芎冰滴丸的药学研究.pptx

芎冰滴丸的药学研究研究生姓名：研究生姓名：研究生姓名：研究生姓名：888888指导教师：指导教师：指导教师：指导教师：888888888888888888888888引言选题目的选题意义研究总体思路选题依据正文川芎挥发油的提取工艺研究川芎挥发油的质量标准、稳定性研究芎冰滴丸的研制芎冰滴丸的质量评价研究初步稳定性试验1引言 1.11.1选题目的选题目的 偏头痛在祖国医学中属于偏头痛在祖国医学中属于“头风头风”、“脑风脑风”、“偏头风偏头风”范畴，范畴，是一种特殊类型的发作性颅是一种特殊类型的发作性颅内外血管运动和神经功能失调引起的慢性复发性内外血管运动和神经功能失调引起的慢性复发性疾病，主要表现为一侧或双侧头部搏动性疼痛，疾病，主要表现为一侧或双侧头部搏动性疼痛，并伴有恶心呕吐等植物神经症状。偏头痛并伴有恶心呕吐等植物神经症状。偏头痛发病率发病率较高，且反复发作、难以治愈，较高，且反复发作、难以治愈，影响患者的正常影响患者的正常生活和工作，生活和工作，所以治疗该病一直是中医学界的重所以治疗该病一直是中医学界的重要研究课题之一。要研究课题之一。目前，中医大多在辨证论治的基础上进行治疗，目前，中医大多在辨证论治的基础上进行治疗，取得了较好的疗效，但普通剂型难于适应现代社取得了较好的疗效，但普通剂型难于适应现代社会人们较快的生活节奏。会人们较快的生活节奏。选择选择川芎挥发油和冰片川芎挥发油和冰片配伍组方，通过对该处方配伍组方，通过对该处方制剂工艺、质量标准及体外评价的研究，制剂工艺、质量标准及体外评价的研究，以期为以期为临床提供一种疗效确切、服用方便的中药复方滴临床提供一种疗效确切、服用方便的中药复方滴丸制剂，丸制剂，能迅速缓解疼痛，减轻患者痛苦，能迅速缓解疼痛，减轻患者痛苦，更好更好地为人类健康服务。同时，地为人类健康服务。同时，通过对川芎挥发油及通过对川芎挥发油及其新剂型的研究，其新剂型的研究，使川芎的系列产品能达到整合使川芎的系列产品能达到整合资源，综合利用的目的。资源，综合利用的目的。1.2选题意义1.2.1临床需要偏头痛是一种临床常见的多发病，因本病发病率较高，且反复发作，迁延难愈，疼痛剧烈，往往给患者带来极大痛苦，严重影响其日常生活与工作，因而找寻对偏头痛行之有效的防治方法是一项重要的课题。1.2.2市场需要市场需要 近三年来，中成药治疗偏头痛的研究有了新的发展。但很多品种开发时间较早，不时有副作用发生的报道，在临床上的应用受到一定的限制。本课题采用川芎挥发油和冰片所制的芎冰滴丸具有起效快、服用剂量小的优点，可适应临床长期多次用药的要求，具有良好的市场开发前景。1.2.3中药制剂现代化的需要滴丸滴丸是由药物与基质加热熔化后，滴入不相混溶是由药物与基质加热熔化后，滴入不相混溶的冷却液中，收缩冷凝成丸的一种速效剂型，具的冷却液中，收缩冷凝成丸的一种速效剂型，具有表面积大、溶出速度快、胃肠刺激小、服用方有表面积大、溶出速度快、胃肠刺激小、服用方便等优点。它便等优点。它可提高难溶性药物的生物利用度，可提高难溶性药物的生物利用度，还能容纳较多的液体，故易于使液体药物转变成还能容纳较多的液体，故易于使液体药物转变成固体制剂。固体制剂。针对本课题的目的，针对本课题的目的，确定选用固体分散技术将川确定选用固体分散技术将川芎挥发油与冰片制成滴丸的形式芎挥发油与冰片制成滴丸的形式。发挥速效作用，发挥速效作用，以适应中医急症治疗的需要。以适应中医急症治疗的需要。