液相色谱法测奶制品中的防腐剂含量.pptx

主要内容主要内容实验背景实验背景食品中测定防腐剂方法的选择食品中测定防腐剂方法的选择高效液相法测定过程高效液相法测定过程液相色谱仪使用的注意事项液相色谱仪使用的注意事项参考文献参考文献实验背景实验背景食品防腐剂可以抑制食品中的微生物的繁殖或杀灭食品中食品防腐剂可以抑制食品中的微生物的繁殖或杀灭食品中的微生物，苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钠盐是常用的食的微生物，苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钠盐是常用的食品防腐剂。但如果添加过量，会破坏食品中的营养成分，品防腐剂。但如果添加过量，会破坏食品中的营养成分，不仅能破坏维生素不仅能破坏维生素B1,B1,还能使钙形成不溶性物质还能使钙形成不溶性物质,影响人影响人体对钙的吸收体对钙的吸收,同时对人的胃肠有刺激作用同时对人的胃肠有刺激作用,过量食用还可过量食用还可引发癌症。苯甲酸的毒性远远大于山梨酸引发癌症。苯甲酸的毒性远远大于山梨酸,但因苯甲酸在但因苯甲酸在酸性条件下抑菌范围广酸性条件下抑菌范围广,以及价格低廉以及价格低廉,仍作为主要防腐剂仍作为主要防腐剂加入到食品中。但是苯甲酸是不允许在乳制品中添加的。加入到食品中。但是苯甲酸是不允许在乳制品中添加的。然而近年来中国奶制品大多被检出苯甲酸，虽然含量不高，然而近年来中国奶制品大多被检出苯甲酸，虽然含量不高，但足以影响婴儿等特殊人群的健康。但足以影响婴儿等特殊人群的健康。性状与性能性状与性能山梨酸山梨酸苯甲酸苯甲酸无色晶体粉末，相对分子无色晶体粉末，相对分子质量为：质量为：112.13112.13，熔点，熔点132132135135，沸点，沸点228228，耐，耐光耐热性好，难溶于水，光耐热性好，难溶于水，溶于乙醇，乙醚，花生油溶于乙醇，乙醚，花生油和丙酮。和丙酮。白色晶体，相对分子质量白色晶体，相对分子质量为为144.11144.11，熔点，熔点121.7121.7，沸点沸点249.2249.2，常温下难溶，常温下难溶于水，溶于热水，乙醇，于水，溶于热水，乙醇，氯仿，乙醚，丙酮，二硫氯仿，乙醚，丙酮，二硫化碳等。化碳等。食品中测定防腐剂方法的比较食品中测定防腐剂方法的比较特点特点:分离速度快分离速度快,效率高效率高,操作简操作简单单适用适用:植物成分研植物成分研究，鉴定化学分究，鉴定化学分析，毒物分析，析，毒物分析，中药成分分析及中药成分分析及含量测定含量测定薄层色谱法薄层色谱法特点特点:高效能，选高效能，选择性好，灵敏度择性好，灵敏度高，操作简单不高，操作简单不适用难挥发和热适用难挥发和热不稳定物质不稳定物质适用适用:石油工业，石油工业，环境保护，临床环境保护，临床化学，食品工业化学，食品工业气相色谱法气相色谱法特点特点:和气相色谱和气相色谱有一样特点，但有一样特点，但对于难挥发和热对于难挥发和热不稳定物质也适不稳定物质也适用用适用适用:更适宜于分更适宜于分离，分析高沸点，离，分析高沸点，热稳定性差以及热稳定性差以及相对分子质量较相对分子质量较大的物质。大的物质。液相色谱法液相色谱法食品中测定防腐剂方法的选择食品中测定防腐剂方法的选择检测苯甲酸和山梨酸一般采用薄层色谱法、气相色谱法和检测苯甲酸和山梨酸一般采用薄层色谱法、气相色谱法和液相色谱法。