1、化学与生化学与生命科学学命科学学院院水中细菌总数的测定及水中细菌总数的测定及大肠菌群的简易检测大肠菌群的简易检测实验八实验八化学与生化学与生命科学学命科学学院院了解水质状况与细菌数量的联系。了解水中细菌总数的测定依据及应用，掌握水中细菌总数测定的方法及操作。了解饮水健康与水中大肠菌群的联系，掌握水中大肠菌群简易检测的方法及操作。实验目的实验目的化学与生化学与生命科学学命科学学院院实验原理实验原理水中细菌总数可以说明水被有机物污染的程度，细菌数越多，有机物质含量越大。水中细菌种类繁多，生长条件各异。在一种培养条件下满足所有细菌生长是不可能的。通常采用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，测得水中细菌总数的近似
2、值。水中病原菌（如沙门氏菌、志贺氏菌等）多数源于病人和病畜的粪便，病原菌数量少且检测过程复杂。大肠菌群作为肠道内的正常菌，在粪便中数量大，且体外的存活时间与肠道致病菌相近，因此，一般采用测定大肠菌群数量来判断水源是否被粪便污染，并推测是否受肠道病原菌污染的可能。化学与生化学与生命科学学命科学学院院实验原理实验原理大肠菌群并非细菌学分类命名，不代表某一种或某一属细菌。是卫生细菌检测领域用语，指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌。大肠菌群是一群好氧和兼性厌氧、无芽孢的革兰氏阴性杆菌，在乳糖培养基中经37培养2448h，能产酸产气。主要包括埃希氏菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属和柠檬酸杆菌属，这
3、类菌是温血动物肠道内的正常菌群，随粪便污染水源。测定大肠菌群的方法有多管发酵法、滤膜法和各种简便检测盒。国家标准中采用的多管发酵法分为三步：初发酵试验、平板分离培养和复发酵试验。化学与生化学与生命科学学命科学学院院实验原理实验原理化学与生化学与生命科学学命科学学院院实验原理实验原理伊红美兰琼脂平板含有伊红与美兰染料，大肠菌群发酵乳糖造成酸性环境是，该两种种染料即可结合成复合物，使大肠菌群产生带核心的、有金属光泽的深紫色菌落。滤膜法是将水样通过一定孔径的滤膜，然后将滤膜放在适宜的培养基上进行培养计数。化学与生化学与生命科学学命科学学院院实验原理实验原理化学与生化学与生命科学学命科学学院院实验原理
4、实验原理我国1985年起实施的饮用水卫生标准（GB5749-85)规定：1毫升自来水中的细菌总数不得超过100个，每升自来水中肠道菌群不得超过3个。化学与生化学与生命科学学命科学学院院实验内容实验内容一、自来水中细菌总数的测定一、自来水中细菌总数的测定1、采水样：开放水龙头使水流5min，以无菌三角瓶接取水样，迅速测定。2、用无菌吸管分别吸取1ml水样与两个无菌平皿中，分别倒入融化并冷却至45左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，立即旋转混匀。3、另取一无菌培养皿，倾注牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，作为空白对照。4、凝固后倒置于37培养箱中培养24h后计数，取两皿平均数作为1ml水样中的细菌总数。化学与生化
5、学与生命科学学命科学学院院实验内容实验内容注意事项：自来水取样时避免取样中造成污染。自来水中含有余氯，可能对细菌有杀灭和抑制作用，会造成结果偏低或假阴性，可以加入少量硫代硫酸钠，与氯发生反应。操作过程要迅速，避免杂菌污染。倾注培养基时温度应冷却至45，避免烫死细菌。化学与生化学与生命科学学命科学学院院实验内容实验内容二、池水中大肠菌群的简易检测二、池水中大肠菌群的简易检测1、采取水样：取学校“鉴湖”水面1015cm，离岸边5cm的水样，立即测试。2、稀释水样：取3支无菌试管，分别加9ml无菌水，加1ml水样到第一管内摇匀，再自第一管中取1ml至第二管中，如此稀释到第4管。3、吸取第三、第四管稀
6、释液各1ml至无菌平皿中，每一个稀释度重复两皿。4、各倾注已经融化并冷却至45 左右的伊红美兰琼脂培养基，立即摇匀。5、凝固后倒置于37 培养箱中培养24h后计数。化学与生化学与生命科学学命科学学院院实验要求实验要求1、本次实验四人一组。通过实验结果分析实验室自来水样是否符合标准。2、每组完成后清洗10个培养皿，包1包培养皿、1包（5支1ml）移液管、1包试管（5支）。3、每组卫生区域打扫干净后才能离开。4、值日生配制牛肉膏蛋白胨琼脂培养基500ml并分装在锥形瓶内。化学与生化学与生命科学学命科学学院院检测自来水的细菌总数时为什么要做空白对照试验？如果空白对照上有少数几个菌落说明什么？很多菌落又说明什么？思考题思考题
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