色谱柱选择与维护.pptx

色谱柱的选择与维护色谱柱的选择与维护 魏少勇魏少勇 15920467889广州菲罗门科学仪器有限公司广州菲罗门科学仪器有限公司 色谱柱的选择与维护色谱柱的选择与维护公司简介公司简介如何选择色谱柱如何选择色谱柱A、固定相的选择、固定相的选择B、PH的选择的选择如何维护色谱柱如何维护色谱柱广州菲罗门科学仪器有限公司广州菲罗门科学仪器有限公司中国全权总代理中国全权总代理广州菲罗门科学仪器有限公司广州菲罗门科学仪器有限公司广州菲罗门科学仪器有限公司广州菲罗门科学仪器有限公司我们的宗旨我们的宗旨:以最真诚和迅速的态度替用户提以最真诚和迅速的态度替用户提供优质服务供优质服务,解决分析的问题和需要解决分析的问题和需要1982 成立于美国加州成立于美国加州提供一系列非常完整的色谱柱提供一系列非常完整的色谱柱极少数专门提供色谱耗材公司极少数专门提供色谱耗材公司-液相和气相液相和气相液相和气相液相和气相免费提供超过免费提供超过10000应用谱图应用谱图免费提供技术支持免费提供技术支持免费提供技术资料免费提供技术资料2004 Labvision HPLC Column Report2004年一月到六月年一月到六月Labvision调查美国调查美国1200实验室结果实验室结果使用柱子数量的比例使用柱子数量的比例Phenomenex25%W22.5%A7.7%S7.6%其他其他 5%以下以下如何选择适当的色谱柱如何选择适当的色谱柱理想的柱子理想的柱子可以适用于分析所有的化合物可以适用于分析所有的化合物永远不会坏永远不会坏理想分离度理想分离度决定峰分离度的三个要素决定峰分离度的三个要素 峰保留时间峰保留时间 选择性选择性(出峰的顺序出峰的顺序)柱效柱效如何得到最理想的分析结果如何得到最理想的分析结果流动相流动相流动相流动相,被分析物被分析物被分析物被分析物,和固定相三者之间的作用影响峰和固定相三者之间的作用影响峰和固定相三者之间的作用影响峰和固定相三者之间的作用影响峰保留时间和峰分离性保留时间和峰分离性保留时间和峰分离性保留时间和峰分离性.峰保留时间短一般峰型较好峰保留时间短一般峰型较好峰保留时间短一般峰型较好峰保留时间短一般峰型较好,但分离可能不理想但分离可能不理想但分离可能不理想但分离可能不理想.所以为了调节最理想的分析结果所以为了调节最理想的分析结果所以为了调节最理想的分析结果所以为了调节最理想的分析结果,可以改变下列的一项或数项条件可以改变下列的一项或数项条件可以改变下列的一项或数项条件可以改变下列的一项或数项条件:流动相流动相 固定相固定相 pH 温度温度固定相的选择固定相的选择 疏水性的选择疏水性的选择 极性的选择极性的选择 苯基的选择苯基的选择固定相疏水性考虑的要素固定相疏水性考虑的要素 键合相的种类键合相的种类(C18,C8,Phenyl,etc)表面积表面积 键合相的键合率键合相的键合率Luna C18(2)月神月神品质可靠品质可靠品质可靠品质可靠,世界畅销的世界畅销的世界畅销的世界畅销的 C18 C18 柱柱柱柱重复性高重复性高重复性高重复性高 可以同时提供可以同时提供可以同时提供可以同时提供 3 3个不同的批次的柱子个不同的批次的柱子个不同的批次的柱子个不同的批次的柱子Luna C18(2)GinsengRootColumn:Luna5mC18/ODS(2)Dimensions:150 x4.6mmIDElution Type:GradientEluent A:Acetonitrile/water(15:85)Eluent B:Acetonitrile/water(80:20)Flow Rate:1.5mL/minTemperature:25CDetection:UV-VisAbs.VariableWave.205nmApp ID 1125Luna C8(2)&C5 减少疏水性化合物的保留时间减少疏水性化合物的保留时间减少疏水性化合物的保留时间减少疏水性化合物的保留时间 减少分析的时间减少分析的时间减少分析的时间减少分析的时间Synergi Max-RP 疏水性和疏水性和疏水性和疏水性和 C18C18柱类似柱类似柱类似柱类似 但这是一支但这是一支但这是一支但这是一支C12C12柱柱柱柱 提供比提供比提供比提供比C18C18柱更尖的柱峰柱更尖的柱峰柱更尖的柱峰柱更尖的柱峰,尤其是分析碱性化合物尤其是分析碱性化合物尤其是分析碱性化合物尤其是分析碱性化合物Synergi Max-RPBasicDrugsatNeutralpH疏水性的比较疏水性的比较C18 phasesC8 phase300 C18 phase极性选择性的考虑极性选择性的考虑首先考虑首先考虑 固定相的极性封尾固定相的极性封尾,封端基团封端基团 分析物的极性官能基分析物的极性官能基 之间的作用之间的作用极性选择性极性选择性如何增加极性的选择性如何增加极性的选择性 