应用极广。她与苏木精、番红并列为植物组织学上三中最常用得染料。
5、苏丹Ⅲ
苏丹Ⅲ就是弱酸性染料，呈红色粉末状，易溶于脂肪与酒精(溶解度为0、15%）。苏丹Ⅲ就是脂肪染色剂.
6、伊红
这类染料种类很多。常用得伊红Y,就是酸性染料，呈红色带蓝得小结晶或棕色粉末状，溶于水（１5摄氏度就是溶解度达4４%)与酒精（溶于无水酒精得溶解度为２%)。伊红在动物制片中广泛应用,就是很好得细胞质染料，常用作苏木精得衬染剂。
７、碱性品（复)红
碱性品红就是碱性染料，呈暗红色粉末或结晶状，能溶于水(溶解度1％)与酒精(溶解度8％）.碱性品红在生物学制片中用途很广,可用来染色胶原纤维、弹性纤维嗜复红性颗粒与中枢神经组织得核质.在生物学制片中用来染维管束植物得木质化壁，又作为原球藻、轮藻得整体染色。在细菌学制片中,长用来鉴别结核杆菌。在 尔根氏反应中用作组织化学试剂，已核查脱氧核糖核酸。
８、结晶紫
结晶紫就是碱性染料，能溶于水（溶解度9%)与酒精（溶解度8、7５%）。结晶紫在细胞学、组织学与细菌学等方面应用极广，就是一种优良得染色剂。她就是细胞核染色常用得,用来显示染色体得中心体,并可染淀粉、纤维蛋白、神经胶质等。凡就是用番红与苏木精或其她染料染细胞核不能成功时,用它能得到良好得结果。用番红与结晶紫作染色体得二重染色，染色体染成红色,纺锤丝染成紫色，所以也就是一种显示细胞分裂得优良染色剂。用结晶紫染纤毛,效果也很好。用结晶紫染色得切片,缺点就是不易长久保存.
9、龙胆紫　
龙胆紫就是混合得碱性染料，主要就是结晶紫与甲基紫得混合物。在必要就是,龙胆紫能跟结晶紫互相替用。医药上用得紫药水，主要成分就是甲基紫，需要时能代替龙胆紫与结晶紫.
10、中性红
中性红就是弱碱性染料,呈红色粉末状，能溶于水（溶解度４％)与酒精（溶解度1、8％）.它得碱性溶液中呈现黄色,在强碱性溶液中呈蓝色，而在弱酸性溶液中呈红色,所以能用作指示剂.中性红无毒，常做活体染色得染料,用来染原生动物与显示动植物组织中活细胞得内含物等。陈久得中性红水溶液，用作显示尼尔体得常用染料。
11、番红
番红就是碱性染料，能溶于水与酒精。番红就是细胞学与动植物组织学生常用得染料,能染细胞核、染色体与植物蛋白质，示维管束植物木质化、木栓化与角质化得组织，还能染孢子囊。
12、亚甲蓝或美蓝
亚甲蓝或美蓝就是碱性染料,呈蓝色粉末状，能溶于水（溶解度9、5%)与酒精(溶解度6％）.亚甲蓝就是动物学与细胞学染色上十分重要得细胞核染料,其优点就是染色不会过深。　
13、甲基绿
甲基绿就是碱性染料。它就是绿色粉末状，能溶于水(溶解度8％)与酒精（溶解度3%）。甲基绿就是最有价值得细胞与染色剂，细胞学上常用来染染色质，跟酸性品红一起可作植物木质部得染色。
1、 碘—硫酸法
植物细胞细胞壁得主要成分就是纤维素，纤维素被硫酸水解后，遇碘呈蓝色反应。因此用碘—硫酸法可鉴定细胞壁得成分。
试剂配制方法:
1％　碘液　将1、5 克碘化钾溶于10０ 毫升得蒸馏水中,待完全溶解后,加入1 克碘,震荡溶解.
66、5%　硫酸 7 份浓硫酸加入3 份蒸馏水配制而成。配制时要将浓硫酸慢慢地加入水中，并不断地用玻璃棒搅拌，否则会因急剧发热，而使容器炸裂.
2、　苏丹Ⅲ反应
苏丹Ⅲ可将细胞中脂肪、栓质、角质染为桔红色,因此可用此染料显示出上述物质在细胞中得分布与位置。
配制方法:将苏丹Ⅲ （或苏丹Ⅳ）染料0、1 克，溶于10 毫升9５% 酒精中,然后加入10 毫升甘油。
３、 间苯三酚反应法
间苯三酚反应就是植物显微化学中确定木质化细胞壁得最常用与最简单得方法。这一反应得原理就是当间苯三酚在酸性环境下与细胞壁中得木质素相遇时，发生樱桃红色或紫红色反应。其方法就是将要鉴定得切片先用一滴1mol/L 盐酸浸透(间苯三酚要在酸性环境下才能与木质素起作用）,然后滴一滴５—1０% 间苯三酚得８５%　酒精溶液,木质化得细胞壁即发生颜色反应。
４。碘液测试淀粉法
淀粉遇碘呈蓝色反应，它就是鉴定淀粉得最常用方法.
碘液配制方法：将2 克碘化钾放入５ 毫升蒸馏水中,加热使其完全溶解；然后加入1克碘，完全溶解后用蒸馏水稀释至3０0 毫升，放入具有毛玻璃塞得棕色玻璃瓶中，置于暗处保存。

