乳制品中硫氰酸根的测定标准草案离子色谱法.doc

原料乳及乳制品中硫氰酸根的检测
Determination of thiocyanate ion in raw milk and dairy products

国家食品质量安全监督检查中心
（北京海淀区产品质量监督检查所）

前 言
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由 提出。
本标准由 归口。

原料乳及乳制品中硫氰酸根的检测-离子色谱法
1 范围
本标准规定了离子色谱—电导检测器（或紫外检测器）检测原料乳及乳制品中硫氰酸根的方法。
本标准合用于原料乳及乳制品中硫氰酸根的测定。
本标准方法的定量限：液态乳2.0mg/kg，乳粉和其他乳制品10.0mg/kg。
2 规范性引用文献
下列文献中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文献，其随后所有的修改单（不涉及勘误的内容）或修订版均不合用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文献的最新版本。凡是不注日期的引用文献，其最新版本合用于本标准。
3 原理
样品经水提硫氰酸根后，乙腈沉淀蛋白，过脱脂柱净化，进阴离子分析柱，通过克制器后进入电导检测器或紫外检测器进行检测，外标法定量。
4 试剂
在分析中所使用试剂按下述说明，用水为GB/T 6682-2023中规定的一级水。
4.1 乙腈（色谱纯）。
4.2 硫氰酸钠（优级纯）。
4.3 氢氧化钾（分析纯）。
4.4 45 mmol/L氢氧化钾溶液：称取2.52 g氢氧化钾用水定容至1000 mL。
4.5 70 mmol/L氢氧化钾溶液：称取3.92g氢氧化钾用水定容至1000 mL。
4.6 标准储备液：称取硫氰酸钠0.1397g，用水定容至100 mL，硫氰酸根离子含量为1000mg/L，贮存于4℃冰箱中，有效期3个月。
4.7 标准工作液：准确吸取硫氰酸根离子的标准储备液（4.5）1.0 mL于1000 mL 的容量瓶中，用水定容至刻度，硫氰酸根离子含量为1.0mg/L，贮存于4℃冰箱中，有效期3个月。
4.8 标准系列：准确吸取硫氰酸根离子的标准储备液（4.6）0.0、4.0、8.0、20.0、40.0 mL于一组100 mL 的容量瓶中，用水定容至刻度，配得硫氰酸根离子浓度分别为0.0、0.040、0.080、0.200、0.400μg/ mL的标准溶液。使用时现配。
4.9 滤膜：0.45 μm，水相。
4.10 聚二乙烯基苯聚合物反相填料柱（或等效的脱脂柱，或商品化RP小柱）：250mg/3mL。
4.11 海砂（分析纯）。
5 仪器
5.1 离子色谱仪（IC）：带电导检测器和克制器（或紫外检测器），可进行二步梯度淋洗。
5.2 分析天平：感量0.01 g和0.0001 g。
5.3 冰箱：带4℃冷藏。
5.4 超声波清洗器。
6 分析环节
6.1样品前解决
称取乳粉样品1.0g于10 mL比色管中，加水4mL使其充足溶解混匀，再加入乙腈定容至刻度，超声萃取10min后，于4℃冰箱中静置10min以沉淀蛋白。准确吸取上清液1mL，用水定容至10mL，将稀释后的溶液通过RP柱和0.45mm滤膜后，滤液待上机分析。
称取4.0g液体乳于10 mL比色管中，再加入乙腈定容至刻度，超声萃取10min后，于4℃冰箱中静置10min以沉淀蛋白。准确吸取上清液1mL，用水定容至10mL，将稀释后的溶液通过RP柱和0.45mm滤膜后，滤液待上机分析。
称取其他乳制品（奶酪、奶油等）0.50g，加入2g海砂研磨均匀，转移至10 mL比色管中，加水4mL使其充足溶解混匀，再加入6mL乙腈振荡混匀，超声萃取10min后，于4℃冰箱中静置10min以沉淀蛋白。准确吸取上清液1mL，用水定容至10mL，将稀释后的溶液通过RP柱和0.45mm滤膜后，滤液待上机分析。
6.2 离子色谱分离条件
离子色谱柱参数：阴离子保护柱 IonPac AG 16 (50 mm×4 mm)或相称者；阴离子分析柱IonPac AS 16 (250 mm×4 mm)或相称者
流速：1.0mL/min
电导检测器：配4mm的阴离子克制器，外接水克制模式
紫外检测器：波长220nm
进样量：100 µL
淋洗液：氢氧化钾溶液梯度洗脱
淋洗液梯度参考程序：
时间/min
氢氧化钾浓度/(mmol/L)
0.0
45.0
13.0
45.0
13.1
70.0
18.0
70.0
18.1
45.0
23.0
45.0
 6.3 测定
取滤液和标准工作液各100 µL(或相同体积)分别注入离子色谱仪，电导检测器或紫外检测器进行检测。以其标准溶液峰的保存时间定性，以其峰面积求出样液中被测物质的含量，供计算。
7 结果计算
试样中硫氰酸根的含量由色谱数据解决软件或按式（1）计算获得：

C × V × f
X= 。。。。。。。。。。。（1）
m

式中：
X — 试样中硫氰酸根的含量，单位为毫克每公斤，mg/kg；
C— 试样中硫氰酸根峰面积相应的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；
V —试样定容体积，单位为毫升（mL）；
m — 试样的量，单位为克（g）；
f — 稀释倍数。
计算结果保存三位有效数字。
8、 精密度
在反复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％。

附 录 A
（资料性附录）
硫氰酸根离子标准样品色谱图

图A.1 0.1mg/L硫氰酸根离子标准溶液色谱图（电导检测器）

图A.2 0.1mg/L硫氰酸根离子标准溶液色谱图（紫外检测器）