流式细胞术简介.pptx

流式细胞术简介流式细胞术简介张林西张林西张林西张林西生命科学研究中心生命科学研究中心生命科学研究中心生命科学研究中心0 Background流式细胞术（流式细胞术（流式细胞术（流式细胞术（FlowCytometryFlowCytometry，FCMFCM）是是是是7070年代年代年代年代发展起来的一种发展起来的一种发展起来的一种发展起来的一种快速对单细胞定量分析和快速对单细胞定量分析和快速对单细胞定量分析和快速对单细胞定量分析和分选的新技术分选的新技术分选的新技术分选的新技术，能，能，能，能定量分析定量分析定量分析定量分析细胞的生物化学成分。细胞的生物化学成分。细胞的生物化学成分。细胞的生物化学成分。其检测速度之快、统计学精度之高，是其他的方其检测速度之快、统计学精度之高，是其他的方其检测速度之快、统计学精度之高，是其他的方其检测速度之快、统计学精度之高，是其他的方法无可比拟的。可同时从一个细胞中测得法无可比拟的。可同时从一个细胞中测得法无可比拟的。可同时从一个细胞中测得法无可比拟的。可同时从一个细胞中测得多种参多种参多种参多种参数数数数（如（如（如（如DNADNA、RNARNA、蛋白质、细胞体积等）进行、蛋白质、细胞体积等）进行、蛋白质、细胞体积等）进行、蛋白质、细胞体积等）进行多参数分析，为多参数分析，为多参数分析，为多参数分析，为细胞生物学和生物医学细胞生物学和生物医学细胞生物学和生物医学细胞生物学和生物医学的研究提的研究提的研究提的研究提供了强有力的手段。供了强有力的手段。供了强有力的手段。供了强有力的手段。在在在在8080年代，年代，年代，年代，流式细胞术已经广泛应用于流式细胞术已经广泛应用于流式细胞术已经广泛应用于流式细胞术已经广泛应用于基础基础基础基础和临床医学和临床医学和临床医学和临床医学的研究，使之成为切实可行的有效的的研究，使之成为切实可行的有效的的研究，使之成为切实可行的有效的的研究，使之成为切实可行的有效的研究方法。研究方法。研究方法。研究方法。FCMFCM在医学领域中得到广泛推广应用。例如在医学领域中得到广泛推广应用。例如在医学领域中得到广泛推广应用。例如在医学领域中得到广泛推广应用。例如 在在在在免疫学免疫学免疫学免疫学、细胞遗传学、肿瘤学、病理学、放射生物学细胞遗传学、肿瘤学、病理学、放射生物学细胞遗传学、肿瘤学、病理学、放射生物学细胞遗传学、肿瘤学、病理学、放射生物学等学科。并形成了独特的学科分支，诸如等学科。并形成了独特的学科分支，诸如等学科。并形成了独特的学科分支，诸如等学科。并形成了独特的学科分支，诸如流式免疫学、流式免疫学、流式免疫学、流式免疫学、流式遗传学、流式病理学、流式细胞酶学流式遗传学、流式病理学、流式细胞酶学流式遗传学、流式病理学、流式细胞酶学流式遗传学、流式病理学、流式细胞酶学等。等。等。等。近年来，随着科学技术的发展，多种新的荧光近年来，随着科学技术的发展，多种新的荧光近年来，随着科学技术的发展，多种新的荧光近年来，随着科学技术的发展，多种新的荧光探针的不断出现，使探针的不断出现，使探针的不断出现，使探针的不断出现，使 FCMFCM技术的应用范围不断扩大，技术的应用范围不断扩大，技术的应用范围不断扩大，技术的应用范围不断扩大，特别是各种各样的荧光探针标记的单克隆抗体和其它特别是各种各样的荧光探针标记的单克隆抗体和其它特别是各种各样的荧光探针标记的单克隆抗体和其它特别是各种各样的荧光探针标记的单克隆抗体和其它蛋白质的出现，为蛋白质的出现，为蛋白质的出现，为蛋白质的出现，为 FCMFCM研究各种组织细胞研究各种组织细胞研究各种组织细胞研究各种组织细胞 膜和细膜和细膜和细膜和细胞内抗原、肿瘤性蛋白等开辟了新途径。胞内抗原、肿瘤性蛋白等开辟了新途径。胞内抗原、肿瘤性蛋白等开辟了新途径。胞内抗原、肿瘤性蛋白等开辟了新途径。新的肿瘤标志物的不断出现，大大提高了新的肿瘤标志物的不断出现，大大提高了新的肿瘤标志物的不断出现，大大提高了新的肿瘤标志物的不断出现，大大提高了FCMFCM在医学领域的的研究水平。其发展速度之快，应用层在医学领域的的研究水平。其发展速度之快，应用层在医学领域的的研究水平。其发展速度之快，应用层在医学领域的的研究水平。其发展速度之快，应用层出不穷。出不穷。出不穷。出不穷。