测定淀粉时,可将上述溶液稀释2-10 倍，使染色不致过深，效果更好。
5、　压片法常用得染料
(1) 醋酸洋红　为压片法中最常用得染料。
配制方法就是：先将100 毫升4５％ 醋酸水溶液放于烧瓶中煮沸,移去火焰,停止加热。然后缓慢加入1 克洋红粉末，全部加入后再煮沸１－2 分钟。此时可将一枚生锈铁钉用棉线悬入溶液中约1　分钟后取出(铁为媒染剂）。静置１２ 小时后经过过滤,放入磨口玻璃塞棕色瓶中保存备用。
（2) 石炭酸———品红 为近年创用得一种优良核染色剂,将细胞核与染色体染为红紫色，细胞质一般不着色,背景清晰。
其配制方法有二：
配方Ⅰ：
原液A：取３ 克碱性品红溶于100 毫升得70％酒精中（此液体可长期保存）。
原液B：取10 毫升原液Ａ,加入9０ 毫升５% 得石炭酸(酚)水溶液中(可保存两周）.
染色液:取5５ 毫升原液B 加6 毫升冰醋酸与6 毫升37％　甲醛.
此染色液因含有较多得甲醛，可使原生质体硬化，而能保持其固有得形态.但也因此不易使组织软化，因而不太适用于植物组织得染色体压片染色(本染色液适于植物原生质体培养中使用)。在此基础上加以改进得配方Ⅱ，则可普遍地用于一般植物组织得染色体压片得染色。
配方Ⅱ：
取配方Ⅰ中得染色液2０ 毫或加80　毫升4５％ 醋酸与1、8　克山梨醇。
染色液配制后为淡品红色，如立即使用染色较浅.放置2　周后,染色能力显著增强，而且放置时间越久,染色效果越好。
6。铬酸－硝酸离析法
为了观察一个细胞完整得立体形态结构，可以用一些化学药品把细壁中得中层物质(果胶质）溶解,使细胞分离散开,便于观察。
离析前先把材料洗净，用刀切成1—2 毫米宽得狭条(如叶片)或切成火柴棍粗细得长约１ 厘米得小条（如根或茎)。然后把切好得材料放进小玻璃瓶中,加入离析液（加入量约为材料得２0 倍),塞紧瓶塞,放于30—40℃ 温箱中。浸渍时间因材料性质而异,叶片与幼嫩得根茎组织3－4 小时即可，而有些次生结构（如木质部)则需要更长得时间.离析情况应随时检查，检查得方法就是取少许离析材料,放在载玻片上，加一滴水,盖上盖玻片，然后用解剖针尖端轻轻敲打，如果材料分离则表明浸渍时间已够。浸渍时间超过一天以上时，应更换离
析液一次。离析时间已够得材料,用水洗净后放入70％ 酒精中保存。
离析液配方：
10％ 铬酸 1份
１0％硝酸 1　份
两种溶液应在使用时才混合,混合均匀后再使用.
二、常用染色液得配制
1、吕氏 (Loeffeｒ　）碱性美蓝染液
      Ａ液:

美蓝(methyｌene blue）
0、０6g

95%乙醇
30mL
 　    B液：

KOＨ
０、０1g

蒸馏水
100mL
    　   分别配制A液与Ｂ液,配好后混合即可。
2、齐氏Ziehｌ）石炭酸复红染色液
 　     A液:

碱性复红（bａｓic fuchsiｎ）
0、3　g

９5％乙醇
10mL
 　  　  B液:

石炭酸
５、0 ｇ

蒸馏水
９5 mL
        配制方法：将碱性复红在研钵中研磨后,逐渐加入９5%乙醇,继续研磨使其溶解，配成Ａ液.　ﻫ        将石炭酸溶于水中，配成B液.
        混合Ａ液及B液即成。通常可将此混合液稀释５～10倍使用，稀释液易变质失效,一次不宜多配。
3、革兰氏（Grａm)染色液
     （1)。 草酸铵结晶紫染液
      A液：

结晶紫(ｃrｙstａｌ　viｏlet)
2ｇ

９5%乙醇
20ｍＬ
 　    B液:

草酸铵（ammｏnium ｏxlate）
０、８g

蒸馏水
８0mL
 　     混合Ａ液及B液，静置４8h后使用。
       (２)。 卢戈氏(Lugｏl）碘液

碘片
１g

碘化钾
2g

蒸馏水
300ｍL
       配制方法：先将碘化钾溶解在少量水中,再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘全溶后,加足水分既成。
      （3)． 95％得乙醇溶液　ﻫ      (４）. 番红复染液

