微生物学检验第3版副溶血弧菌.pptx

汤丽霞制作汤丽霞制作实验要求食物中毒的微生物检验掌握副溶血弧菌的生物特性、细菌形态、生化反应及鉴定方法。材料剩余可疑中毒食物、呕剩余可疑中毒食物、呕吐物、粪便吐物、粪便吐物、粪便吐物、粪便中国兰平板中国兰平板血平板血平板双糖培养基双糖培养基半固体培养基半固体培养基弧菌微量生化反应编码鉴定管弧菌微量生化反应编码鉴定管细菌性食物中毒概述细菌性食物中毒概述 中毒发生的原因中毒发生的原因中毒发生的原因中毒发生的原因 （三个环节）（三个环节）（三个环节）（三个环节）1 1 食品被致病菌食品被致病菌食品被致病菌食品被致病菌污染污染污染污染2 2 食品中污染的致病菌有食品中污染的致病菌有食品中污染的致病菌有食品中污染的致病菌有繁殖繁殖繁殖繁殖的机会的机会的机会的机会3 3 食用前未加热或食用前未加热或食用前未加热或食用前未加热或未未未未彻底彻底彻底彻底加热加热加热加热标本采集标本采集可疑食物：可疑食物：可疑食物：可疑食物：采取中毒病人吃过的剩余可疑中毒食物，采取中毒病人吃过的剩余可疑中毒食物，采取中毒病人吃过的剩余可疑中毒食物，采取中毒病人吃过的剩余可疑中毒食物，剩余中毒食物可用灭菌盛装容器盛装。也可采可剩余中毒食物可用灭菌盛装容器盛装。也可采可剩余中毒食物可用灭菌盛装容器盛装。也可采可剩余中毒食物可用灭菌盛装容器盛装。也可采可疑食物接触过的工具、容器涂抹标本。原包装物疑食物接触过的工具、容器涂抹标本。原包装物疑食物接触过的工具、容器涂抹标本。原包装物疑食物接触过的工具、容器涂抹标本。原包装物和半成品或原料均可采样。做微生物检验样品要和半成品或原料均可采样。做微生物检验样品要和半成品或原料均可采样。做微生物检验样品要和半成品或原料均可采样。做微生物检验样品要用灭菌容器，以无菌手续采样。其样品数量为：用灭菌容器，以无菌手续采样。其样品数量为：用灭菌容器，以无菌手续采样。其样品数量为：用灭菌容器，以无菌手续采样。其样品数量为：肉及肉制品肉及肉制品肉及肉制品肉及肉制品:从不同部位取从不同部位取从不同部位取从不同部位取500500克以上；桶装食品从克以上；桶装食品从克以上；桶装食品从克以上；桶装食品从上、中、下部取上、中、下部取上、中、下部取上、中、下部取500500克以上；腌渍食品采取克以上；腌渍食品采取克以上；腌渍食品采取克以上；腌渍食品采取100100200ml200ml液汁，放入另一容器液汁，放入另一容器液汁，放入另一容器液汁，放入另一容器 ；鱼；鱼；鱼；鱼500500克以克以克以克以下，大鱼可从下，大鱼可从下，大鱼可从下，大鱼可从2 23 3个不同部位取样；流体、半流个不同部位取样；流体、半流个不同部位取样；流体、半流个不同部位取样；流体、半流体食品在充分搅拌后取体食品在充分搅拌后取体食品在充分搅拌后取体食品在充分搅拌后取200ml200ml；洗涤水每份洗涤水每份洗涤水每份洗涤水每份100100200ml200ml。标本采集标本采集排泄物：排泄物：排泄物：排泄物：采取何种样品应根据病人的临床表现及采取何种样品应根据病人的临床表现及采取何种样品应根据病人的临床表现及采取何种样品应根据病人的临床表现及初步可疑病因诊断检验项目而定。