FCMFCM是集现代电子物理技术是集现代电子物理技术是集现代电子物理技术是集现代电子物理技术、激光技术、电激光技术、电激光技术、电激光技术、电子计算机技术和流体力学等于一身的高科技仪器，子计算机技术和流体力学等于一身的高科技仪器，子计算机技术和流体力学等于一身的高科技仪器，子计算机技术和流体力学等于一身的高科技仪器，开创了荧光技术的又一个崭新的领域。开创了荧光技术的又一个崭新的领域。开创了荧光技术的又一个崭新的领域。开创了荧光技术的又一个崭新的领域。近年来，此项技术发展十分迅速。具有更高灵近年来，此项技术发展十分迅速。具有更高灵近年来，此项技术发展十分迅速。具有更高灵近年来，此项技术发展十分迅速。具有更高灵敏度、更高分辨率、双激光、多荧光参数分析的仪敏度、更高分辨率、双激光、多荧光参数分析的仪敏度、更高分辨率、双激光、多荧光参数分析的仪敏度、更高分辨率、双激光、多荧光参数分析的仪器不断问世，并在朝着经济实用、操作简便、小巧器不断问世，并在朝着经济实用、操作简便、小巧器不断问世，并在朝着经济实用、操作简便、小巧器不断问世，并在朝着经济实用、操作简便、小巧精制、自动化程度高的方向发展。精制、自动化程度高的方向发展。精制、自动化程度高的方向发展。精制、自动化程度高的方向发展。确信，流式细胞分析技术进一步与其它技术的确信，流式细胞分析技术进一步与其它技术的确信，流式细胞分析技术进一步与其它技术的确信，流式细胞分析技术进一步与其它技术的结合，将极大的推动生物医学的发展结合，将极大的推动生物医学的发展结合，将极大的推动生物医学的发展结合，将极大的推动生物医学的发展。First commercial FCMFirst commercial FCMFCM papers一、流式细胞仪一、流式细胞仪 品牌、型号简介品牌、型号简介1.BD(BecktonDickinson)公司公司1973年年第一台：第一台：FACSI（FluorescenceActivatedCellSorter）1980年年中国第一台：中国第一台：FACSII市场占有率：全球市场占有率：全球75%，中国，中国70%2.BeckmanCoulter公司：公司：逐年增多趋势逐年增多趋势?？流式细胞仪主要厂商流式细胞仪主要厂商荧光激活细胞分选仪荧光激活细胞分选仪（Fluorescenceactivatedcellsorter,FACS）名称介绍名称介绍流式细胞仪的发展，从开始的设想到第一流式细胞仪的发展，从开始的设想到第一台仪器的问世，经历了几十年的时间。随着现台仪器的问世，经历了几十年的时间。随着现代激光技术、电子检测技术和电子计算机技术代激光技术、电子检测技术和电子计算机技术的迅速发展，该技术在近些年来有了迅速的发的迅速发展，该技术在近些年来有了迅速的发展，成为目前比较完善的细胞分析工具。展，成为目前比较完善的细胞分析工具。1.临床型（台式机）临床型（台式机）特点：光路调节系统固定，自动化程度高，操作简便，特点：光路调节系统固定，自动化程度高，操作简便，易掌握易掌握2.科研型（大型机）科研型（大型机）特点：分辨率高，选配多种波长和类型激光器，可感兴特点：分辨率高，选配多种波长和类型激光器，可感兴趣细胞分选到特定培养孔或板上，适用于科研。趣细胞分选到特定培养孔或板上，适用于科研。新型仪器特点：仪器选新型仪器特点：仪器选2-4根激光，可检测根激光，可检测13种荧光参数，种荧光参数，15种参数。适用于高速分选和多色分析。自动化程度很种参数。适用于高速分选和多色分析。自动化程度很高，提高工作效率。高，提高工作效率。流式细胞仪分类：流式细胞仪分类：FACSAnalyzerFACSFACSFACS420,440FACSstarFACScanFACSstar+FACSsortFACSVantageFACSCaliburFACSVantageSEBDLSRFACSVantageDiVaBDLSRFACSAriaFACScanto流式细胞计的进展流式细胞计的进展B-D公司流式细胞计系列公司流式细胞计系列EPICS XL/XL-EPICS XL/XL-MCLMCL台式机台式机 CytomicsTM FC 500CytomicsTM FC 500系列系列最新型最新型EPICS AltraEPICS Altra细胞分选细胞分选仪仪大型科研型大型科研型Coulter公司公司不同型号流式细胞仪不同型号流式细胞仪FACSCaliburLSRIIFACSAriaFACSCountFACSVantage&DiVaFACSCantoBDBD公司不同型号流式细胞仪公司不同型号流式细胞仪FACSCalibur(单激光）单激光）FACSCaliburBD FACSCalibur System 本本 仪仪 器器 系系 统统（The BD FACSCaliburTMsystem）是是BD公公司司的的另另一一个个第第一一：唯唯一一的的四四色色、双双激激光光台台式式机机，可可进进行行细细胞胞分分析析及及分分选选。