番红（safrａｎiｎe　Ｏ)
2、５ｇ

９５乙醇
10０mL
    　   取上述配好得番红乙醇溶液1０mL与80mL蒸馏水混匀既成。
４、芽孢染色液 　    （１）。　孔雀绿染液

孔雀绿（malａchite green)
5g

蒸馏水
１０0ｍＬ
      　(2)。 番红水溶液　

番红
0、5g

蒸馏水
100mL
        （3). 苯酚品红溶液

碱性品红
11g

无水乙醇
10０mL
       配制方法：取上述溶液1０mＬ与１0０mL5％得苯酚溶液混合,过滤备用。
       （4）.　黑色素（nigｒosin)溶液

水溶性黑色素
1０ｇ

蒸馏水
100mL
      　配制方法:称取１0ｇ黑色素溶于１00mL蒸馏水中,置沸水浴中30min后，滤纸过滤两次，补充水到100mL,加0、5g甲醛,备用。
5、荚膜染色液　
      （1）。 黑色素水溶液　

黑色素
5ｇ

蒸馏水
100mL

福尔马林（40％甲醛）
0、５mL
        配制方法：将黑色素在蒸馏水中煮沸5min,然后加入福尔马林作防腐剂。
    　 (2）． 番红染液　ﻫ 　     与革兰氏染液中番红复染液相同。
6、鞭毛染色液
       (1）。 硝酸银鞭毛染色液 ﻫ 　      A液：

单宁酸
５g

FeCl3
１、5g

蒸馏水
１00mL

福尔马林（1５%）
２mＬ

NaOH（1％)
１mL
       冰箱内可以保存3~7天，延长保存期会产生沉淀,但用滤纸除去沉淀后,仍能使用.
 　  　    B液：

AｇＮO3
2g

蒸馏水
100mL
    　   配制方法:待ＡgNO3溶解后，取出10mＬ备用,向其余得90mＬ　AgNＯ3中滴入NＨ４OH，使之成为很浓厚得悬浮液，再继续滴加NH4OH，直到新形成得沉淀又重新刚刚溶解为止。再将备用得10mL AgＮO3慢慢地滴入，则出现薄雾，但轻轻摇动后，薄雾状沉淀又消失,再滴入AgNO3，直到摇动后仍呈现轻微而稳定得薄雾状沉淀为止。冰箱内保存通常1０天内仍可使用。如雾 重，则银盐沉淀出,不宜使用。
        （2）． Ｌeｉfson氏鞭毛染色液 ﻫ    　    A液:

碱性复红
1、２g

95%乙醇
1００ｍＬ
 　       B液:

