液相色谱分析条件的选择.pptx

18:16:31第第四四章章高效液相色谱法和高效液相色谱法和超临界流体色谱法超临界流体色谱法4.5.1 一般条件选择一般条件选择4.5.2 分离类型的选分离类型的选择择4.5.3 流动相的选择流动相的选择第五节第五节液相色谱分析条件液相色谱分析条件的选择的选择choice of analytical condition for HPLCHigh performance liquid chromatography and Supercritical fluid chromatography 18:16:374.5.1 一般条件的选择一般条件的选择1.1.影响分离的因素与提高柱效的途径影响分离的因素与提高柱效的途径 液体的扩散系数仅为气体的万分之一，则在高效液相色谱中,速率方程中的分子扩散项B/u较小，可忽略不计，即 H=A+C u 液体的黏度比气体大100倍，密度为气体的1000倍，故降低传质阻力是提高柱效主要途径。载体粒度较大时的LC曲线。18:16:47 由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。分离过程需要保持恒温。改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。上图为粒度较大时的LC曲线左图为粒度较小时的LC曲线18:16:57 2.2.流速流速 流速是调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。3.3.固定相及分离柱固定相及分离柱 气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。18:17:074.5.2 分离类型选择分离类型选择18:17:154.5.3 流动相的选择流动相的选择选择流动相时应注意以下几个普遍性的问题：选择流动相时应注意以下几个普遍性的问题：（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。（2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失酸性溶剂破坏氧化损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。铝固定相等。（3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。沉淀并在柱中沉积。（4）选择的流动相应满足检测器的要求。如当使用）选择的流动相应满足检测器的要求。如当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。18:17:23 在选择流动相时，溶剂的极性是选择的重要依据在选择流动相时，溶剂的极性是选择的重要依据。常用溶剂的极性大小顺序为：。常用溶剂的极性大小顺序为：水水(最大最大)甲酰胺甲酰胺 乙腈乙腈 甲醇甲醇 乙醇乙醇 丙醇丙醇 丙酮丙酮 二氧六环二氧六环 四氢呋喃四氢呋喃 甲乙酮甲乙酮 正丁醇正丁醇 乙酸乙酯乙酸乙酯 乙乙醚醚 异丙醚异丙醚 二氯甲烷二氯甲烷氯仿氯仿溴乙烷溴乙烷苯苯四氯化碳四氯化碳二硫化碳二硫化碳环己烷环己烷己烷己烷煤油煤油(最小最小)当纯溶剂不能满足分离要求时，多采用混合溶剂当纯溶剂不能满足分离要求时，多采用混合溶剂或梯度洗脱。或梯度洗脱。18:17:33多元混合溶剂的溶剂极性参数计算多元混合溶剂的溶剂极性参数计算 式中式中i 为混合溶剂中各溶剂的体积百分数。为混合溶剂中各溶剂的体积百分数。二元混合溶剂的则为二元混合溶剂的则为 式式中中A，B分分别别为为二二元元混混合合溶溶剂剂中中溶溶剂剂A和和溶溶剂剂B的的体积百分数。体积百分数。18:17:41多元混合溶剂的溶剂极性参数计算多元混合溶剂的溶剂极性参数计算 色色谱谱分分析析需需要要调调节节流流动动相相极极性性使使试试样样组组分分的的容容量量因子因子k的数值在适宜范围内。的数值在适宜范围内。对对于于正正相相色色谱谱，二二元元溶溶剂剂的的极极性性参参数数P 和和组组分分的的k值存在如下关系：值存在如下关系：式式中中、分分别别为为初初始始和和调调节节后后二二元元溶溶剂剂的的极极性性参参数数。k1、k2为组分相应的容量因子。为组分相应的容量因子。18:17:48例例4-3 在在一一反反相相色色谱谱柱柱上上，当当流流动动相相为为30%甲甲醇醇和和70%水水(体体积积比比)时时，某某组组分分的的保保留留时时间间为为25.6min，死死时时间间为为0.35min，如如何何调调节节溶溶剂剂配配比比使使组组分分容容量量因因子子为为5？解：初始值解：初始值 =0.75 即即调调整整溶溶剂剂比比例例为为75%甲甲醇醇和和25%水水可可使使该该组组分分的的k值为值为5。18:17:57溶剂的选择性溶剂的选择性 溶溶剂剂和和样样品品分分子子间间的的作作用用力力用用接接受受质质子子的的能能力力xe、给给予予质质子子的的能能力力xd和和静静电电力力xn(由由偶偶极极矩矩决决定定)三三种种参参数数来来表表征征，并并以以xe、xd和和xn构构成一个三角坐标图成一个三角坐标图。溶溶剂剂可可分分为为八八组组而而分分别别位位于于图图中中不不同同区区。I组组的的xe值值较较大大，属属质质子子受受体体溶溶剂剂；VII组组的的xd值值较较大大，属属质质子子给给于于体体溶溶剂剂；V组组的的xn值值较较大大，属属偶偶极极作作用用力力溶溶剂剂。同同组组溶剂在分离中具有相似的选择性，不同组差别较大。溶剂在分离中具有相似的选择性，不同组差别较大。18:18:06溶剂的选择性溶剂的选择性18:18:16请选择内容请选择内容结束结束4.1 高效液相色谱法的特性高效液相色谱法的特性 4.2 高效液相色谱仪高效液相色谱仪 4.3 液相色谱固定相与流动相液相色谱固定相与流动相 4.4 液相色谱中的主要分离类型液相色谱中的主要分离类型 4.5 液相色谱分析条件的选择液相色谱分析条件的选择 4.6 高效液相色谱法的应用高效液相色谱法的应用 4.7 离子色谱法离子色谱法 4.8 超临界流体色谱法超临界流体色谱法