湿法装柱.doc

湿法装柱，干法上样-解析在产品旋蒸时加入1-2勺硅胶粉（看柱子的大小），旋蒸至梨形瓶内的有机相的产物均匀附着在硅胶颗粒上，用小勺将瓶壁上附着的硅胶层刮下来（如果有），粉末保存在此瓶中。用于后续的干法上样。装柱：1. 取出柱层析硅胶粉于一250ml的烧杯中，向其中加入适量定好的洗脱剂（即用相同机型的有机溶剂装柱）用玻璃棒搅拌至均匀。2. 安装好装置后，打开柱子的旋塞，下方放一个三角瓶接着留下来的溶剂。将调好的硅胶-洗脱剂溶液倒入柱子中，倒一部分，就在上方接双联球对体系加压，使柱子压实直到硅胶柱的高度到达整柱的约三分之二（期间用吸管吸取柱子下方锥形瓶内的洗脱剂冲洗一下柱子，最后稍微弹一下柱子使硅胶面水平）。之后继续开着柱子旋塞使硅胶柱上方的洗脱剂液面下降至硅胶面上方2cm，关掉旋塞。加入中性氧化铝，铺一层氧化铝层约2-3cm,加完后用吸管吸取柱子下方锥形瓶内的洗脱剂冲洗一下柱子，将壁上的中性氧化铝粉末冲下来，稍微弹一下柱子使液面水平。开旋塞使液面在氧化铝层上方2cm。 关掉旋塞。 3. 上干样：将得到的硅胶-样品粉末倒在一张纸上，接着转移到硅胶柱上（此时旋塞关闭），用吸管吸取柱子下方锥形瓶内的洗脱剂冲洗一下原先存放样品-硅胶粉末的梨形瓶和柱子（此时旋塞关闭），取出一细铁丝在样品层中小心搅拌，不要破坏样品层下方的中性氧化铝层，将样品层中夹带的空气泡赶出。打开旋塞，使液面下降至被分离样品面上方2cm，再次加入中性氧化铝，使得样品层上方铺一层氧化铝层（约2-3cm），用吸管吸取柱子下方锥形瓶内的洗脱剂冲洗柱子。4. 硅胶柱上还需接一个增容器，就是上下都有接口的球形玻璃，它的作用是可以加大量洗脱剂，一段时间不用担心柱子会干。增容器上还可以连双联球，以对体系加压，调节洗脱的流速。5. 打开旋塞，用三角瓶接流下来的液体，期间应不停点板，看有没有点出现。6. TIPS：如果需要分离提纯的样品量少，那么洗脱开始后就10ml接一次；如果量多的话，20ml/30ml换一次瓶一次都行。