1.3选题依据1.3.1中医药对于偏头痛病因病机的认识历代医家关于偏头痛的病因病机论述颇多，多数学者认为历代医家关于偏头痛的病因病机论述颇多，多数学者认为风、火、痰、瘀是致病的重要因素。风寒侵袭、脉络瘀阻；风、火、痰、瘀是致病的重要因素。风寒侵袭、脉络瘀阻；情志不遂、气滞血瘀；脾失健运、痰浊阻窍；肝肾阴虚、情志不遂、气滞血瘀；脾失健运、痰浊阻窍；肝肾阴虚、肝火上扰为其病机。气血阴亏，脑窍失养也是发病的一个肝火上扰为其病机。气血阴亏，脑窍失养也是发病的一个关键。由此可以看出，关键。由此可以看出，偏头痛的发病常为虚实挟杂，即有偏头痛的发病常为虚实挟杂，即有风、火、痰、瘀作为致病要因，又有气虚、血亏、肝肾不风、火、痰、瘀作为致病要因，又有气虚、血亏、肝肾不足作为内在病理基础。足作为内在病理基础。偏头痛的病因虽有种种不同，但其发病机理确有共同之处，偏头痛的病因虽有种种不同，但其发病机理确有共同之处，即所谓即所谓“不通则痛不通则痛”，但其程度及性质上又各有其特征和，但其程度及性质上又各有其特征和差异，这为临床辨证论治提供了依据。差异，这为临床辨证论治提供了依据。根据以上分析，确定本处方主治从外感风邪、脑络瘀阻型根据以上分析，确定本处方主治从外感风邪、脑络瘀阻型偏头痛着手。偏头痛着手。1.3.2处方来源、组成及分析1.3.2.1处方来源川芎味薄气雄，性善疏通，川芎味薄气雄，性善疏通，其其祛风散寒止痛祛风散寒止痛、理气活血通、理气活血通络之功颇佳，络之功颇佳，又又秉升散之性，秉升散之性，能上行头目下行血海，为能上行头目，下行血海，为治诸经头痛之要药。治诸经头痛之要药。通过配伍，可用于风寒、风热、风湿、通过配伍，可用于风寒、风热、风湿、血瘀、血虚等各种头痛。以其为主药，治疗病久风寒入络、血瘀、血虚等各种头痛。以其为主药，治疗病久风寒入络、寒凝血瘀之顽固性的偏正头痛和三叉神经痛，更能起到意寒凝血瘀之顽固性的偏正头痛和三叉神经痛，更能起到意想不到的疗效。想不到的疗效。冰片味辛、苦，冰片味辛、苦，微寒，归心、脾、肺经。微寒，归心、脾、肺经。本草纲目本草纲目记记载：冰片载：冰片具具“通诸窍、散郁火通诸窍、散郁火”之功。中医理论认为，冰之功。中医理论认为，冰片片“芳香走窜芳香走窜”，“独行则势弱佐使则有功独行则势弱、佐使则有功”。冰片与冰片与川芎配伍可明显减轻缺血再灌注脑组织含水量和细胞间质川芎配伍可明显减轻缺血再灌注脑组织含水量和细胞间质水肿和神经细胞的损伤，对脑缺血再灌注所致脑组织超微水肿和神经细胞的损伤，对脑缺血再灌注所致脑组织超微结构的破坏也有明显的保护作用。结构的破坏也有明显的保护作用。两者配伍使用才能增强川芎对脑缺血再灌注损伤的保护作用。故确定了本课题的处方药物为川芎和冰片，由于川芎挥发油体现了川芎辛温芳香的性味，同时有类似川芎的祛风活血止痛之功效，故最终确定了制剂处方为：川芎挥发油、冰片。1.3.3处方中药物的现代研究情况1.3.3.11.3.3.1川芎川芎现代药理研究证明川芎挥发油中的藁本内酯现代药理研究证明川芎挥发油中的藁本内酯可抑可抑制血管平滑肌收缩，降低血压，制血管平滑肌收缩，降低血压，具有镇静、镇痛、具有镇静、镇痛、解痉解痉、抗惊厥、抗惊厥等作用，被认为是治疗偏头痛的物等作用，被认为是治疗偏头痛的物质基础。质基础。1.3.3.21.3.3.2冰片冰片冰片冰片含有龙脑和异龙脑。它在胃肠道吸收迅速，含有龙脑和异龙脑。它在胃肠道吸收迅速，极易透过血脑屏障极易透过血脑屏障进入脑内进入脑内，同时，同时冰片冰片可开放血可开放血脑屏障，促进脑屏障，促进某些水溶性大分子物质和某些水溶性大分子物质和药物药物透过透过血脑屏障血脑屏障进入脑内。