微生物对化学农药的降解.pptx

微生物对化学农药的降解微生物对化学农药的降解报告人：张莉莉 农药降解研究领域日趋活跃,研究者们相继对除草剂、杀虫剂、杀菌剂等的微生物降解进行了深入细致的研究。通过近几十年的研究,已经确定了微生物在土壤和水环境的农药降解中起主要作用。研究者分离到一批能降解或转化某种农药的微生物类群,逐步弄清了微生物降解农药的主要作用方式及降解机制,以及各类化学农药的微生物降解途径。降解化学农药的微生物类别微生物降解农药的途径和机理影响微生物降解农药的因素农药微生物降解的新技术和新方法存在的问题及展望降解农药的微生物类别降解农药的微生物类别 已报道的降解农药的微生物有细菌、真菌、放线菌、藻类等，大多数来自土壤微生物类群。细菌由于其生化上的多种适用能力以及容易诱发突变菌株从而占了主要的位置，其中假单胞菌属是最活跃的菌株，对多种农药有分解作用。下图列举了主要的降解农药的微生物类别。降解农药的微生物类别微生物降解农药的途径与机理微生物降解农药的途径与机理 目前，对于微生物降解农药的研究主要集中于细菌。细菌降解农药的本质是酶促反应，即化合物通过一定的方式进入细菌体内，然后在各种酶作用下，经过一系列的生理生化反应，最终将农药完全降解或分解成分子量较小的无毒或毒性较小化合物的过程。如假单胞菌ADP菌株以莠去津为唯一碳源，有3种酶参与了降解莠去津的前几步反应，首先是A tzA酶催化莠去津水解脱氯的反应，得到无毒的羟基莠去津，该酶是莠去津生物降解的关键酶；其次是A tzB酶催化羟基莠去津脱氯氨基反应，产生N-异丙基氰尿酰胺；第3步是A tzC酶催化忖异丙基氰尿酰胺生成氰尿酸和异丙胺；最终莠去津被降解为CO2和NH3。由于降解酶往往比产生该类酶的微生物菌体更能忍受异常环境条件，酶的降解效率远高于微生物本身，所以利用降解酶可以作为净化农药污染的有效手段。但是，降解酶在土壤中容易受非生物变性、土壤吸附等作用而失活，难以长时间保持降解活性，并且酶在土壤中的移动性差等因素，限制了降解酶在实际中的应用。试验已经证明，编码合成这些酶系的基因多数在质粒上，如2，4-D的生物降解，即由质粒携带的基因所控制，通过质粒上的基因与染色体上的基因的共同作用，在微生物体内把农药降解。目前对于各种杀虫剂的微生物降解途径已比较清楚，下表列举了几种主要的降解途径。影响微生物降解农药的因素影响微生物降解农药的因素u 微生物自身的影响u 农药结构的影响u 环境因素的影响 微生物自身的影响微生物自身的影响 微生物的种类、代谢活性、适应性等都直接影响到对农药的降解与转化。已经证明，不同的微生物种类或同一种类的不同菌株对同一有机底物或有毒金属的反应都不同。微生物具有较强的适应和被驯化的能力，通过一定的适应过程，新的化合物能诱导微生物产生相应的酶系来降解，或通过基因突变等建立新的酶系来降解。微生物降解本身的功能特性和变化也是最重要的因素。农药结构的影响农药结构的影响 农药化合物的分子量、空间结构、取代基的种类及数量等都影响到微生物对其降解的难易程度。不同化学结构的农药，生物降解性由易到难依次为脂肪酸类、有机磷酸盐类、长链苯氧基脂肪酸类、短链苯氧基脂肪酸类、单基取代苯氧基脂肪酸类、三基取代苯氧基脂肪酸类、二硝基苯类、氯代烃类。一般情况下，高分子化合物比低分子量化合物难降解，聚合物、复合物更能抗生物降解；空间结构简单的比结构复杂的容易降解；易溶于水的农药比难溶于水的农药易降解。