特特别别为为更更大大范范围围的的应应用用而而设设计计。本本仪仪器器是是一一个个完完全全的的同同时进行多参数分析系统。时进行多参数分析系统。本本仪仪器器系系统统结结合合了了唯唯一一的的双双激激光光技技术术、自自动动化化的的上上样样功功能能及及强强大大的的软软件件，可可满满足足临临床床实实验验室室高高度度工工作作效效率率的的需需要要。本本系系统统的的可可调调节节及及创创新新性性技技术术还还可可以以为为研研究究者者提提供供广广泛泛的的研研究究需需要要及及灵灵活活型需求。型需求。本本仪仪器器能能够够满满足足目目前前的的临临床床及及研研究究需需求求。它它的灵活性可达到你将来的需求。的灵活性可达到你将来的需求。本系统本系统：容纳容纳3色或色或4色荧光色荧光BDFACStationTM数据管理系统数据管理系统灵活性及可升级性灵活性及可升级性BD LSRBD LSR II System本本仪仪器器系系统统（TheBDLSRII）可可最最多多配配置置4根根激激光光、具具有有检检测测高高达达18色色的的能能力力。本本仪仪器器可可配配置置488nm,405nm,633nm,and355nmUV激激光光。本本仪仪器器核核心心是是新新的的数数字字化化电电子子元元件件。本本电电子子元元件件在在16,384分分散散水水平平可可数数字字化化信信号号达达到到1千千万万次次秒秒，这这样样扩扩大大了了通通道道处处理理能能力力及及增增加加了了检检测测的的敏敏感感性性。电电子子死死亡亡时时间间被被消消除除了了，可可进进行行更更精精确确的的荧荧光光测测量量。这这样样增增进进了了荧荧光光测测量量线线性性、补补偿偿及及量量化。化。BDLSRIISystem高达高达18色检测；色检测；数字化获取及分心系统；数字化获取及分心系统；灵活性及将来的可升级性。灵活性及将来的可升级性。激光选择激光选择:355nmUV,405nm,633nmBD FACSArray Bioanalyzer SystemBDFACSArrayBioanalyzerSystem:快速的微量滴定板快速的微量滴定板sampler*6参数检测（包括散射光及荧光）；参数检测（包括散射光及荧光）；直观的软件系统；直观的软件系统；数字化信号处理数字化信号处理，可高达，可高达15,000秒。秒。台式组合结构。台式组合结构。BD FACSCantoTomorrows flow cytometer.today!BD FACSCanto flow cytometerBD公公司司自自从从1974年年第第一一台台商商用用流流式式细细胞胞仪仪问问世世一一直直致致力力于于流流式式细细胞胞仪仪的的创创新新。BDFACSCantobenchtopflowcytometer继承了这个传统。它的主要特这是：继承了这个传统。它的主要特这是：1.真真6色色容容纳纳能能力力从从少少量量的的样样品品量量中中获获取取每每个个细细胞胞更更多的信息。多的信息。2.敏敏感感性性(50MESFPE,100MESFFITC*)解解决决最最微弱的微弱的events。3.快速快速(10,000events/sec)加速稀少事件的获取。加速稀少事件的获取。4.Lowcarryover(0.1%)使样品污染最小化。使样品污染最小化。5.更换透镜键盘化更换透镜键盘化不用工具更换滤光片。不用工具更换滤光片。6.Fixedopticalalignment免除用户调节。免除用户调节。7.日常管理自动化日常管理自动化为科研节约更多时间。为科研节约更多时间。