进入脑内。（为具有（为具有“佐使之功佐使之功”的物质基础？）的物质基础？）药理作用方式可能与通过调节中枢神经组织中单药理作用方式可能与通过调节中枢神经组织中单胺类神经递质含量达到稳态平衡有关。胺类神经递质含量达到稳态平衡有关。1.4研究总体思路研究总体思路以传统中医药理论为指导，根据川芎挥发油和冰片主要有效成分的理化性质和药理作用，借鉴现代制剂成熟的研究方法、技术、思路与手段，进行中药复方滴丸的研制。其研究技术路线见下图。川芎川芎冰片冰片制剂处方制剂处方成型工艺成型工艺挥发油挥发油提取工艺提取工艺质量标准质量标准稳定性稳定性脱水工艺脱水工艺质量标准质量标准 稳定性稳定性 成品成品 2正文2.1川芎挥发油的提取工艺研究川芎挥发油是治疗头痛的主要有效成分，川芎挥发油是治疗头痛的主要有效成分，而川芎而川芎挥发油中挥发油中主要含有川芎总酞内酯类成分，主要含有川芎总酞内酯类成分，这些成这些成分的含量占药材的分的含量占药材的1%1%3%3%左右。川芎总酞内酯左右。川芎总酞内酯类成分中以藁本内酯和川芎内酯为主，类成分中以藁本内酯和川芎内酯为主，藁本内酯藁本内酯的含量可达的含量可达50%50%左右，因此左右，因此在对川芎挥发油进行在对川芎挥发油进行提取工艺研究过程中提取工艺研究过程中以挥发油得率和藁本内酯的以挥发油得率和藁本内酯的含量为指标，考察了含量为指标，考察了共水蒸馏法、重蒸馏法、石共水蒸馏法、重蒸馏法、石油醚提取法、乙醇提取法等油醚提取法、乙醇提取法等几种方法，几种方法，以期找到以期找到一种提取效率高、且藁本内酯含量高的提取方法。一种提取效率高、且藁本内酯含量高的提取方法。2.1.2实验方法与结果2.1.2.1药材产地的确定川芎是四川的道地药材，近年来，国内许多地区都开展了川芎生长、抚育及引种技术的研究，造成了川芎药材质量参差不齐的现状，为了保证成品质量的稳定性和均一性，对不同产地的川芎提取的挥发油的含量进行了测定，以确定最佳的产地。采用中国药典2005年版一部附录XD挥发油测定法第二法进行测定。结果见表1。表表1 不同产地挥发油含量测定结果不同产地挥发油含量测定结果批次产地药材量（g）挥发油量（ml药材中挥发油含量（%）（ml/g）平均值1都江堰60.0050.61.001.052都江堰60.0020.81.333都江堰59.9980.50.834彭州60.0030.40.670.955彭州59.9990.61.006彭州60.0000.71.177崇州60.0010.30.500.728崇州59.9980.40.679崇州60.0060.61.00 根据上述测定结果，都江堰产地川芎药材中挥发油含量相对于崇州和彭州更高，故选择都江堰川芎作为实验用药材。2.1.2.2挥发油提取方法的比较研究（1）提取方法 共水蒸馏法 重蒸馏法 石油醚提取法 乙醇提取法（2）实验结果 对不同提取方法所得的挥发油品质进行比较，结果见表2。表表2 不同提取方法所得挥发油的比较结果不同提取方法所得挥发油的比较结果实验方法外观性状提取时间（h）得油率（%）藁本内酯含量（%）共水蒸馏法金黄色的油状物180.3858.3重蒸馏法金黄色的油状物240.4253.8有机溶剂提取法黄褐色油状物243.023.6中性乙醇提取法棕黄色油状物241.032.8上述试验结果表明，采用共水蒸馏所得挥发油中藁本内酯含量最高，而有机溶剂等提取法纯度过低且有溶剂残留等问题，故选择共水蒸馏法进行提取。