极性基团封端极性基团封端 极性基团镶嵌极性基团镶嵌 苯基苯基极性选择性极性选择性Columns:Luna5mC18(2)YMC-Pack5mProC18Synergi4mPolar-RP(Ether-linkedPhenyl)150 x4.6mmMobilephase:75:25Methanol:waterFlowrate:1mL/minComponents:1.Estrone2.Estradiol极性选择性极性选择性LunaC18(2)Synergi Polar-RPYMC-PackProC181+21+212Synergi Max-RP -C12Synergi Hydro-RP -C18Synergi Fusion-RP C18Synergi Polar-RP PhenylSynergiSilica Advantage Silica Advantage Balancing Efficiency&BackpressureBalancing Efficiency&BackpressureLinearVelocity(mm/sec)PlateHeight(H)543FlowRate(mL/min)PressureDrop(Bar)higher efficiencieslower backpressuresSynergiSynergiSynergi Max-RP与与C18柱性能类似的柱性能类似的C12柱柱Synergi Polar-RP 保留极性和苯基化合物保留极性和苯基化合物保留极性和苯基化合物保留极性和苯基化合物 100%100%水溶液稳定水溶液稳定水溶液稳定水溶液稳定 增加极性的选择性增加极性的选择性增加极性的选择性增加极性的选择性Synergi Hydro-RP 疏水性非常强疏水性非常强疏水性非常强疏水性非常强.极性封端极性封端极性封端极性封端100%100%水溶性稳定水溶性稳定水溶性稳定水溶性稳定 增进极性的选择性增进极性的选择性增进极性的选择性增进极性的选择性Synergi Hydro-RP VS.Luna C18(2)Synergi Hydro-RP Synergi Hydro-RPSynergi Hydro-RPSynergi Max-RPSynergi Max-RPMobile Phase:A:20mM KH2PO4,pH 4.6B:AcetonitrileGradient:A/B(95:5)to A/B(65:35)in 15 minFlow rate:1.5 mL/minSample:1.Morphine2.Hydromorphone3.Codeine4.Nalorphine5.OxycodoneSynergi Hydro-RPSynergi Fusion-RP 增加极性的选择性同时减少疏水性的分析时间增加极性的选择性同时减少疏水性的分析时间增加极性的选择性同时减少疏水性的分析时间增加极性的选择性同时减少疏水性的分析时间 在水溶液中在水溶液中在水溶液中在水溶液中100%100%稳定稳定稳定稳定 在在在在LC-MSLC-MS下面基本无流失下面基本无流失下面基本无流失下面基本无流失min02468101214mAU0100200300400500VWD1A,Wavelength=210nm(S:HPCHEM1DATASW1003TEST0034.D)min02468101214mAU050100150200250300350VWD1A,Wavelength=210nm(S:HPCHEM1DATASW1003FUSI0046.D)Running ConditionsMobilephase:75:2520mMPotassiumphosphatepH2.5:AcetonitrileFlowrate:1.5ml/minTemperature:AmbientDetection:210nmInjection:1.Maleicacid2.Chlorpheniramine3.Triprolidine4.DiphenhydramineSynergiFusion-RP4 80一般的C18柱极性增大极性增大疏水性减少疏水性减少Synergi Fusion-RPAvg symm:0.91Synergi Max-RPAvg symm:0.77Luna C18(2)Avg symm:0.82 Running ConditionsMobilephase:A25mMTrispH9B:ACNGradient:40%-70%Bin15minutesFlowrate:1.0ml/minDetection:230nmComponents:1.Scopolamine,LogP=2.Lidocaine,LogP=2.443.Noscapine,LogP=1.97苯基的选择性影响苯基的选择性影响 被分析物和固定相之间产生的被分析物和固定相之间产生的作用作用LunaPhenyl-Hexyl 