吐泄物每份初步可疑病因诊断检验项目而定。吐泄物每份初步可疑病因诊断检验项目而定。吐泄物每份初步可疑病因诊断检验项目而定。吐泄物每份取取取取5050100100克，作微生物检验时样品量可为克，作微生物检验时样品量可为克，作微生物检验时样品量可为克，作微生物检验时样品量可为1 15 5克，或从肛门直肠采样；洗胃克，或从肛门直肠采样；洗胃克，或从肛门直肠采样；洗胃克，或从肛门直肠采样；洗胃 液还要加液还要加液还要加液还要加大样品量大样品量大样品量大样品量.标本采集标本采集血液或尿液：怀疑为感染型细菌性食物中毒时，在急性期可采血进行致病菌检验，分离血清，再从恢复期同一中毒病人采血液分离血清，与检出可疑病原菌作血清凝集试验。血样每份25 ml。可疑为化学性食物中毒时（为砷、汞、铅等）应采取病人的尿液送检。尿液每份100200ml；如了解一日排毒量，则应记录24小时排尿量。标本采集标本采集解剖标本：必要时，征得病人家属同意，对中毒死亡者作尸体解剖，采取内脏标本送检，进行病理、毒物及微生物检验。标本采集标本采集带菌者检查：对食品生产经营人员和直接接触食品的人员作可疑带菌检查，可取粪便、鼻咽 腔分泌物以及皮肤涂抹等。标本采集标本采集样品送检样品送检 检样标明样品名称，送检目的、检验项目、送检检样标明样品名称，送检目的、检验项目、送检检样标明样品名称，送检目的、检验项目、送检检样标明样品名称，送检目的、检验项目、送检材料要注明件数、样品量、采样条件、时间、容材料要注明件数、样品量、采样条件、时间、容材料要注明件数、样品量、采样条件、时间、容材料要注明件数、样品量、采样条件、时间、容器灭菌及清洁方法，食物中毒发生情况及可疑原器灭菌及清洁方法，食物中毒发生情况及可疑原器灭菌及清洁方法，食物中毒发生情况及可疑原器灭菌及清洁方法，食物中毒发生情况及可疑原因等。填写送检单。检验室接到检样后，要检查因等。填写送检单。检验室接到检样后，要检查因等。填写送检单。检验室接到检样后，要检查因等。填写送检单。检验室接到检样后，要检查样品及送检资料后签字，注明接到时间，立即进样品及送检资料后签字，注明接到时间，立即进样品及送检资料后签字，注明接到时间，立即进样品及送检资料后签字，注明接到时间，立即进行检验。检验人员根据检验中的发现，可进行送行检验。检验人员根据检验中的发现，可进行送行检验。检验人员根据检验中的发现，可进行送行检验。检验人员根据检验中的发现，可进行送检项目外的项目的检验。检项目外的项目的检验。检项目外的项目的检验。检项目外的项目的检验。细菌性食物中毒：细菌性食物中毒：细菌性食物中毒：细菌性食物中毒：致病菌检验：对中毒食物、病人排泄物、血液进致病菌检验：对中毒食物、病人排泄物、血液进致病菌检验：对中毒食物、病人排泄物、血液进致病菌检验：对中毒食物、病人排泄物、血液进行检验，作为确定诊断的依据，对环境、设备、行检验，作为确定诊断的依据，对环境、设备、行检验，作为确定诊断的依据，对环境、设备、行检验，作为确定诊断的依据，对环境、设备、工器具、包装材料等的检验，也是诊断的参考依工器具、包装材料等的检验，也是诊断的参考依工器具、包装材料等的检验，也是诊断的参考依工器具、包装材料等的检验，也是诊断的参考依据，以确定污染环节、原因条件等。