单宁酸
3g

蒸馏水
10０mL
       　 C液：

NaＣl
1、5g

蒸馏水
100mL
       临用前将Ａ，B，Ｃ液等量混合均匀后使用。三种溶液分别于室温保存可保存几周,若分别置冰箱保存，可保存数月。混合液装密封瓶内置冰箱几周仍可使用
（六）染色剂
1、细菌染色剂
配方一 齐氏(Zieｈl）石炭酸品红染液
甲液 取石炭酸5克,溶解在9５毫升蒸馏水中。
乙液　取0、3克碱性品红，放入研钵中研磨，逐渐加入10 毫升95％酒精,继续淹没,使它溶解。
将甲液与乙液混合后,摇匀,过滤，装瓶,备用。
配方二 罗氏（Loｅffler’ｓ）美蓝染液
甲液 取５克美蓝，溶于10０ 毫升９5%酒精中，制成美蓝-酒精饱与液。
乙液 取氢氧化钾0、01　克（或1%氢氧化钾溶液1 毫升），溶液也可用于放线菌染色,0、1％浓度可用于酵母菌染
色。
配方三 革兰氏（Ｇram’s）染液
用此液染色因先用甲液染色,再加乙液固定,用丙液处理,最后用丁液复染.四种液体得配方如下：
甲液（结晶紫液)
（1)结晶紫　2克 9５％酒精　２0 毫升
（2)草酸铵 0、８ 克 蒸馏水 80毫升
使用钱江（1）、(2）液相混，静置４8　小时后使用。
乙液（碘液)
碘　１克　碘化钾 2克 蒸馏水 ３00 毫升
将碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入碘，待碘全部溶解后，加水稀释至300 毫升。
丙液 95%酒精溶液
丁液（番红花红液）
2、5%番红花红酒精溶液 １０毫升　蒸馏水 100毫升
2、细菌特殊染色剂
配方一　芽孢染液 用此配方染色就是用甲液染色后,用乙液复染。
甲液 取5克孔雀绿,加入少量蒸馏水，使它溶解后用蒸馏水稀释到100毫升,即成孔雀绿染液.
乙液 取番红花红0、5克,加入少量蒸馏水，使它溶解后,用蒸馏水稀释到10０　毫升，集成番红花红复染液。
配方二 荚膜染液 此配方先用甲液染色，后用乙液复染。
甲液 取结晶紫0、1　克，溶于少量蒸馏水后,加水稀释到100 毫升，再加入0、2５　毫升冰醋酸一结晶紫染液.
乙液 取硫酸铜（ )３1、3　克，溶于少量蒸馏水后,加水稀释到100毫升,即成20％硫酸铜脱色剂。
配方三 鞭毛染液
甲液
饱与明矾溶液 2 毫升 5％石炭酸溶液 5 毫升
２0％丹宁酸溶液　2毫升
乙液
碱性品红 11　克　95％酒精 １０0毫升
使用前取甲液9 毫升与乙液１毫升相混,过滤即可。
３、植物细胞壁染色剂
配方一 纤维素细胞壁染液(Ⅰ)
取固绿０、1 克，溶于100 毫升95%酒精中，即成0、１%固绿—酒精溶液。
该液能染色纤维素细胞壁，还用于动植物中作浆质染色剂.
配方二　纤维素细胞壁染液（Ⅱ）
氯化锌 20　克 碘化钾 6、5　克
碘 １、５ 克 蒸馏水加至10０ 毫升
先把氯化锌溶于少量蒸馏水中,再加入６、５克碘化钾，在碘完全溶解后,用蒸馏水稀释到１00毫升，即成碘—
氯化锌溶液。
该染液能把细胞壁染成紫色，胞质染成淡黄色，胞核染成棕色。
配方一 纤维素细胞壁染液（Ⅲ）
甲液　取1克碘与１、5克碘化钾,溶于10０毫升蒸馏水中，即成1％碘液。
乙液　取７份硫酸与３份蒸馏水相混，即成６6、5％硫酸溶液。
染色时，在材料上滴加甲液,再加一滴乙液，纤维素细胞壁就染成黄色。
配方四 木质化细胞壁染液（Ⅰ）
硫酸化苯胺（或盐酸话本安)　1份
蒸馏水 70 份 95%酒精 30份
硫酸 30 份
将上述各组分相混,将细胞材料放入混合液里染色，可就是木质化细胞壁呈鲜黄或姜黄色。
配方五 木质化细胞壁染液（Ⅱ）
取间苯三酚４~5克,溶于10０毫升95％酒精中，即成间苯三酚—酒精液。
先在材料上滴上１ 滴浓盐酸,然后滴上间苯三酚-酒精液１ 滴，木质化得细胞壁就染上樱红或紫红色。
配方六 木质化细胞壁染液（Ⅲ)
取1 克番红,溶于99毫升蒸馏水中，即成1％番红溶液。
4、细胞质染色剂
配方一 伊红染液
伊红染液一般配用水溶液与酒精溶液两种。
(1)取1 克伊红,溶于99毫升蒸馏水中,即成1%伊红水溶液（市售红墨水内含伊红成分,可以用红墨水稀
释液来代替本溶液）.
（2)取1 克伊红，溶于99 毫升70％酒精中，即成１％伊红—酒精溶液。
配方二　甲基蓝染液