薄层色谱法是一种定性半定量的测定方法，液相色谱法。薄层色谱法是一种定性半定量的测定方法，虽然灵敏度高但重现性差。气相色谱样品处理工作量大、虽然灵敏度高但重现性差。气相色谱样品处理工作量大、试剂毒性强，且该方法由于填充柱的吸附及柱效能差别较试剂毒性强，且该方法由于填充柱的吸附及柱效能差别较大，使标准系列线性差，最低检出限较高。对于含量低或大，使标准系列线性差，最低检出限较高。对于含量低或稀释倍数大的样品无法检测，而液相色谱法样品处理相对稀释倍数大的样品无法检测，而液相色谱法样品处理相对简单。另外，高效液相色谱因采用高压输液泵和小颗粒的简单。另外，高效液相色谱因采用高压输液泵和小颗粒的填料，与经典的液相色谱相比具有很高的柱效和分离能力。填料，与经典的液相色谱相比具有很高的柱效和分离能力。故本实验采用高效液相色谱法测定防腐剂的含量。故本实验采用高效液相色谱法测定防腐剂的含量。高效液相法的测定过程高效液相法的测定过程仪器及仪器及试剂试剂样品样品提取提取液相色液相色谱条件谱条件实验实验步骤步骤标准色标准色谱图谱图仪器及试剂仪器及试剂仪器：高效液相色谱仪（紫外检测器）微量进样器仪器：高效液相色谱仪（紫外检测器）微量进样器（100um100um）超声波发生器超声波发生器;溶剂过滤器溶剂过滤器;0.45 0.45 m m滤膜滤膜;容量瓶容量瓶;恒温水浴恒温水浴锅锅试剂：液态奶饮料；奶粉；甲醇（色谱纯）；稀氨水试剂：液态奶饮料；奶粉；甲醇（色谱纯）；稀氨水（1:11:1）氢氧化钠溶液（氢氧化钠溶液（0.1mol/L0.1mol/L）;亚铁氰化钾溶液（亚铁氰化钾溶液（0.2mol/L0.2mol/L）醋酸锌溶液；磷酸盐缓冲溶液；标准贮备液：苯甲酸醋酸锌溶液；磷酸盐缓冲溶液；标准贮备液：苯甲酸(1mg/mL),(1mg/mL),山梨酸（山梨酸（1mg/mL1mg/mL）;混合标准工作液（苯甲酸混合标准工作液（苯甲酸+山山梨酸）梨酸）0.2mg/mL0.2mg/mL山梨酸、苯甲酸的提取山梨酸、苯甲酸的提取液态奶饮料液态奶饮料（20g20g）容量瓶容量瓶（100mL100mL）超声超声（10min10min）NaOH(25mL,NaOH(25mL,0.1mol/L)0.1mol/L)超声超声（20min20min）水浴水浴7575加热加热10min10min亚铁氰化钾亚铁氰化钾（10ml10ml）醋酸锌醋酸锌（10ml10ml）甲醇甲醇（10ml10ml）定容至定容至100ml100ml过滤过滤上清液上清液待用待用液相色谱条件液相色谱条件柱子柱子:Eclipse XD13-C18:Eclipse XD13-C18柱柱(4.6mm150mm(4.6mm150mm，5m);5m);流动相流动相:磷酸盐缓冲溶液磷酸盐缓冲溶液 -甲醇甲醇(V/V90:10);(V/V90:10);等梯度洗脱等梯度洗脱;流速流速 0.3ml/min;0.3ml/min;保留时间保留时间 15min;15min;柱温柱温 35;35;进样量进样量 20 ul;20 ul;紫外检测波长紫外检测波长 227nm227nm；实验步骤实验步骤1.1.