据，以确定污染环节、原因、条件等。据，以确定污染环节、原因、条件等。据，以确定污染环节、原因、条件等。致病菌计数检验：有些食物中毒原因菌的检验，致病菌计数检验：有些食物中毒原因菌的检验，致病菌计数检验：有些食物中毒原因菌的检验，致病菌计数检验：有些食物中毒原因菌的检验，需对可疑中毒食品中的活菌数做测定。需对可疑中毒食品中的活菌数做测定。需对可疑中毒食品中的活菌数做测定。需对可疑中毒食品中的活菌数做测定。如腊样芽如腊样芽如腊样芽如腊样芽胞杆菌，只有食品中含菌量胞杆菌，只有食品中含菌量胞杆菌，只有食品中含菌量胞杆菌，只有食品中含菌量105105个个个个/克时，才能克时，才能克时，才能克时才能引起食物中毒，病原性大肠埃希氏菌也应做引起食物中毒，病原性大肠埃希氏菌也应做引起食物中毒，病原性大肠埃希氏菌也应做引起食物中毒，病原性大肠埃希氏菌也应做“MPNMPN”测定；产气荚膜梭菌的重点是活菌计数及测定；产气荚膜梭菌的重点是活菌计数及测定；产气荚膜梭菌的重点是活菌计数及测定；产气荚膜梭菌的重点是活菌计数及确证试验；葡萄球菌也应做菌确证试验；葡萄球菌也应做菌确证试验；葡萄球菌也应做菌确证试验；葡萄球菌也应做菌 数检验。对国际上数检验。对国际上数检验。对国际上数检验。对国际上尚未被公认的食物中毒病原菌如变形杆菌属，更尚未被公认的食物中毒病原菌如变形杆菌属，更尚未被公认的食物中毒病原菌如变形杆菌属，更尚未被公认的食物中毒病原菌如变形杆菌属，更需要做计数检验。需要做计数检验。需要做计数检验。需要做计数检验。标本采集标本采集样品送检样品送检 病例2010年年10月月16日下午日下午4点点10分，右江民族分，右江民族医学院附属医院急诊科接到右江矿务局出诊医学院附属医院急诊科接到右江矿务局出诊电话，现有电话，现有60多人出现腹痛、呕吐、腹泻及多人出现腹痛、呕吐、腹泻及水样便为主要症状水样便为主要症状，要求我院马上出诊，对，要求我院马上出诊，对病人进行就治。病人进行就治。经了解病人在食堂开饭，吃了大量的豆芽及经了解病人在食堂开饭，吃了大量的豆芽及冻鱼。冻鱼。我院的治疗方案：洗胃，大量输液，重者血我院的治疗方案：洗胃，大量输液，重者血透。透。第一天实验操作食物中毒标本血平板、SS平板/人老师发下菌种：1、观察细菌形态2、氧化酶试验3、双糖4、半固体5、弧菌微量生化反应管2人形态与染色形态与染色 1 1、革兰氏阴性无芽胞多形态杆菌，单端鞭毛、两、革兰氏阴性无芽胞多形态杆菌，单端鞭毛、两、革兰氏阴性无芽胞多形态杆菌，单端鞭毛、两、革兰氏阴性无芽胞多形态杆菌，单端鞭毛、两端浓染。端浓染。端浓染。端浓染。杆状、棒状、甚至球状、丝状等杆状、棒状、甚至球状、丝状等 培养特性：培养特性：1 1、需氧或兼性厌氧：生长最好、需氧或兼性厌氧：生长最好2 2、在在2 2%NaCL%NaCL培培养养基基中中生生长长最最好好，无无盐盐或食盐或食盐10%10%不能生长。不能生长。3 3、最适温度、最适温度3636，PH7.5PH7.57.87.8（7.77.7）4 4、在在专专用用选选择择性性平平板板上上，菌菌落落呈呈圆圆形形凸凸起起，混混浊浊不不透透明明，表表面面光光滑滑，较较湿湿润润，边边缘缘不整齐。不整齐。