取１克甲基蓝,溶于2９ 毫升7０%酒精中,加入7０ 毫升蒸馏水，即成1％甲基蓝染液.
配方三 亮绿染液
取0、5 克亮绿，溶解在１０0 毫升蒸馏水中，即成０、5％亮绿溶液.
5、细胞核染色剂
配方一 甲基绿染液
取1克甲基绿,溶于99 毫升蒸馏水中，加入1毫升冰醋酸。本染液能染细胞核，还用来染木质化细胞壁.
配方二　龙胆紫染液
取1 克龙胆紫，溶于少量2％醋酸溶液中，加2%醋酸溶液,直到溶液不呈深紫色止。
配方三 美蓝（亚甲基蓝)染液
取0、5 克美蓝，溶于３0毫升95％酒精中，加10０ 毫升0、0１%氢氧化钾溶液,保存在棕色瓶内 .
此溶液能染细胞核，还用来染细菌、血与神经组织等.
配方四 硼砂—洋红染液
取4克硼砂，溶于96毫升蒸馏水中。再加入2 克洋红，加热溶解后煮沸30分钟，静置3 日,用１00 毫升70%
酒精冲淡，放置24　小时后过滤。
此染液能染细胞核,还用来染糊粉粒与一般动物、植物得整体染色,如水螅、血吸虫等整体标本.
配方五 德氏(Ｄeｌａfieｌd’s)苏木精染液
甲液　取1 苏木精,溶于6 毫升无水酒精中,即成苏木精—酒精溶液.
乙液　取10克铵矾溶于90 毫升蒸馏水中,即成１０％铵矾水溶液。
取甲液逐滴加入到乙液中，用纸遮盖，放在阳光明亮处，使它充分氧化。３~４　天后将溶液过滤,在滤液中加
入２5 毫升甘油与２5毫升甲醇,保存在密闭玻璃瓶内。静置1~2　个月，待该液颜色变深时过滤,可长久保存.
本染液就是染色体得优良染色剂,除能染细胞核外，还用来染纤维素、细胞壁与动植物组织。
配方六 席夫(Ｓchiff’ｓ）试剂
称取0、５ 克碱性品红,加到10０毫升煮沸得蒸馏水中,再微微加热5　分钟，不断搅拌，使它溶解。在溶液冷却
到5０ 摄氏度时过滤，滤液中加入10毫升1N 盐酸。再冷却到25 摄氏度时加入0、5 克偏重亚硫酸钠( )或无
水亚硫酸氢钠( )。把溶液装入棕色试剂瓶内,摇荡后，塞紧瓶塞,放在黑暗中24 小时。在溶液颜色退到淡
黄色时,加入0、5 克活性炭,用力摇荡1 分钟，过滤后把滤液贮在棕色试剂瓶内,塞紧瓶塞，滤液应该就是无色
得。在使用时勿让溶液长时间暴露在空气中与见光(瓶外用黑纸或暗盒遮光）.如溶液变成红色，即失去染色
能力。
碱性品红就是较强得核染色剂,在孚尔根氏(Feulgeｎ’ｓ）反应中作为组织化学试剂，以检查DNＡ.
6、染色体染色剂
配方一 醋酸—洋红染液
取4５　毫升冰醋酸，加蒸馏水55 毫升，煮沸后徐徐加入洋红1　克，搅拌均匀后加入1　颗铁锈钉，煮沸10分钟,
冷却后过滤，贮存在棕色瓶内.
配方二 醋酸-地衣红染液
取4５ 毫升醋酸，跟55 毫升蒸馏水相混，加热，徐徐加入地衣红粉末１~2克，搅拌溶解后,缓缓煮沸2小时。
冷却后过滤,贮存在棕色瓶里。
配方三 龙胆紫染液
取1　克龙胆紫，用少量蒸馏水溶解后,加蒸馏水,稀释到10０ 毫升，保存在棕色瓶内。
配方四　甲苯胺蓝染液
取0、５ 克甲苯胺蓝，溶解在1００毫升蒸馏水中，即成0、５％甲苯胺蓝水溶液.
７、线粒体染色剂
配方一　詹钠斯绿Ｂ(Jaｎu’ｓ greeｎ 酒精饱与溶液
取１2５ 毫升詹钠斯绿Ｂ,加入到6２、5 毫升无水酒精中，搅拌,即成烟鲁绿B酒精饱与染液。
(1）取詹钠斯绿酒精饱与染液按１：３00０0 比例加蒸馏水稀释,用来染原生动物线粒体。
(2）取詹钠斯绿酒精饱与液，按1：１0000 比例加蒸馏水稀释，用来染新鲜蛙血线粒体。
配方二 詹钠斯绿B中性红染液
先配制詹钠斯绿B与中性红酒精饱与液.詹钠斯绿酒精饱与液见配方一。中性红酒精饱与液配制方法：取125
毫升中性红,加入到５0 毫升无水酒精中，搅拌.
在10 毫升生理盐水（两栖类生理盐水浓度为0、65％；哺乳类生理盐水浓度为0、9％)中，加入詹钠斯绿B酒精
饱与液0、7～１　毫升，中性红酒精饱与液2 毫升,混合。
詹钠斯绿B稀释液就是活体染液.
８、脂肪染色剂
苏丹Ⅲ染液
取0、1 克苏丹Ⅲ，溶于20 毫升95%酒精中，即成0、5％苏丹Ⅲ染液。
这染液能染脂肪,还能染木栓、角质层。
9、血液染色剂
配方一　瑞氏(Wright’s）染液
取瑞氏染料粉末0、1 克与甲醇60 毫升。把染料放在研钵内，加少量甲醇研磨，使染料溶解，然后把溶解得染
