液相色谱常见问题及其对策.pptx

SHIMADZU Solutions for Science Since 1875液相色谱常见问题及其对策液相色谱常见问题类型液相色谱常见问题类型l A.压力异常（偏高、波动）压力异常（偏高、波动）l B.漏液漏液 l C.保留时间漂移保留时间漂移l D.基线问题（漂移、噪声）基线问题（漂移、噪声）l E.峰形异常峰形异常SHIMADZU Solutions for Science Since 1875现象：无压力，流动相不流动可能原因 1、保险丝断或电源问题 2、泵头内有空气或流动相不足 3、漏液 4、单向阀损坏 5、柱塞杆折断 6、压力传感器损坏(流动相流动正常，但无压力)液相色谱常见问题及其对策压力异常压力异常SHIMADZU Solutions for Science Since 1875现象：压力持续偏高或不断上升 1、流速设定过高 2、保护柱或柱子筛板堵塞 3、流动相使用不当或有缓冲盐析出 4、色谱柱选择不当 5、进样阀损坏 6、线路过滤器堵塞液相色谱常见问题及其对策压力异常压力异常SHIMADZU Solutions for Science Since 1875现象：压力持续偏低 1、流速设定过低 2、色谱柱选择不当 3、柱温过高 4、系统漏液液相色谱常见问题及其对策压力异常压力异常SHIMADZU Solutions for Science Since 1875现象压力持续偏低 1、流速设定过低 2、色谱柱选择不当 3、柱温过高 4、系统漏液液相色谱常见问题及其对策压力异常压力异常SHIMADZU Solutions for Science Since 1875现象：压力波动可能原因 1、使用了梯度洗脱 2、脱气不充分 3、系统漏液 4、泵头中有气泡 5、柱塞密封圈损坏 6、单向阀损坏液相色谱常见问题及其对策压力异常压力异常SHIMADZU Solutions for Science Since 1875接头处漏液 1、接头处松动 2、接头磨损 3、接头被污染 4、部件不匹配 液相色谱常见问题及其对策漏液漏液SHIMADZU Solutions for Science Since 1875泵漏液 1、单向阀松动 2、泵密封损坏 3、放空阀损坏 4、接头松动（不要拧的太紧）液相色谱常见问题及其对策漏液漏液SHIMADZU Solutions for Science Since 1875泵漏液 1、单向阀松动 2、泵密封损坏 3、放空阀损坏 4、接头松动（不要拧的太紧）液相色谱常见问题及其对策漏液漏液SHIMADZU Solutions for Science Since 1875进样阀漏液 可能原因 1、进样针尺寸不合适 2、定量环堵塞 3、废液管堵塞 4、废液管产生虹吸 5、进样口密封松动 6、转子密封损坏液相色谱常见问题及其对策漏液漏液SHIMADZU Solutions for Science Since 1875检测器漏液 可能原因 1、流通池垫片损坏 2、流通池透镜破碎 3、手紧接头处漏液 4、废液管堵塞 5、流通池堵塞液相色谱常见问题及其对策漏液漏液SHIMADZU Solutions for Science Since 1875保留时间漂移保留时间漂移 可能原因 1、柱温变化 2、流动相组分变化 3、色谱柱没有平衡 4、流速变化 5、泵中有气泡 6、流动相选择不当 7、键合相流失 8、缓冲容量不够液相色谱常见问题及其对策保留时间漂移保留时间漂移SHIMADZU Solutions for Science Since 1875基线漂移基线漂移 可能原因 1、温度波动 2、流动相不均匀(脱气，使用纯度更高的溶剂)3、流通池被污染或有气泡 4、流通池窗口破裂 5、流动相配比不当或流速变化 6、柱子平衡（约3060min）液相色谱常见问题及其对策基线问题基线问题SHIMADZU Solutions for Science Since 1875基线漂移基线漂移 可能原因 7、流动相污染，变质或由低品质溶剂配成 8、样品中有强保留的物质以馒头样峰被洗出 9、检测器没有设定在最大吸收波长处液相色谱常见问题及其对策基线问题基线问题SHIMADZU Solutions for Science Since 1875基线噪声（规则的）基线噪声（规则的）可能原因 1、流动相、泵、检测器中有气泡 2、有地方漏液 3、流动相混和不均匀 4、温度影响（检测器和柱温差别太大）5、其他电子设备的影响 液相色谱常见问题及其对策基线问题基线问题SHIMADZU Solutions for Science Since 1875基线噪声（不规则的）基线噪声（不规则的）可能原因 1、流动相污染、变质或由低质溶剂配成 2、有地方漏液 3、流动相各溶剂不相溶或混和不均匀 4、流通池污染 5、检测池能量不足 6、系统内有气泡液相色谱常见问题及其对策基线问题基线问题SHIMADZU Solutions for Science Since 1875前沿峰、拖尾峰前沿峰、拖尾峰 可能原因 1、柱塞板堵塞 2、色谱柱塌陷 3、柱外效应 4、干扰峰 5、缓冲不足或不合适 6、化学或次级保留（硅羟基效应）液相色谱常见问题及其对策峰形异常峰形异常SHIMADZU Solutions for Science Since 1875前沿峰、拖尾峰前沿峰、拖尾峰 可能原因 7、重金属污染 8、样品溶剂选择不当 9、样品过载 10、柱温过低液相色谱常见问题及其对策峰形异常峰形异常SHIMADZU Solutions for Science Since 1875分叉峰分叉峰 可能原因 1、保护柱或分析柱污染 2、样品溶剂不溶于流动相液相色谱常见问题及其对策峰形异常峰形异常SHIMADZU Solutions for Science Since 1875峰展宽1.