BD FACSVantage SE flow cytometry systemBD FACSVantage SE flow cytometry systemBDFACSVantageSEflowcytometrysystemHigh-performance,high-speedcellsorterThe BD FACSVantageTM SE flow cytometrysystemisthesuperiorcell-sortinginstrumentfortheresearchlaboratory.Forover25years,BDcellsortershavebeenthegoldstandardandarefoundinleadinguniversity,pharmaceutical,andbiotechnology research facilities throughout theworld.To meet the research demands of today,we haveimprovedtheBDFACSVantageTMandaddedoptionsthatcustomizeit.TheresultistheBDFACSVantageSE,a flow cytometer that performs with maximumflexibility and reliability.All of this technology isaccessible through a familiar user interface andefficientergonomicdesign.TheBDFACSVantageSEflowcytometrysystemisfullymodular,fortheneedsoftodayandbeyond.多色分析及分选；多色分析及分选；BDFACStationTMSystem数据管理系统；数据管理系统；灵活性及可升级性；灵活性及可升级性；非矩形分选窗口。非矩形分选窗口。FACS Vantage DiVaFACSAriaTheBDFACSAriaTMcellsortersetsanewstandardforhighperformanceflowcytometry.Basedonarevolutionarynewdesignininstrumentation,thiseasy-to-usebenchtopsystemdelivershigh-speedsortingandmulticoloranalysis.TheBDFACSAriainstrumentisthefirstbenchtopsorterthatincorporatesafixed-alignmentcuvetteflowcell.Thisnewflowcellprovidessuperiorfluorescencesensitivity.Thefixedopticalsystemoffersfreedomfrominstrumentmaintenanceandalignment.SortsetupandsortmonitoringfeaturesinthesystemsoftwaremaketheBDFACSAriainstrumenteasytouse.BDTMAccuDropisintegratedintothesystemforquickandaccuratedrop-delaydetermination.Streammonitoringofthebreakoffpointandclogdetectionareincorporatedforwalkawaysorting.第一个第一个benchtop高速分选仪，有固定的线性流动细胞杯；高速分选仪，有固定的线性流动细胞杯；Cuvette（小杯）（小杯）flowcell更好的荧光敏感性；更好的荧光敏感性；多多至至空空气气制制冷冷的的3根根激激光光（488-nm,633-nm,and407-nm波长）；波长）；数字化获取速率高达数字化获取速率高达70,000events/second；多色分析，最多可达到多色分析，最多可达到15个参数；个参数；2路和路和4路批量分选装置；路批量分选装置；OptionalBDTMAutomatedCellDepositionUnit(ACDU)用用来来进进行行分分选选到到BDMultiwellTM板板或或光光镜镜的的载载玻玻片片上；上；可获得的气雾剂管理选择（可获得的气雾剂管理选择（AvailableBDTM）；）；无需特别的设备。无需特别的设备。FCM自动细胞分离器自动细胞分离器BD FACS Lyse Wash Assistant BD FACS Lyse Wash Assistant with Larger Tank IVDwith Larger Tank IVDFeatures of the BD FACS Lyse/Wash AssistantwithLargerTankOption（特点）：（特点）：Lyses（溶解）（溶解）Mixes（混合）（混合）Washes（洗涤）（洗涤）Incubates（孵育）（孵育）Fixes（固定）（固定）RemovesRBCs,hemoglobin,platelets,andunboundantibody（去去除除红红细细胞胞、血血红红蛋蛋白白、血血小小板板和未结合的抗体）。