料倒入干净得棕色玻璃瓶。并用完甲醇为止。配制好得染液在室温中保存，即可使用。新鲜配制得染液偏碱性，
放置后呈酸性，染液贮存愈久染色愈好。这染液得适宜ｐＨ 值就是６、４～６、８。因此,染色时加入缓冲液,可维持
一定得酸碱度,使染色效果更好.
这种染液除能染血液，还能染疟原虫.
瑞氏染料可以自制。在100 毫升0、5%碳酸氢钠水溶液里加入１ 克美蓝，溶解后放在锅内,蒸上１ 小时，取出
冷却后过滤.在滤液里加入0、1%伊红水溶液500　毫升,随加、随搅拌，使混合液呈紫色。静置一夜后，用滤
纸过滤。滤纸上得沉淀物，在室内风干或放在干燥箱内,充分干燥后研磨成粉末,即成瑞氏染料。
配方二 甲基紫染液
取甲基紫0、5克,加到10０　毫升生理盐水中,溶解后加入冰醋酸０、０２ 毫升。
1０、吸虫染色剂
梅耶氏(Ｍayer’s ）明矾-洋红染液
取铵明矾(硫酸铝铵）5　克,溶于95毫升蒸馏水中，再加入0、5 克洋红酸,加热溶解，冷却后过滤。在滤液中
加入少量防腐剂，如麝香草酚、樟脑粉、水杨酸钠、苯酚（石炭酸)等，以防生霉。
这种染液适合于染小型动物材料,如吸虫等寄生虫得整体，也能染高等植物得表皮与蕨类植物得原叶体。
11、活体染色剂
配方一 中性红染液
先配成1％中性红水溶液(1 克中性红溶于1０0　毫升蒸馏水中)。取这种溶液1　毫升,用0、６%生理盐水（或蒸
馏水）稀释到50 毫升,即成０、02％中性红水溶液，贮存在棕色瓶里,放在黑暗处。
本染液用来显示原生动物得食物泡以及动植物组织中活细胞得内含物等
配方二　尼罗蓝（Ｎｉle Blue)染液
取０、１ 克尼罗蓝，溶解于1000~150０ 毫升蒸馏水中，即成尼罗蓝染液。
这种染液能把原生动物大核染成绿色，食物泡染成蓝色。
配方三　亚甲蓝染液
取0、１　克亚甲蓝，溶解于1000毫升蒸馏水中，即成亚甲蓝染液。
这种染液用于原生动物得活体染色.
1２、透明骨骼标本染色剂
配方一 茜素红染液(Ⅰ）
取冰醋酸5毫升、甘油5毫升、1％水合氯醛６0毫升混合。在这种混合液中方入少量茜素红,制成茜素红饱与
溶液。
配方二 茜素红溶液(Ⅱ)
取１克茜素红，溶于100毫升95％酒精中,搅拌,然后跟900 毫升1％氢氧化钾溶液相混，即成深紫色得茜素
红染液。
１．黑色素液　水溶性黑素10g，蒸馏水1０0ｍL，　甲醛(福尔马林)0、5ｍL。可用作荚膜得背景染色.
2．墨汁染色液 国产绘图墨汁40ｍL,甘油2ｍL，液体石炭酸2mL。先将墨汁用多层纱布过滤，加甘油混匀后,水浴加热,再加石炭酸搅匀,冷却后备用.用作荚膜得背景染色.
3.吕氏(Loeｆfｉeｒ)美蓝染色液
A 液：美蓝（ｍethylene bｌuｅ， 又名甲烯蓝）0、3g，　95%乙醇３0ｍL;
B 液：0、0ｌ％ KＯＨ l00mL。
混合A 液与B 液即成，用于细菌单染色,可长期保存.根据需要可配制成稀释美蓝液,按1:10 或1：100 稀释均可。
4．革兰氏染色液
(1）结晶紫(ｃrystａl viｏlｅｔ）液:结晶紫乙醇饱与液（结晶紫2g　溶于２０ｍL9５％乙醇中)２０mL,1％草酸铵水溶液80mＬ　将两液混匀置2４ｈ 后过滤即成。此液不易保存，如有沉淀出现,需重新配制。
（2)卢戈（Lugｏl)氏碘液：碘1ｇ，碘化钾2g,蒸馏水3００mL。先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入碘使之完全溶解,再加蒸馏水至3００mL　即成。配成后贮于棕色瓶内备用，如变为浅黄色即不能使用。
（3)９5％乙醇：用于脱色,脱色后可选用以下（4)或（5)得其中一项复染即可。
(4)稀释石炭酸复红溶液:碱性复红乙醇饱与液（碱性复红1g， 95％乙醇ｌ0mL， 5%石炭酸９0mL 混合溶解即成碱性复红乙醇饱与液)，取石炭酸复红饱与液l０mL　加蒸馏水9０ｍＬ 即成.
(5）番红溶液:番红O(safranine，又称沙黄O)2、5g，　95％乙醇100mL,溶解后可贮存于密闭得棕色瓶中，用时取20mＬ 与8０mL 蒸馏水混匀即可。
以上染液配合使用，可区分出革兰氏染色阳性（G＋)或阴性(Ｇ-)细菌，G－被染成蓝紫色，G+被染成淡红色
5、 鞭毛染色液
A液:丹宁酸5、０ｇ， FｅCl3 1、5ｇ,15%甲醛（福尔马林)2、０mL,l％NaOH 1、０mL，蒸馏水l0０mL；