5 5、血平板：可见溶血环。、血平板：可见溶血环。（三）生化特性（三）生化特性 1 1、分解、分解GLUGLU产酸不产气，不分解乳糖，蔗糖。产酸不产气，不分解乳糖，蔗糖。2 2、H H2 2S S（）、（）、V-PV-P（）、靛基质（）、（）、靛基质（）、精氨酸（）精氨酸（）3 3、甲基红（）、赖氨酸（）、溶血、甲基红（）、赖氨酸（）、溶血/-/-细菌运动试验在新鲜的标本中，细菌游动活跃，呈流星样穿梭。取新鲜的标本，压滴法观察细菌运动情况。三、检验操作要点三、检验操作要点 采样采样样品处理样品处理增菌培养增菌培养分离培分离培养养3.5%氯化钠双糖铁培养基氯化钠双糖铁培养基嗜盐性嗜盐性试验试验生化鉴定生化鉴定动物试验动物试验结果报告结果报告1 1、采样：、采样：患者粪便、呕吐物、可凝食品。患者粪便、呕吐物、可凝食品。从海产品的体表面，肠内容物，鳃等取样从海产品的体表面，肠内容物，鳃等取样 包装物，炊具用具。包装物，炊具用具。快，不宜低温保存。快，不宜低温保存。2 2、增增菌菌培培养养：NaclNacl结结晶晶紫紫增增菌菌液液，37 37 8 81616小时。小时。3 3 3 3、分离培养：、分离培养：、分离培养：、分离培养：NaclNaclNaclNacl蔗糖蔗糖蔗糖蔗糖平板：圆形，半透明或不透明，无粘性，平板：圆形，半透明或不透明，无粘性，平板：圆形，半透明或不透明，无粘性，平板：圆形，半透明或不透明，无粘性，(绿绿绿绿)兰色，兰色，兰色，兰色，直径直径直径直径2 2 2 24mm4mm4mm4mm 嗜嗜嗜嗜盐盐盐盐选选选选择择择择性性性性平平平平板板板板：直直直直径径径径2.5mm2.5mm2.5mm2.5mm，圆圆圆圆整整整整或或或或不不不不齐齐齐齐，隆隆隆隆起起起起混混混混浊，无粘性，无色，湿润。浊，无粘性，无色，湿润。浊，无粘性，无色，湿润。浊，无粘性，无色，湿润。4 4 4 4、3.5%Nacl-TSI 3.5%Nacl-TSI 3.5%Nacl-TSI 3.5%Nacl-TSI 培养培养培养培养37 2437 2437 2437 24小时小时小时小时5 5 5 5、镜镜镜镜检检检检：应应应应为为为为革革革革兰兰兰兰氏氏氏氏阴阴阴阴性性性性，无无无无芽芽芽芽胞胞胞胞多多多多形形形形态态态态，两两两两端端端端浓浓浓浓染。染。染。染。6 6、嗜盐性试验：、嗜盐性试验：将可疑培养物接种于不同盐浓度的盐胨水将可疑培养物接种于不同盐浓度的盐胨水中，中，37 2437 24小时，观查生长情况。盐含小时，观查生长情况。盐含量量0 0、3 3、7 7、9 9、11%11%，在在3 37%7%生长良好。生长良好。11副溶血弧菌的生化特性葡V葡磷 I蛋水 蔗甘阿肌赖赖对精精对0%3%6%8%10%/A液B液靛靛基基质质实验报告实验题目实验目的实验过程（接种平板、细菌菌落形态、细菌形态、生化项目及结果）最后报告思考题：1 1、副溶血性弧菌的形态与染色有何特点。、副溶血性弧菌的形态与染色有何特点。2 2、副副溶溶血血性性弧弧菌菌的的生生化化特特性性中中最最有有特特点点的的是是哪哪个个项项目目，如如何何利利用用这这个个项项目目，诊诊断断某某细菌是否是副溶血性弧菌。细菌是否是副溶血性弧菌。