和未结合的抗体）。Saves valuable time when compared to manualmethod（与手工方法比较，节省大量宝贵时间）。（与手工方法比较，节省大量宝贵时间）。Processes four full loader racks(160 samples)withouthavingtochangefluids（处处理理160份份样样本本而而不不用更换液体）。用更换液体）。TheBDFACSLyse/WashAssistant（本本系系统统）使使样样本本准准备备自自动动化化。它它可可溶溶解解、混混合合、洗洗涤涤及及固固定定样样品品，使使你轻松进行流式细胞仪分析。你轻松进行流式细胞仪分析。应应用用更更大大的的tanks选选择择，可可使使实实验验室室效效率率显显著著提提高高。你你可可同同时时运运行行4个个loaderracks(160个个样样本本)而而不不必必更更换换液液体体。较较大大的的tanks可可轻轻松松与与LWA（本本仪仪器器）融融为为一一体体，且且较较大的大的tanks垂直放置于一个箱体内最大程度地节省了空间。垂直放置于一个箱体内最大程度地节省了空间。选选择择5个个既既定定程程序序之之一一或或创创建建多多至至10个个客客户户程程序序以以满满足足您您实实验验室室的的需需要要。同同时时可可处处理理最最多多40份份样样本本。获获专专利利的的细细胞胞洗洗涤涤技技术术省省去去了了样样本本需需转转到到离离心心机机进进行行离离心心。这这样增加了自由时间同时提高了实验室效率）。样增加了自由时间同时提高了实验室效率）。本仪器系统：强大的自动化样本准备解决方案。本仪器系统：强大的自动化样本准备解决方案。BD MediMachine SystemBDMedimachineSystemTheBDTMMedimachinesystemisasamplepreparationsystemforthe automated,mechanical disaggregation of solid animal or planttissuesforflowcytometricanalysis,cellculture,orDNAamplification.The BD Medimachine system consists of three components:theMedimachine,Medicons,andFilcons.Variousporesizesofdisposable,sterile,and non-sterile Medicons and Filcons allow the operator tooptimize experimental conditions to suit the tissue under study,ensuringclean,viablepreparationsofsinglecells,cellclusters,orcellnuclei.Theprocedureisfastandsimple.FeaturesoftheBDMedimachineSystemPreparestissuequicklyandautomaticallyStandardizestissuedisaggregationIseasytouseCanbeusedwithorwithoutenzymesBD FACS Aria III持续创新的流式细胞分选仪持续创新的流式细胞分选仪 BD FACSAria IIInBDFACSAriaIII是基于专利的稳定性光路技术、卓越是基于专利的稳定性光路技术、卓越的多色分析和分选性能、非凡的自动化操作的基础上创新的多色分析和分选性能、非凡的自动化操作的基础上创新而成而成最新一代流式细胞分选平台最新一代流式细胞分选平台，是，是BDFACSAria系列系列高端流式细胞分选仪在分选领域的最新成功力作。高端流式细胞分选仪在分选领域的最新成功力作。n自自2003年第一台年第一台BDFACSAria问世以来，问世以来，每一次更新换每一次更新换代都使复杂的分选应用扩展到更加宽广的研究领域，拓展代都使复杂的分选应用扩展到更加宽广的研究领域，拓展了更广的应用范围。