B 液：AgＮＯ３ 2、０g, 蒸馏水100ｍL。
待AｇNO３　溶解后,取出l0mＬ 备用，向其余得90mLAgNO３ 中滴加NH4OＨ，即可形成很厚得沉淀，继续滴加NH4OＨ 至沉淀刚刚溶解成为澄清溶液为止,再将备用得ＡgＮO3 慢慢滴入，则溶液出现薄雾，但轻轻摇动后，薄雾状得沉淀又消失，继续滴入AgＮO3,直到摇动后仍呈现轻微而稳定得薄雾状沉淀为止，如雾重，说明银盐沉淀出,不宜再用。通常在配制当天便用,次日效果欠佳,第３　天则不能使用。
6、　0、5%沙黄（Safraniｎｅ)液:2、5%沙黄乙醇液20ｍL,蒸馏水80ｍＬ.将2、５%沙黄乙醇液作为母液保存于不透气得棕色瓶中，使用时再稀释。
７、 5％孔雀绿水溶液：孔雀绿５、0ｇ,蒸馏水100mＬ。
8、 0、05％碱性复红:碱性复红0、0５g，９5％乙醇1０0mＬ。
9.齐氏（Ziｅhｌ)石炭酸复红液：碱性复红0、3ｇ 溶于95%乙醇l0mL 中为A 液：0、0１％KＯH溶液ｌ０0mＬ 为B 液。混合Ａ、B 液即成。
1０。姬姆萨（Giｅｍsa)染液
（1)贮存液：称取姬姆萨粉0、5g，甘油３3ｍL,甲醇3３mＬ.先将姬姆萨粉研细,再逐滴加入甘油,继续研磨,最后加入甲醇,在56℃放置1~2４h 后即可使用。
（2）应用液（临用时配制）：取1mＬ　贮存液加19mＬ ｐH7、4 磷酸缓冲液即成.亦可取贮存液：
甲醇=１：４ 得比例配制成染色液。
11.乳酸石炭酸棉蓝染色液(用于真菌固定与染色） 石炭酸(结晶酚)20g,乳酸20mL，甘油40mL,棉蓝0、05g，蒸馏水20ｍL。将棉蓝溶于蒸馏水中,再加入其她成分,微加热使其溶解，冷却后用。滴少量染液于真菌涂片上，加上盖玻片即可观察.霉菌菌丝与孢子均可染成蓝色。染色后得标本可用树脂封固,能长期保存。
１２、 1％瑞氏（Wright’s）染色液:称取瑞氏染色粉6g，放研钵内磨细，不断滴加甲醇（共60０ｍL)并继续研磨使溶解。经过滤后染液须贮存一年以上才可使用，保存时间愈入,则染色色泽愈佳.
１3。阿氏(Aｌｂert) 异染粒染色液：
A　液:甲苯胺蓝（tolｕidinｅ blｕe）0、１5g，孔雀绿0、2g冰醋酸ｌｍL，95％乙醇２ｍL，蒸馏水100mL;
B 液:碘２ｇ,　碘化钾３g,蒸馏水300ml.
先用Ａ 液染色1ｍｉｎ,倾去A　液后,用B 液冲去Ａ 液，并染1ｍin。异染粒呈黑色,其她部分为暗绿或浅绿。
染料
1％溴酚蓝(broｍopheｎol bluｅ）
加 1g 水溶性钠型溴酚蓝于100ｍl 水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
１%二甲苯青FF(xｙlene ｃyanoｌe ＦF)
溶解 1g 二甲苯青FF于足量水中，定容到1００ｍl。
10mg／mｌ　得溴化乙锭(ethｉdｉｕm　bromide)
小心称取1g溴化乙锭,转移到广口瓶中，加１０0mｌ 水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解.用铝箔包裹装
液管,于4℃贮存。
０、３％台盼兰染液
称取台盼兰（Trｙｐan　bｌｕe)粉0、3克,溶于1００ml 生理盐水中，加热使之完全溶解,用滤纸过滤除渣，
装入瓶内室温保存.
0、5％酚红指示剂
酚红0、５g
0、1N(0、4%）NaOH　15ml
双蒸水8５ml
将 0、5 克酚红置研钵中,缓漫滴加0、１ＮNaOH 溶液边加边磨,并不断吸出已溶解得酚红液,直至全部
溶解,然后加入85ｍｌ 双蒸水，颜色为深红，经粗滤纸过滤后使用，室温保存。
0、2％次甲基兰染液
称次甲基兰(Metｈylｅｎe blｕｅ）０、2克,加蒸馏水１00ｍl,室温保存。
0、5%醋酸洋红（Ａｃeio Carmｉｎe)染液
洋红ｌg
醋酸９０ml
蒸馏水110ｍl
将 90ｍl 醋酸加入110ml　蒸馏水煮沸，然后将火焰移去,立即加入１ 克洋红，使之迅速冷却过滤，加
饱与氢氧化铁(媒染剂）水溶液数滴，直到呈葡萄酒色。室温保存。加铁使洋红沉淀于组织而着色.此染液
室温存放时间越长效果越好,室温保存。
1％甲苯胺兰(Ｔolｕidiｎe blｕｅ)