混合标准液的配置混合标准液的配置分别移取混合标准工作分别移取混合标准工作0.00ml,1.00ml,2.00ml,3.00ml,0.00ml,1.00ml,2.00ml,3.00ml,4.00ml,5.00ml,5.00ml4.00ml,5.00ml,5.00ml于于6 6个容量瓶（个容量瓶（10ml10ml），稀释定容。），稀释定容。2.2.流动相处理流动相处理流动相用流动相用0.45 um0.45 um水相滤膜进行减压过滤和超声脱气处理水相滤膜进行减压过滤和超声脱气处理3.3.开机开机 出现平直基线出现平直基线 进样进样4.4.定性分析定性分析分别进苯甲酸分别进苯甲酸,山梨酸标准溶液山梨酸标准溶液10uL,10uL,确定各个峰保留时间确定各个峰保留时间5.5.标准曲线测定标准曲线测定分别吸取分别吸取60uL60uL的苯甲酸和山梨酸混合标准液进样，建立定量的苯甲酸和山梨酸混合标准液进样，建立定量分析表分析表6.6.样品分析样品分析取样品取样品60uL60uL进样，记录保留时间和峰面积进样，记录保留时间和峰面积标准色谱图标准色谱图液相色谱仪使用注意事项液相色谱仪使用注意事项(1)(1)使用高效液相色谱级的溶剂与试剂，溶剂和水必须进行过滤。使用高效液相色谱级的溶剂与试剂，溶剂和水必须进行过滤。(2)(2)必须对含有缓冲盐的流动相进行过滤（必须对含有缓冲盐的流动相进行过滤（0.45um0.45um）。）。(3)(3)流动相使用前必须脱气。流动相使用前必须脱气。(4)(4)改变流动相时防止交叉污染。改变流动相时防止交叉污染。(5)(5)不要使用陈旧的流动相，定期清洗流动相储液瓶。不要使用陈旧的流动相，定期清洗流动相储液瓶。(6)(6)定期清洗烧结不锈钢吸滤头。定期清洗烧结不锈钢吸滤头。(7)(7)防止过高压力冲击色谱柱。防止过高压力冲击色谱柱。(8)(8)每次使用后要冲洗干净进样阀中残留的样品和缓冲盐，防止无机每次使用后要冲洗干净进样阀中残留的样品和缓冲盐，防止无机盐沉积和样品微粒磨损阀转子。盐沉积和样品微粒磨损阀转子。(9)(9)严禁使用气相色谱那样的尖头针进样。严禁使用气相色谱那样的尖头针进样。(10)(10)在注射针前加装针式过滤器，防止样品中的微粒进入进样阀在注射针前加装针式过滤器，防止样品中的微粒进入进样阀(11)(11)色谱柱不用卸下前色谱柱不用卸下前:a.:a.必须洗去缓冲液；必须洗去缓冲液；b.b.防止产生微生物；防止产生微生物；c.c.用大于用大于10%10%的有机溶剂充满整个色谱柱；的有机溶剂充满整个色谱柱；d.d.柱卸下后用柱堵头将色柱卸下后用柱堵头将色谱柱首尾密封。谱柱首尾密封。参考文献参考文献1.1.祝伟霞祝伟霞,魏蔚魏蔚,杨冀州杨冀州,刘亚风刘亚风高效液相色谱法测定乳饮高效液相色谱法测定乳饮料和奶制品中苯甲酸和山梨酸料和奶制品中苯甲酸和山梨酸,中国国境卫生检疫杂志中国国境卫生检疫杂志,2005,2005年年1010月第月第2828卷第卷第5 5期期 2.2.周毅刚周毅刚,龙苏龙苏,王晓春王晓春,等等.高效液相法测定食品中苯甲酸和高效液相法测定食品中苯甲酸和山梨酸含量山梨酸含量.中国医师杂志中国医师杂志,2001,13(3):184-188,2001,13(3):184-1883.3.全国标准化委员会全国标准化委员会.GB/T5009.29-2003.GB/T5009.29-2003食品中山梨酸、苹食品中山梨酸、苹甲酸测测定方法甲酸测测定方法.北京北京:中国标准出版社中国标准出版社,2003,2003The End