使用甲醇可以增加使用甲醇可以增加作用效果作用效果Luna Phenyl-Hexyl 具有疏水性和苯基双重的选择性具有疏水性和苯基双重的选择性具有疏水性和苯基双重的选择性具有疏水性和苯基双重的选择性 重复性高和稳定的苯基固定相重复性高和稳定的苯基固定相重复性高和稳定的苯基固定相重复性高和稳定的苯基固定相Luna Phenyl-HexylGreenTea(绿茶)Column:Luna5uPhenyl-HexylDimensions:250 x4.6mmMobile Phase A:0.2%AceticacidinWater/Acetonitrile(91:9)B:Water/Acetonitrile(20:80)Gradient:100%Atot=25min,(68:32)t=25mintot=35min,hold100%Bfor10min.Flow Rate:1ml/minTemperature:350CApp ID 14436苯基的影响苯基的影响Columns:Luna5mC18(2)150 x4.6mmLuna5mPhenyl-Hexyl150 x4.6mmSynergi4mPolar-RP150 x4.6mmMobilephase:50:50Acetonitrile:20mMPotassiumphosphatepH2.5Flowrate:1.0mL/minComponents:Acidic,aromaticcompounds1.Indoprofen2.Ethylparaben3.Naproxen4.Diflunisal5.Indomethacin6.IbuprofenC18(2)Phenyl-HexylPolar-RP苯基的影响苯基的影响pH的影响的影响当选择流动相的当选择流动相的pH时时,我们必需考虑我们必需考虑到到pH对分析物和柱子两者的影响对分析物和柱子两者的影响pH对柱子的影响对柱子的影响即使键合完美即使键合完美即使键合完美即使键合完美,封端完好封端完好封端完好封端完好,硅胶表面还是会存在硅胶表面还是会存在硅胶表面还是会存在硅胶表面还是会存在Si-O-HSi-O-H的微酸游离基的微酸游离基的微酸游离基的微酸游离基 pKa3.5pKa3.5如果流动相的如果流动相的如果流动相的如果流动相的pHpH是是是是4 4以上以上以上以上,此此此此 Si-O-HSi-O-H的游离基会的游离基会的游离基会的游离基会脱氢脱氢脱氢脱氢,成为带负电的成为带负电的成为带负电的成为带负电的Si-O-Si-O-(这会造成和分析物之这会造成和分析物之这会造成和分析物之这会造成和分析物之间的极性反应间的极性反应间的极性反应间的极性反应,而造成峰拖尾而造成峰拖尾而造成峰拖尾而造成峰拖尾)如果流动相的如果流动相的如果流动相的如果流动相的pHpH是是是是8(8(或或或或10)10)以上以上以上以上,硅胶会被破坏硅胶会被破坏硅胶会被破坏硅胶会被破坏,造成柱子损害造成柱子损害造成柱子损害造成柱子损害pH对分析物的影响对分析物的影响基本上基本上,反相柱的峰保留时间长短反相柱的峰保留时间长短,主要主要归因于疏水性的非极性反应归因于疏水性的非极性反应.所以要增所以要增长峰保留时间长峰保留时间,必需选择流动相的必需选择流动相的pH能能够让分析物保持中性够让分析物保持中性对酸性分析物对酸性分析物(pKa3-6),基本选择基本选择pH在在 pKa以下以下对碱性分析物对碱性分析物(pKa9-11),基本选择基本选择pH在在 pKa以上以上对碱性分析物的分析建议对碱性分析物的分析建议多数硅胶柱没法于高多数硅胶柱没法于高pH条件下稳定条件下稳定,所以所以一般分析碱性化合物时一般分析碱性化合物时,会选择于会选择于pH1.5-3下进行分析下进行分析.在此在此pH条件下条件下,硅胶表面的游硅胶表面的游离离Si-O-H会保持中性会保持中性,减少离子间的二极反减少离子间的二极反应应,因而减少峰拖尾因而减少峰拖尾,峰型较好峰型较好但是在低但是在低pH条件下条件下,碱性化合物的极性增碱性化合物的极性增加加,疏水性减少疏水性减少,如果要增加峰保留时间如果要增加峰保留时间,流动相的有机溶剂比率必需减少流动相的有机溶剂比率必需减少对碱性分析物的分析建议对碱性分析物的分析建议在高在高pH条件下条件下,碱性化合物可以保持中性碱性化合物可以保持中性,疏水疏水性因而增加性因而增加,但是如果峰保留时间太长但是如果峰保留时间太长,可以将流可以将流动相的有机溶剂比率增加动相的有机溶剂比率增加,以缩短保留时间以缩短保留时间.增加增加选择分析条件的弹性选择分析条件的弹性流动相的有机溶剂比率增加流动相的有机溶剂比率增加,以缩短保留时间外以缩短保留时间外,并可以增进峰型并可以增进峰型(尖尖)但是问题是但是问题是:如何在高如何在高pH(8以上以上)条件下分析条件下分析?