微生物只能降解特定结构的农药，所以农药结构决定降解该农药的微生物种类，只有对污染环境农药的结构充分了解，才能有效地对其进行生物降解。环境因素的影响环境因素的影响 环境因素包括温度、酸碱度、营养、氧、底物浓度、表面活性剂等。农药的生物降解是一个复杂的过程，影响因素很多。近年来，人们越来越多地关注到环境对农药的生物降解的影响，取得了很多成果，在今后的研究中，尤其在农药生物降解实际应用中，环境因素将是人们必须考虑的因素。农药微生物降解的新技术和新方法农药微生物降解的新技术和新方法 固定化微生物技术在农药降解中的应用农药降解酶制剂的研制及应用降解基因的克隆、表达及基因工程菌的构建固定化微生物技术在农药降解中的应用固定化微生物技术在农药降解中的应用 自20世纪70年代后期以来，固定化微生物的研究迅速发展，其应用范围很广。其中，应用固定化微生物技术降解污水中的农药，成为一个新的研究领域。Jiyeon等利用海藻酸钙固定微生物，对蝇毒磷的降解进行试验，取得了满意的结果，其降解能力优于未固定化微生物。由于固定化细胞对底物和氧气扩散有阻碍，使细胞酶活性降低，通过基因工程手段制备高效工程菌是解决该问题的关键。闫艳春等克隆抗性库蚊酯酶基因并在大肠杆菌中高效表达，用海藻酸钠包埋固定化工程菌，并处理有机氯农药三氯杀虫酯和菊酯类农药溴氰菊酯，结果表明，固定化工程菌能高效降解这两种农药。农药降解酶制剂的研制及应用农药降解酶制剂的研制及应用 如果用微生物产生的酶来处理农药残留而不是直接使用微生物菌株，那么对环境造成威胁或潜在威胁的风险即可降低。研究表明，一些酶比产生这类酶的微生物菌体更能忍受变异的环境条件，如对硫磷水解酶可耐受高达10的盐浓度和50的温度，而产生这种酶的假单胞菌在这种条件下却不能生长。固化酶对环境条件有较宽的忍受范围，可用于农药及类似结构的环境污染物的净化。用降解酶净化农药具有良好的效果，能否应用取决于稳定性及固定化技术的实用性，降解酶的获得可通过生物技术对降解农药的基因进行克隆、基因的高效表达来实现。降解基因的克隆、表达及基因工程菌的构建降解基因的克隆、表达及基因工程菌的构建 分子生物学的迅猛发展为农药降解菌从实验室走向实际应用提供了可能。人们寄希望通过基因工程技术将农药降解酶基因或降解质粒克隆到合适的宿主菌中并使其高效表达，构建“高效农药降解菌”，为农药的微生物降解开辟一条新途径。这一领域已成为当今环境生物技术的研究热点之一，也是今后工作的重点。存在的问题及展望 目前已相继分离和鉴定了各种降解农药的微生物菌株(包括细菌、真菌等)，但是利用微生物进行生物修复的实际应用却往往由于其降解效率较低而受到影响。农药微生物降解的问题主要有以下几方面：(1)单一菌株的纯培养问题；(2)环境条件对微生物降解农药的影响；(3)受农药污染的环境及食品不能进行有效的处理；(4)微生物与被降解物接触的难易程度；(5)微生物的适应性问题。因此，农药降解菌从实验室到实际应用还有一段路要走。微生物降解农药的研究方向包括：高效农药降解工程菌的开发、混合菌的培养、降解菌的固定化、白腐真菌降解农药的研究和农药生物降解的模型定量化研究。近年来，伴随着基因工程和分子生物学研究技术的发展，科研工作者开始把重心转移到高效工程菌的构建，采用基因重组技术，将表达高效降解农药的酶的基因构建到载体中，经转化获得工程菌，以期提高起降解作用的特定蛋白质或酶的表达水平，从而提高降解效率，既能克服一些酶在环境中不能稳定存在的问题，又保持了酶的高活性。随着基因工程进一步发展，微生物在农药降解方面的潜力会得到更充分的体现。