免疫学实验实验一免疫血清制备.pptx

实验一 免疫血清的制备一、目的要求一、目的要求1、熟悉佐剂的制备和动物免疫的常用方法、熟悉佐剂的制备和动物免疫的常用方法2、制备兔抗牛血清白蛋白（、制备兔抗牛血清白蛋白（BSA）的免疫血清）的免疫血清二、实验原理二、实验原理免疫血清的制备是一项常用的免疫学实验技术。为制备抗免疫血清的制备是一项常用的免疫学实验技术。为制备抗体通常将适当的抗原物质注入动物体内，经过一定时间，体通常将适当的抗原物质注入动物体内，经过一定时间，动物血清中可出现大量特异性抗体，这种含抗体的血清称动物血清中可出现大量特异性抗体，这种含抗体的血清称为免疫血清。为免疫血清。高效价、高特异性的免疫血清可作为免疫学诊断的试剂高效价、高特异性的免疫血清可作为免疫学诊断的试剂(如用于制备免疫标记抗体等如用于制备免疫标记抗体等)，也可供特异性免疫治疗用。，也可供特异性免疫治疗用。三、实验材料三、实验材料1.1.动物：小白鼠动物：小白鼠8 8周左右体重周左右体重1818克，克，2-3kg2-3kg的健康雄家兔或的健康雄家兔或未怀孕的雌家兔未怀孕的雌家兔2.2.抗原：小牛血清白蛋白（抗原：小牛血清白蛋白（BSABSA）3.3.佐剂：完全福氏佐剂佐剂：完全福氏佐剂 (抗原，羊毛脂抗原，羊毛脂,石蜡油石蜡油,卡价苗卡价苗75mg75mgml)ml)4.4.器材：一次性注射器，碘酒酒精棉球，塑料管器材：一次性注射器，碘酒酒精棉球，塑料管,镊子等镊子等四、实验的步骤与方法四、实验的步骤与方法1 1、抗原制备、抗原制备1ml BSA1ml完全福氏佐剂搅拌（注射器交替推动）完全乳化滴于水中经久不滴于水中经久不散散抗原抗原1 羊毛脂羊毛脂5 石蜡油石蜡油1 卡价苗卡价苗0.5ml2 2、动物免疫、动物免疫针头针头使用使用9#9#12#12#一次注入的剂量一次注入的剂量0.5mg0.5mgkg接种的部位接种的部位-将完全乳化的抗原注射到兔子的双后足垫和背部将完全乳化的抗原注射到兔子的双后足垫和背部皮下皮下4-64-6点，每处约点，每处约2 20-0-5 50 0 ulul（接种处先用碘酒、酒精消毒）（接种处先用碘酒、酒精消毒）第一次相隔第一次相隔2 2周，以后相隔周，以后相隔1 1周，免疫周，免疫3-43-4次。次。3 3、采血和分离血清：心脏采血法、采血和分离血清：心脏采血法 家兔仰面，四肢由助手抓住四肢固定。家兔仰面，四肢由助手抓住四肢固定。剪去左胸部兔毛，消毒皮肤。剪去左胸部兔毛，消毒皮肤。用左姆指摸到胸骨剑突处，食指及中指放在右胸处轻轻向左用左姆指摸到胸骨剑突处，食指及中指放在右胸处轻轻向左推，使心脏固定于左胸侧位置。然后，以左拇指触摸心脏搏推，使心脏固定于左胸侧位置。然后，以左拇指触摸心脏搏动最强的部位。动最强的部位。用用2-102-10 mlml注射器注射器(连接连接9 9号针头号针头)，倾针，倾针4545角度，对准心搏角度，对准心搏最强处刺入心脏抽血。最强处刺入心脏抽血。将抽取的血液立即注入无菌三角烧瓶中或无菌离心管中，待将抽取的血液立即注入无菌三角烧瓶中或无菌离心管中，待凝固后将三角烧瓶的血置凝固后将三角烧瓶的血置3737温箱温箱1 1小时，再置小时，再置44冰箱冰箱3 34 4小时或直接过夜。然后用毛细滴管吸取血清，如还有红细胞小时或直接过夜。然后用毛细滴管吸取血清，如还有红细胞则离心用则离心用3000rpm3000rpm离心离心1515分钟，取上清液。分钟，取上清液。抗血清保存有三种方法：抗血清保存有三种方法：第一种第一种 是是44保存，将抗血清除菌后，可以液体状态保存于普通冰箱，存保存，将抗血清除菌后，可以液体状态保存于普通冰箱，存放放3 3个月到半年，效价高时，一年之内不会影响使用。如需要长期保存个月到半年，效价高时，一年之内不会影响使用。如需要长期保存时要加入时要加入0.10.10.20.2NaN3NaN3以防腐和加入半量的甘油保存期延长。以防腐和加入半量的甘油保存期延长。第二种第二种 是低温保存，放在是低温保存，放在20208080，一般保存，一般保存5 5年效价不会有明显下年效价不会有明显下降，但应防止反复冻融，反复冻融几次则效价明显降低。因此低温保降，但应防止反复冻融，反复冻融几次则效价明显降低。因此低温保存应用小包装，以备取出后在短期内用完。存应用小包装，以备取出后在短期内用完。第三种第三种 是冰冻干燥，最后制品内水分不应高于是冰冻干燥，最后制品内水分不应高于0.20.2，封装后可以长期保，封装后可以长期保存，一般在冰箱中存，一般在冰箱中5 51010年内效价不会明显降低年内效价不会明显降低。抗血清的鉴定抗血清的鉴定动物血采集后分离出血清，此抗血清在保存或应用前，必动物血采集后分离出血清，此抗血清在保存或应用前，必须作效价和特异性鉴定。须作效价和特异性鉴定。