高高pH对碱性分析物的分析对碱性分析物的分析选择选择使用高分子柱使用高分子柱使用高分子柱使用高分子柱使用最新技术突破的使用最新技术突破的使用最新技术突破的使用最新技术突破的 双子星柱双子星柱(GEMINI)Gemini C18 双子星柱双子星柱Gemini C18 双子星柱双子星柱 在在在在pH 1-12pH 1-12范围内很稳定范围内很稳定范围内很稳定范围内很稳定 适用于酸适用于酸适用于酸适用于酸,中中中中,碱性化合物碱性化合物碱性化合物碱性化合物,特别特别特别特别是是是是 分析中分析中分析中分析中,碱性化合物很理想碱性化合物很理想碱性化合物很理想碱性化合物很理想 可以更有弹性的调节可以更有弹性的调节可以更有弹性的调节可以更有弹性的调节pHpH以得到合适的分析条件以得到合适的分析条件以得到合适的分析条件以得到合适的分析条件Particle Technology Polymer Silica TwinGemini C18流动相流动相pH的影响的影响pH 1 12 StabilityGemini C18pKapKa总结总结 将固定相和被分析物之间的疏水性将固定相和被分析物之间的疏水性,极性极性,和苯基关系密切考虑以选择适和苯基关系密切考虑以选择适当的柱子和分析当的柱子和分析pH范围范围C18phasePhenylphase固定相的影响固定相的影响HydrophobicityRankingPhaseDescription&ColumnFingerprintSorbentCharacteristics&ApplicationUse选择柱子的绝佳参考资料选择柱子的绝佳参考资料方法开发的绝佳参考资料方法开发的绝佳参考资料如何保护柱子和延长柱子的壽命如何保护柱子和延长柱子的壽命使用保护柱使用保护柱柱子使用完后柱子使用完后,立刻冲洗立刻冲洗样品前处理样品前处理-过滤过滤,固态萃取固态萃取尽可能每一种分析方法使用一支专门柱尽可能每一种分析方法使用一支专门柱5%原理原理 C18 柱的基本冲洗方法柱的基本冲洗方法使用柱体积使用柱体积10倍的以下溶液冲洗倍的以下溶液冲洗,以以0.1-0.2ml/min流速流速95/5=水水:乙晴乙晴5/95=水水:乙晴乙晴梯度冲洗梯度冲洗-于分析结束后由于分析结束后由5%乙晴增加到乙晴增加到95%乙晴乙晴保护柱套和柱芯保护柱套和柱芯为何要使用保护柱为何要使用保护柱将样品中的颗粒和死吸附的将样品中的颗粒和死吸附的 杂质拦截以保护昂贵的分析柱杂质拦截以保护昂贵的分析柱可以增加柱子的寿命和保持柱效可以增加柱子的寿命和保持柱效一般的保护柱有何缺点一般的保护柱有何缺点增加系统的死体积增加系统的死体积峰变宽峰变宽保留时间改变保留时间改变我们的保护柱套有何不同我们的保护柱套有何不同通用通用-适用于所有的柱子适用于所有的柱子直接与柱子连接几乎体积同时不改变峰保留直接与柱子连接几乎体积同时不改变峰保留绝对不与流动相作用绝对不与流动相作用使用容易使用容易价格合理价格合理SecurityGuard SecurityGuard 适用于任何柱子适用于任何柱子适用于任何柱子适用于任何柱子接头通用接头通用接头通用接头通用使用容易使用容易使用容易使用容易不会改变保留时间不会改变保留时间不会改变保留时间不会改变保留时间 十大应该试试我们产品的理由十大应该试试我们产品的理由柱子产品种类多柱子产品种类多,可选择性广可选择性广柱子重复性好柱子重复性好,可同时提供不同批次柱子分析可同时提供不同批次柱子分析每支柱子一律单独品管测试每支柱子一律单独品管测试,保证质量保证质量我们有保证退货政策我们有保证退货政策密切和用户合作密切和用户合作,迅速解答客户问题迅速解答客户问题,增进效率增进效率色譜柱是我们的生命色譜柱是我们的生命,我们必需比仪器厂家做的更好我们必需比仪器厂家做的更好于多数欧美国家销售第一于多数欧美国家销售第一,世界认可世界认可,有利出口检验有利出口检验会根据客户需要会根据客户需要,选择最适当的柱子选择最适当的柱子可以有条件的试用可以有条件的试用价位合理价位合理联络方法联络方法:广州总部广州总部:020-38785061/62/63 上海代表处上海代表处:021-51611275/76北京代表处：北京代表处：010-64468935/36成都代表处：成都代表处：028-85194097/79华中办事处：华中办事处：027-87668497网站网站:;谢谢谢谢 YMCPackisatrademarkofYMC,Inc.XterraisaregisteredtrademarkofWatersCorporation.Synergi,Gemini,Luna,ProdigyandJupiteraretrademarksofPhenomenexInc.Polar-RPisaregisteredtrademarkofPhenomenex,Inc.PhenomenexisinnowayaffiliatedwithYMCInc.orWatersCorp.