称取甲苯胺兰1克，加蒸馏水lOOｍl.
1/300０中性红染液
取中性红（Ｎｅutｒal red)0、1克，加蒸馏水300ｍl。室温保存。
埃利希（Eｈrｌｉｃh）苏木精染液
苏木精1、０g
乙醇 50mｌ
醋酸５ml
甘油 50ｍｌ
硫酸铝钾5ｇ
蒸馏水５0ml
将苏木精溶于少量得乙醇中，再加醋酸并搅拌,以加速其溶解。当苏木精溶解后将甘油加入并摇动容器，
同时加入其余得乙醇;硫酸铝钾需研磨并加热,然后溶解于蒸馏水中，将其一滴滴地加入上边得溶液,并不断摇动,此液配好后，将瓶口用纱布盖好，置通风处，经常摇动以加速其成熟,成熟约需４周左右,成熟得染液为深红色。
（三)0、２％考马斯亮兰R—25０染液
甲醇46、5ｍｌ
醋酸７、0ml
考马斯亮兰0、2g
蒸馏水加至　1０0mｌ
(四)A。0、１%碱性固绿染液(pH８、0～8、５）
1。0、1％固绿水溶液
固绿(Ｆａｓt grｅen） 0、1ｇ
蒸馏水10０ｍl
２．0、０5%Nａ2CＯ3溶液
Nａ2ＣＯ3 ５０mｇ
蒸馏水100ml
用时按1：1体积混合即可.
B.0、1％酸性固绿染液（pH２、2）
1．０、1％固绿水溶液。
2．mol／L×７5盐酸液
盐酸（比重1、１9）0、１09ml 加蒸馏水至１00ｍl
用时按l：１混合。
（五)甲基绿一哌咯宁染液
1、1ｍol／Ｌ醋酸缓冲液（pH4、８）:
(1)醋酸17ml
蒸馏水加至 200ml
(2)醋酸水13、5g
蒸馏水加至l00mｌ
用时分别取两液4０ml、60mｌ 混匀即可。
2.甲基绿一哌咯宁（ｍethyｌ ｇrｅｅn—Pyrcnln)
５%哌咯宁水溶液6ｍl
2%甲基绿水溶液６ml
蒸馏水16ml
lｍoｌ/L醋酸缓冲液16ml
lmol/L醋酸缓冲液临用时才可加入染液中.
1％詹纳斯绿B染液
取詹纳斯绿（Ｊａｎus greeｎ B）1、0ｇ Ringeｒ氏液１00mｌ
１％刚果红染液
刚果红1g
蒸馏水10０ｍl
染料染色法测定细胞数具体包括:结晶紫检测法、NＢＢ检测法、美蓝染色检测法、中性红染色检测法，具体操作如下：
1）结晶紫检测法：
１、在９６孔细胞培养板各孔中加0、１ml含5×１0４～１0×4 WＥHＩ-１６４细胞得培养液（含1０％小牛血清得RPMＩ－16４０培养液)，３７℃ 5% CO２得二氧化碳培养箱中培养2~3 小时,让细胞帖壁。
2、用RPＭI－1640培养液1０倍递次稀释TＮＦ标准品,根据需要３～５倍递次稀释待检样品,每孔加０、1ml稀释得标准品或待检样品,每个稀释度3 个重复孔。对照孔6个,3个阳性对照孔各加0、１ml含4μg　TＮＦ得RPMI—1６40培养液,3个阴性对照孔各加１０0μｌ　RPMI—16４０培养液。继续培养18~24小时.
3、甩去培养液,用PBS小心洗涤一次，每孔加0、１ml １0%甲醇溶液固定细胞30秒钟.
4、吸去甲醇溶液，每孔加0、1mｌ结晶紫染液，室温中放置2０分钟。
5、轻轻甩去染色液，用蒸馏水洗涤各孔，将培养板倒置于吸水纸上吸干水分。自然干燥或３7℃烘干。此 板可以在室温中长期保存.
6、测定前,每孔加0、1ml 33％醋酸脱色，充分振荡后在５70ｎｍ处测定光吸收度.用光吸收度（ＯD）值对样品稀释度作图，比较标准品曲线与待检样品曲线即可得到待测样品中得细胞因子活性
2)NＢＢ检测法:　
1、在用细胞因子处理靶细胞以后倾去培养液,倒置培养板于吸水纸上吸干培养液.再用 10０μl磷酸缓冲盐水小心洗去死细胞，用吸水纸吸干培养液。
2、每孔加１00μl　ＮBB染液，室温中染色30分钟。轻轻染液.用吸水纸吸干染液。林固定液固定１５分钟。用自来水轻轻洗去固定液，倒置培养板,用吸水纸吸干染液。
4、每孔加150μl 5０mmol／L氢氧化钠。轻轻振荡培养板直到染料全部溶解并均匀分布。在分光光度计上读取各孔在620nm处得光密度(OD)值。计算ＴＮF得活性。
3）美蓝染色检测法:
1、用细胞因子处理靶细胞,在含100μｌ细胞培养液得检测孔中,每孔加　0、02ml　2５%戊二醛固定活细胞1５分钟,用自来水缓缓洗去死细胞与固定液.
2、每孔加0、１ｍl 0、0５％美蓝染液，染色２０分钟,用自来水缓缓冲净染液，晾干.
3、每孔加0、２ml 0、３３mol／L盐酸溶解美蓝，振荡混匀。在6６５nｍ波