现在，全新的了更广的应用范围。现在，全新的BDFACSAriaIII功能功能更强大、性能更可靠、拥有超乎想象的可操作性。更强大、性能更可靠、拥有超乎想象的可操作性。详细参数指标详细参数指标n全球第一台台式高速细胞分选仪，使用石英杯流动检测池固定光路校准全球第一台台式高速细胞分选仪，使用石英杯流动检测池固定光路校准技术，不需每日调整光路，仪器随开随用。技术，不需每日调整光路，仪器随开随用。n石英杯流动检测池荧光检测灵敏度度及佳，石英杯流动检测池荧光检测灵敏度度及佳，125 MESF;n可以使用达三根激光：激光波长为可以使用达三根激光：激光波长为488nm、633nm和和407nm.n获取速度达获取速度达70,000细胞细胞/秒，分析速度达秒，分析速度达50,000细胞细胞/秒秒;n多色分析，分析参数可达多色分析，分析参数可达15色之多色之多;n完全数字化电子处理系统，分辨率达完全数字化电子处理系统，分辨率达262,144道，分选精度达道，分选精度达1/32液滴液滴;n液流系统车装载鞘液、废液和洗液，液流自动控制系统，软件自动液流系统车装载鞘液、废液和洗液，液流自动控制系统，软件自动清洗程序清洗程序;n进样仓自动加压，自动混匀样本，自动冲洗进样管路进样仓自动加压，自动混匀样本，自动冲洗进样管路;n喷嘴选择喷嘴选择70mm或或100mm，满足绝大多数细胞分选的要求，喷，满足绝大多数细胞分选的要求，喷嘴拆换简便、精确嘴拆换简便、精确;n两管或四管分选，可以使用多种规格的收集管两管或四管分选，可以使用多种规格的收集管;n配件配件BD ACDU装置，可以在微孔板或载波片上定量分选细胞装置，可以在微孔板或载波片上定量分选细胞;n软件自动仪器控制和计算分选设置，液滴监控，自动检查堵塞软件自动仪器控制和计算分选设置，液滴监控，自动检查堵塞;n样本和分选细胞冷却系统样本和分选细胞冷却系统;n配件配件BD AMO，工作时控制浮质，避免污染，工作时控制浮质，避免污染;n工作无特殊环境要求，不需要额外辅助设备工作无特殊环境要求，不需要额外辅助设备.技术参数技术参数nBD FACSAria流式细胞分选仪为流式细胞仪高速分流式细胞分选仪为流式细胞仪高速分选和多色分析技术设定了更新更高的标准。仪器的设计采选和多色分析技术设定了更新更高的标准。仪器的设计采用全新理念，极大地简化了高速分选和多色分析的操作和用全新理念，极大地简化了高速分选和多色分析的操作和实验要求。实验要求。nBD FACSAria流式细胞仪是全球独一无二的台式高流式细胞仪是全球独一无二的台式高速细胞分选仪，使用石英杯流动检测池固定光路校准技术。速细胞分选仪，使用石英杯流动检测池固定光路校准技术。其荧光检测灵敏度度极佳，而仪器维护和调校却非常简单。其荧光检测灵敏度度极佳，而仪器维护和调校却非常简单。nBD FACSAria流式细胞仪系统软件的分选设定和监流式细胞仪系统软件的分选设定和监测功能大大简化了操作。仪器内置的测功能大大简化了操作。仪器内置的BD AccuDrop系系统可以快速准确地确定液滴延迟时间。液流监测系统自动统可以快速准确地确定液滴延迟时间。液流监测系统自动监测液流断点，检查堵塞，监测液流断点，检查堵塞，实现了细胞分选的无人操作实现了细胞分选的无人操作。流流式细胞术是对单个细胞和其他生物微粒进行式细胞术是对单个细胞和其他生物微粒进行快速定量分析和分选的学问。这种分析和分选是快速定量分析和分选的学问。这种分析和分选是一种过程。这个过程中经过处理的细胞和微粒被一种过程。这个过程中经过处理的细胞和微粒被包在鞘液中通过一个聚焦的光源被激发出散射光包在鞘液中通过一个聚焦的光源被激发出散射光荧光，进而通过各种光学敏感元件测量这些光强荧光，进而通过各种光学敏感元件测量这些光强度达到测量其物理性质和化学性质的目的，并可度达到测量其物理性质和化学性质的目的，并可根据这些性质分选出高纯度的细胞亚群。根据这些性质分选出高纯度的细胞亚群。实现这个过程的仪器叫流式细胞计。实现这个过程的仪器叫流式细胞计。二、流式细胞术的一般介绍二、流式细胞术的一般介绍1.什么是流式细胞术？什么是流式细胞术？流式细胞术（流式细胞术（FlowCytometry，FCM）利用流式细胞仪对处在快速直线流动状态中的利用流式细胞仪对处在快速直线流动状态中的单细胞或生物颗粒进行多参数、快速定量分析，单细胞或生物颗粒进行多参数、快速定量分析，同时对特定群体加以分选的现代细胞分析技术。