进样体积过大2.流动相粘度过高3.检测池体积过大4.保留时间过长5.柱外体积过大6.样品过载液相色谱常见问题及其对策峰形异常峰形异常SHIMADZU Solutions for Science Since 1875峰变形峰变形 可能原因 1、样品过载 2、样品溶剂选择不当液相色谱常见问题及其对策峰形异常峰形异常SHIMADZU Solutions for Science Since 1875鬼峰1、进样阀残余峰2、样品中未知物3、柱未平衡4、水污染5、三氟乙酸氧化液相色谱常见问题及其对策峰形异常峰形异常SHIMADZU Solutions for Science Since 1875液相色谱容易出问题的部件维护流程图吸滤头单向阀柱塞密封圈线路过滤器手动进样器检测器SHIMADZU Solutions for Science Since 1875材料：不锈钢烧结，孔径10um故障：堵塞表现：管路中不断有气泡生成措施：用520的稀硝酸，超声波清洗，再用蒸馏水清洗注意点：吸滤头拆下时不必将塑料管剪断吸滤头吸滤头液相色谱容易出问题的部件SHIMADZU Solutions for Science Since 1875LC-10ATvp泵：串联 式往复泵LC-10ADvp泵：并联式 往复泵液相色谱容易出问题的部件SHIMADZU Solutions for Science Since 1875液相色谱容易出问题的部件单向阀结构单向阀结构抛光面透明塑料垫片宝石球吸液冲程排液冲程出口单向阀进口单向阀泵头流动相单向阀原理单向阀原理吸液冲程排液冲程出口单向阀进口单向阀泵头SHIMADZU Solutions for Science Since 1875液相色谱容易出问题的部件故障1：宝石球粘附于垫片表现：泵无法吸液或排液，流路不通措施：1）用针筒抽出口单向阀以产生负压，使宝石球与垫片分开 2）拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超声波清洗单向阀单向阀SHIMADZU Solutions for Science Since 1875液相色谱容易出问题的部件故障2：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好表现：系统压力波动大措施：拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超 声波清洗单向阀单向阀SHIMADZU Solutions for Science Since 1875故障：密封圈磨损而导致 密封不良现象：系统压力波动大或 漏夜措施：更换密封圈注意点：更换密封圈 拆卸泵头前，柱塞杆 复位 （PSET）柱塞密封圈柱塞密封圈流动相泵头清洗管路柱塞杆密封圈液相色谱容易出问题的部件SHIMADZU Solutions for Science Since 1875故障：堵塞现象：系统压力波动大或压 力偏高措施：5稀硝酸，超声波清 洗判断依据：关闭排液阀，断开出口管路，设定流速1mL/min，如压力3kgf/cm2，则可能堵塞。线路过滤器线路过滤器排液阀压力传感器线路过滤器流动相液相色谱容易出问题的部件SHIMADZU Solutions for Science Since 1875手动进样阀 故障：转子密封损坏 现象：漏液 原因：a 拧的太紧 b 样品太脏 c 针头损坏或不使用液相专用针 解决措施：更换转子密封，并在使用 时注意保养液相色谱容易出问题的部件SHIMADZU Solutions for Science Since 1875液相色谱容易出问题的部件手动进样阀 故障：载样困难 原因：a 定量环堵塞 b 进样器污染 解决措施：清洗或更换定量环、进样器SHIMADZU Solutions for Science Since 1875柱子 故障：系统高压、峰型变差（拖尾峰、前沿峰、分叉峰），保留时间的改变 解决措施：清洗 正相柱，正庚烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇 反相柱，甲醇、乙腈、氯仿、异丙醇、0.05M稀硫酸液相色谱容易出问题的部件SHIMADZU Solutions for Science Since 1875分 析 柱 的 维 护1、在使用新柱之前，最好用强溶剂在低流量下(0.2-0.3 ml/min)冲洗 30 mins，长时间未用的分析柱也要同样 处理2、定期使用强溶剂冲洗柱子3、使用缓冲盐时，要先用水冲洗，再用有机溶剂冲洗4、净化样品5、分离条件6、不使用时，要盖上盖子，避免固定相干枯7、使用预柱8、避免流动相组成及极性的剧烈变化9、避免压力脉冲的剧烈变化液相色谱容易出问题的部件SHIMADZU Solutions for Science Since 1875液相色谱容易出问题的部件峰产生有肩或分叉的原因峰产生有肩或分叉的原因1.