1、微生物与免疫学试验（六）要求讲解：肠道杆菌、霍乱弧菌、3种厌氧菌示教片：肠道杆菌、霍乱弧菌、3种厌氧菌示教平板：SS平板（肠道致病均和非致病均各一个）、双糖铁培养基（大肠、痢疾、伤寒、变形）、炭疽卷发样菌落；其它示教：小生化反应（大肠、痢疾、伤寒、变形）操作：肥达反应（注意标签贴试管上，不要贴到架子上）录像：肠道杆菌操作：肥达反应（试管凝集反应）器材：试管6支/人，试管架1个/2人，吸管1支/人，标签1个/人已知：伤寒H抗原、O抗原 （4人/组）甲型副伤寒H抗原 乙型副伤寒H抗原待检：病人血清（1：10稀释）倍比稀释法 1 2 3 4 5 6生理盐水 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0
2、.5血清 0.5（吹打）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5（弃）菌液 0.5ml/管，从第6 1管加，振匀水浴43度，2h最终血清 1：40 1：80 1：160 1：320 1：640 对照稀释度凝集强弱效价*吸管 桶，试管 锅,标签贴在试管上。结果判断以出现 凝集的血清最高稀释倍数为该血清抗体效价O 达到1：80，H达到1：160 H甲（PA）或H乙（PB）达到1：80或以上有诊断意义结合当地流行病学史、病程和抗体消长的意义进行判断。第第6管管 均匀混浊均匀混浊 少量凝集少量凝集 细菌部分沉于管底，液体半澄清，凝集细菌部分沉于管底，液体半澄清，凝集 呈颗粒状呈颗粒状 大部分凝集，液体轻
3、度混浊，凝集块较大大部分凝集，液体轻度混浊，凝集块较大 全部凝集，液体澄清，大片凝集块全部凝集，液体澄清，大片凝集块OO、HH 正常值正常值正常值正常值 感染可能性大感染可能性大感染可能性大感染可能性大OO、HH 低低低低 感染可能性小感染可能性小感染可能性小感染可能性小 OO 不高不高不高不高 HH 高高高高预防接种或非特异预防接种或非特异预防接种或非特异预防接种或非特异性回忆反应性回忆反应性回忆反应性回忆反应 OO 高高高高 HH 不高不高不高不高感染早期或交叉反感染早期或交叉反感染早期或交叉反感染早期或交叉反应应应应类别类别 凝集效价凝集效价 意义意义肠道杆菌的鉴定大肠杆菌伤寒杆菌变形杆
4、菌痢疾杆菌SS培养基胆盐胆盐枸橼酸盐枸橼酸盐煌绿煌绿乳糖乳糖蛋白胨蛋白胨中性红中性红抑制杂菌生长抑制杂菌生长被非致病菌分解产酸被非致病菌分解产酸被致病菌分解产碱被致病菌分解产碱酸：红酸：红 碱：黄碱：黄Shigella-Salmonella medium菌落红色乳糖发酵阳性，非致病菌菌落无色乳糖发酵阴性，致病菌双糖铁培养基下层下层上层上层葡萄糖葡萄糖半固体半固体酚红酚红乳糖乳糖硫酸亚铁硫酸亚铁生化反应表葡乳麦甘蔗H2S尿素靛大肠-痢疾-伤寒-/+-变形-霍乱弧菌炭疽杆菌炭疽杆菌致病菌中致病菌中最大的最大的G粗粗大杆菌大杆菌,两端平切、排两端平切、排列呈列呈竹节状竹节状；有荚膜，；有荚膜，芽胞芽
5、胞在有氧条件下形成，在有氧条件下形成，呈椭圆形，位于菌体中呈椭圆形，位于菌体中央央培养培养:3035，在普通琼脂培养基上形成灰白色粗糙型，在普通琼脂培养基上形成灰白色粗糙型 菌落，边缘不整齐，在低倍镜下观察菌落，边缘不整齐，在低倍镜下观察边缘呈卷发状边缘呈卷发状 炭疽杆菌培养基炭疽杆菌培养基厌氧菌1、破伤风：、破伤风：G；芽胞位于菌体顶端，大于菌体，芽胞位于菌体顶端，大于菌体，使细菌呈鼓槌状；使细菌呈鼓槌状；菌体细长，有周身鞭毛菌体细长，有周身鞭毛厌氧血平板上的羽毛状菌落厌氧血平板上的羽毛状菌落庖肉培养基庖肉培养基破伤风梭菌培养基破伤风梭菌培养基破伤风痉挛2、产气荚膜梭菌：、产气荚膜梭菌：两端
6、几乎平切的两端几乎平切的G粗大杆菌；粗大杆菌；芽胞位于芽胞位于 次极端，呈椭圆形，不大于菌体；次极端，呈椭圆形，不大于菌体；在体内在体内有明有明 显的荚膜显的荚膜；无鞭毛；无鞭毛生化反应：生化反应：血琼脂平板上，血琼脂平板上，双层溶血环双层溶血环（、毒素），毒素），“靶样溶血靶样溶血”血平板（双层溶血环）血平板（双层溶血环）代谢活跃代谢活跃 高层琼脂断裂试验高层琼脂断裂试验 庖肉培养基：庖肉培养基：分解肉渣中的糖类，产酸产气，肉渣淡红色分解肉渣中的糖类，产酸产气，肉渣淡红色 牛乳培养基：牛乳培养基：可出现可出现“汹涌发酵汹涌发酵”（stormy stormy fermentationfermentation）庖肉培养基庖肉培养基牛乳培养基汹涌发酵牛乳培养基汹涌发酵3、肉毒梭菌：、肉毒梭菌：G；芽胞呈椭圆形，粗于菌体，位于次极芽胞呈椭圆形，粗于菌体，位于次极 端，使细胞呈汤匙状或网球拍状；端，使细胞呈汤匙状或网球拍状；有鞭毛，无荚膜。有鞭毛，无荚膜。肉毒梭菌肉毒梭菌
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