同时对特定群体加以分选的现代细胞分析技术。流式细胞仪流式细胞仪（FlowCytometer)集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机技术、细胞荧光化学技术、单克隆电子计算机技术、细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的一种新型高科技仪器。抗体技术为一体的一种新型高科技仪器。只要是只要是单细胞悬液单细胞悬液均可分析均可分析高速：高速：分析速度最高达分析速度最高达上万个细胞上万个细胞/秒秒单细胞中单细胞中同时同时测定测定多个参数多个参数精度高、准确性好精度高、准确性好（与传统荧光镜相比）（与传统荧光镜相比）当代最先进的当代最先进的细胞定量分析细胞定量分析技术。技术。同时测定同时测定液相中多种可溶性成分液相中多种可溶性成分：流式微球芯：流式微球芯片技术片技术2.FCM 特点：特点：FSC前向角散射光前向角散射光(ForwardLightScatter)SSC侧向角散射光侧向角散射光(SideScatter)FL1荧光荧光1(Fluorescence1)FL2荧光荧光2(Fluorescence2)FLn荧光荧光n(Fluorescencen)3.流式细胞计的参数流式细胞计的参数(原理还要介绍）原理还要介绍）细胞的相对大小和截面积的大小。细胞的相对大小和截面积的大小。因为在前向主要为光的衍射作用，这因为在前向主要为光的衍射作用，这一方向细胞经过激光后形成衍射环。一方向细胞经过激光后形成衍射环。测量光波长定了，喷嘴和前向的距离测量光波长定了，喷嘴和前向的距离不变后。细胞的大小和衍射环大小有不变后。细胞的大小和衍射环大小有一定关系。要注意一定关系。要注意FSCSSC点图，点图，有时它含许多有意义的内容。有时它含许多有意义的内容。4.FSC的物理意义的物理意义双激光七参数流式细胞计光路示意图双激光七参数流式细胞计光路示意图 三激光八参数流式细胞计光路示意图三激光八参数流式细胞计光路示意图1细胞细胞DNA含量、倍体及细胞周期分析；含量、倍体及细胞周期分析；2细胞内钙离子浓度、细胞内钙离子浓度、pH测定。测定。3检测癌基因与抗癌基因表达在肿瘤发生、检测癌基因与抗癌基因表达在肿瘤发生、发展过程中的作用；发展过程中的作用；4细胞凋亡；细胞凋亡；5化疗药物作用机制及疗效评价；化疗药物作用机制及疗效评价；6白细胞分型、白血病、淋巴瘤研究；白细胞分型、白血病、淋巴瘤研究；7网织红细胞计数，血小板疾病诊断；网织红细胞计数，血小板疾病诊断；8HLA群体分析；群体分析；9AIDS研究等。研究等。10细胞分选细胞分选三、主要功能及适用领域三、主要功能及适用领域细胞生物学细胞生物学细胞生物学细胞生物学免疫学免疫学免疫学免疫学遗传学遗传学遗传学遗传学药理学药理学药理学药理学肿瘤学肿瘤学肿瘤学肿瘤学血液学血液学血液学血液学病理学病理学病理学病理学临床检验临床检验临床检验临床检验植物学植物学植物学植物学海洋生物学海洋生物学海洋生物学海洋生物学流式细胞术应用学科领域：流式细胞术应用学科领域：临床研究：临床研究：1.1.1.1.淋巴细胞亚群测定淋巴细胞亚群测定淋巴细胞亚群测定淋巴细胞亚群测定（绝对数、相对数）（绝对数、相对数）（绝对数、相对数）（绝对数、相对数）2.2.2.2.血小板分析血小板分析血小板分析血小板分析（活化、聚集、微粒、膜糖蛋白）（活化、聚集、微粒、膜糖蛋白）（活化、聚集、微粒、膜糖蛋白）（活化、聚集、微粒、膜糖蛋白）3.3.3.3.网织红细胞分析：网织红细胞分析：网织红细胞分析：网织红细胞分析：派若宁派若宁派若宁派若宁Y Y Y Y标记，测定标记，测定标记，测定标记，测定ReticulocyteReticulocyteReticulocyteReticulocyte中中中中RNARNARNARNA4.4.4.4.白血病、淋巴瘤免疫分型：白血病、淋巴瘤免疫分型：白血病、淋巴瘤免疫分型：白血病、淋巴瘤免疫分型：多色标记检测膜或胞多色标记检测膜或胞多色标记检测膜或胞多色标记检测膜或胞+质内抗原质内抗原质内抗原质内抗原5.HLA-B275.HLA-B275.HLA-B275.HLA-B27分析：分析：分析：分析：强直性脊柱炎诊断参考依据强直性脊柱炎诊断参考依据强直性脊柱炎诊断参考依据强直性脊柱炎诊断参考依据6.PNH6.PNH6.PNH6.PNH诊断诊断诊断诊断（阵发性睡眠性血红蛋白尿）（阵发性睡眠性血红蛋白尿）（阵发性睡眠性血红蛋白尿）（阵发性睡眠性血红蛋白尿）：检测：检测：检测：检测CD55CD55、CD59CD597.7.7.7.