柱子劣化柱子劣化 （进口处产生不均匀的空隙）（进口处产生不均匀的空隙）2.样品劣化样品劣化 （生成氧化物、分解物等）（生成氧化物、分解物等）判断标准判断标准 所有的峰都产生有肩峰或分叉时则为柱子劣化所有的峰都产生有肩峰或分叉时则为柱子劣化SHIMADZU Solutions for Science Since 1875延长柱寿命方法：延长柱寿命方法：倒冲柱倒冲柱 换过滤片换过滤片 修补柱头修补柱头 液相色谱容易出问题的部件SHIMADZU Solutions for Science Since 1875液相色谱容易出问题的部件柱的补修柱的补修SHIMADZU Solutions for Science Since 1875填料的取出填料的取出液相色谱容易出问题的部件SHIMADZU Solutions for Science Since 1875恢复例恢复例液相色谱容易出问题的部件SHIMADZU Solutions for Science Since 1875更换氘灯更换氘灯（紫外检测器）判断氘灯能量：设定220nm波长，检查参比池能量，如 能量低于800，需更换氘灯。操作注意点：不要用手直接接触氘灯表面液相色谱容易出问题的部件SHIMADZU Solutions for Science Since 1875液相色谱容易出问题的部件故障：样品池受污表现：样品池和参比池能量相差较大检查方法：设定250nm波长，通甲醇或水，查看SMPL EN和 REF EN，如两者相差较大，则样品池受污。措施：用针筒注入异丙醇，清洗样品池；如污染严重，拆开样品池，将透镜等放入异丙醇中超声波清洗。紫外检测器紫外检测器SHIMADZU Solutions for Science Since 1875其他问题溶剂的过滤溶剂的过滤 滤膜类型：聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐。醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶剂。尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可以用于强酸，不适 用于二甲基甲酰胺。再生纤维素滤膜：蛋白吸收低，同样适用于水溶性样品和有机溶剂SHIMADZU Solutions for Science Since 1875脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 气泡对测定的影响：1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积 2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形 3）检测器中的气泡产生基线波动其他问题SHIMADZU Solutions for Science Since 1875脱气的目的脱气的目的 1.防止由气泡的产生引起的故障 2.防止由溶解（在液体中的）气体量 的变动引起的检测不稳定程度 1）示差折射率检测器 *使折射率变化 2）UV检测器（200nm以下）*溶解氧气有吸收 3）荧光检测器 *溶解氧气有消光作用其他问题SHIMADZU Solutions for Science Since 1875其他问题脱气的方法1.超身波脱气法超身波脱气法2.He清除法清除法3.使用氟树脂膜的减压脱气法使用氟树脂膜的减压脱气法SHIMADZU Solutions for Science Since 1875其他问题He清除法清除法调压阀调压阀排气阀排气阀往送液泵往送液泵流动相流动相过滤器过滤器SHIMADZU Solutions for Science Since 1875其他问题氟树脂膜氟树脂膜真空室真空室往送液泵往送液泵真空泵真空泵控制器控制器流动相流动相使用氟树脂膜的减压脱气法使用氟树脂膜的减压脱气法SHIMADZU Solutions for Science Since 1875其他问题梯度洗脱法的注意点梯度洗脱法的注意点1.流动相使用HPLC级有机溶剂。2.查看空白实验的数据。3.遵守分析周期。（最初的分析数据不采用）SHIMADZU Solutions for Science Since 1875其他问题缓冲液缓冲液 选择缓冲液的步骤 1.确定最佳分离状态时的流动相pH 2.选择具有与流动相的pH相近的pKa 的缓冲液 （即使浓度稀也具有较强能力的缓冲液）3.确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收 （在波长210nm附近进行检测时，不能用醋酸和 柠檬酸的缓冲液）SHIMADZU Solutions for Science Since 1875一些代表性弱酸的一些代表性弱酸的pKa pK1 pK2 pK3 醋酸 4.87 柠檬酸 3.13 4.76 6.40 磷酸 2.16 7.2 1 12.32其他问题