人类同种异体器官移植中应用人类同种异体器官移植中应用人类同种异体器官移植中应用人类同种异体器官移植中应用（供体选择、术后排斥反应监测、（供体选择、术后排斥反应监测、（供体选择、术后排斥反应监测、（供体选择、术后排斥反应监测、指导临床治疗）指导临床治疗）指导临床治疗）指导临床治疗）8.8.8.8.细胞因子测定细胞因子测定细胞因子测定细胞因子测定（肿瘤、肾炎、感染、自身免疫病、超敏反应、移（肿瘤、肾炎、感染、自身免疫病、超敏反应、移（肿瘤、肾炎、感染、自身免疫病、超敏反应、移（肿瘤、肾炎、感染、自身免疫病、超敏反应、移植排斥反应等）植排斥反应等）植排斥反应等）植排斥反应等）9.AIDS9.AIDS9.AIDS9.AIDS诊断与治疗：诊断与治疗：诊断与治疗：诊断与治疗：CD4CD4CD4CD4+T T T T数量减少、数量减少、数量减少、数量减少、CD8CD8CD8CD8+T T T T中中中中CD38CD38CD38CD38分子数增多分子数增多分子数增多分子数增多10.10.10.10.疗效评价疗效评价疗效评价疗效评价（寄生虫、营养失调、创伤、手术、放化疗、疫苗）（寄生虫、营养失调、创伤、手术、放化疗、疫苗）（寄生虫、营养失调、创伤、手术、放化疗、疫苗）（寄生虫、营养失调、创伤、手术、放化疗、疫苗）11.flow-FISH11.flow-FISH11.flow-FISH11.flow-FISH法测定端粒长度：法测定端粒长度：法测定端粒长度：法测定端粒长度：用荧光标记核酸用荧光标记核酸用荧光标记核酸用荧光标记核酸-（CCCTAACCCTAACCCTAACCCTAA）3 3 3 3 端粒序列特异探针，应用于肿瘤研究端粒序列特异探针，应用于肿瘤研究端粒序列特异探针，应用于肿瘤研究端粒序列特异探针，应用于肿瘤研究 基础研究：基础研究：1.1.淋巴细胞功能研究：淋巴细胞功能研究：淋巴细胞功能研究：淋巴细胞功能研究：Th1Th1、Th2Th2、Tc1Tc1、Tc2Tc2、NK1NK1、NK2NK2、NKT NKT 2.2.树突状细胞（树突状细胞（树突状细胞（树突状细胞（DCDC）研究：）研究：）研究：）研究：3.3.造血干细胞研究造血干细胞研究造血干细胞研究造血干细胞研究4.4.细胞周期分析：细胞周期分析：细胞周期分析：细胞周期分析：GG0 0GG1 1、S S、GG2 2MM期的期的期的期的DNADNA含量含量含量含量5.5.细胞细胞细胞细胞DNADNA倍体性分析倍体性分析倍体性分析倍体性分析（肿瘤异倍体）（肿瘤异倍体）（肿瘤异倍体）（肿瘤异倍体）6.6.细胞凋亡分析细胞凋亡分析细胞凋亡分析细胞凋亡分析（Caspase-3Caspase-3、AnnexinAnnexin/PI/PI、TUNNELTUNNEL、APO-BrdUAPO-BrdU、APO-DIRECTAPO-DIRECT）7.7.凋亡相关蛋白分析凋亡相关蛋白分析凋亡相关蛋白分析凋亡相关蛋白分析（FasFas、Bcl-2Bcl-2、P53P53）8.8.细胞功能研究细胞功能研究细胞功能研究细胞功能研究（细胞内（细胞内（细胞内（细胞内PHPH值、细胞内钙离子流、细胞值、细胞内钙离子流、细胞值、细胞内钙离子流、细胞值、细胞内钙离子流、细胞膜电位、线粒体膜电位）膜电位、线粒体膜电位）膜电位、线粒体膜电位）膜电位、线粒体膜电位）9.9.多药耐药基因研究（多药耐药基因研究（多药耐药基因研究（多药耐药基因研究（MDRMDR）：）：）：）：P170P170蛋白、蛋白、蛋白、蛋白、MDR-1MDR-1基因检测基因检测基因检测基因检测10.10.肿瘤相关基因表达研究肿瘤相关基因表达研究肿瘤相关基因表达研究肿瘤相关基因表达研究11.RNA11.RNA测定测定测定测定12.DNA12.DNA测定测定测定测定13.13.总蛋白测定总蛋白测定总蛋白测定总蛋白测定14.14.癌基因、抑癌基因表达产物测定癌基因、抑癌基因表达产物测定癌基因、抑癌基因表达产物测定癌基因、抑癌基因表达产物测定：(Myc(Myc基因基因基因基因组、组、组、组、rasras基因组、基因组、基因组、基因组、P53P53、c-erbB2c-erbB2基因、基因、基因、基因、HER-2/newHER-2/ne