2.1.2.3共水蒸馏法提取川芎挥发油最佳工艺的确定以挥发油得率和藁本内酯含量为指标，采用以挥发油得率和藁本内酯含量为指标，采用L L9 9（3 34 4）正交正交试验对川芎挥发油提取工艺条件进行优选，试验对川芎挥发油提取工艺条件进行优选，为川芎挥发油为川芎挥发油的进一步研究提供科学依据。的进一步研究提供科学依据。（1 1）实验方法）实验方法根据影响挥发油提取的因素，根据影响挥发油提取的因素，选取浸泡时间（选取浸泡时间（A A）、提取）、提取时间（时间（B B）、加水量（）、加水量（C C）作为考察因素）作为考察因素，每个因素选择，每个因素选择3 3个水平，以挥发油的得率和藁本内酯含量为考察指标，设个水平，以挥发油的得率和藁本内酯含量为考察指标，设计计L L9 9（3 34 4）正交试验。）正交试验。因素水平表见表因素水平表见表3 3，试验结果及分析见表，试验结果及分析见表4 4和表和表5 5。表表3 因素水平表因素水平表水平ABCD浸泡时间（h）提取时间（h）加水量（倍）空白16682128103181012表表4 正交试验设计及结果正交试验设计及结果序号ABCD藁本内酯含量（%）挥发油收得率（%）评分1111155.400.3079.62122252.100.3873.043133355.490.3573.984212353.290.4186.485223157.060.3988.66231255.490.4591.937313260.320.49100.008321354.390.4691.659332158.690.4393.48j226.62266.08263.18261.68j267.01253.29253.00264.97j285.13259.39262.58252.11R58.5112.7910.1812.86表表5 方差分析表方差分析表方差来源离差平方和（SS）自由度（V）均方（MS）FPA598.122299.0620.10*B27.28213.640.92C21.75210.880.73D29.75214.88 从以上方差分析结果可以看出：A因素有显著的影响，影响因素ABC；且A3、B1、C1为佳，即最佳工艺为：加8倍量的水，浸泡18小时，共水蒸馏提取6小时。（3）验证实验 为了验证上述结果的准确性，以保证提取工艺的合理可行，称取川芎药材3份，每份500g，按上述确定的工艺条件，安排重复实验，实验结果见表6。表表6 验证实验结果验证实验结果方案试验号油中藁本内酯含量（%）挥发油得率（%）A3B1C1158.030.47259.210.45358.490.48 验证实验结果表明：此共水蒸馏法工艺稳定，具有重现性和可操作性。因此，最后确定实验方案为A3B1C1。即：加8倍量的水，浸泡18小时，共水蒸馏提取6小时。2.1.2.4挥发油脱水工艺的研究采用共水蒸馏法提取的川芎挥发油中含有一定量的水分，对采用共水蒸馏法提取的川芎挥发油中含有一定量的水分，对川芎挥发油的脱水工艺进行了研究川芎挥发油的脱水工艺进行了研究表表7 挥发油脱水工艺研究结果（挥发油脱水工艺研究结果（n=3）处理方法含水量（%）挥发油得率（%）藁本内酯含量（%）未处理前8.28100.0058.03冷冻分离1.0192.0361.29乙醚1.0589.3760.35石油醚（3060）1.2191.5659.97醋酸乙酯0.9585.1761.98 上述试验结果表明，采用冷冻分离法和石油醚萃取法所得挥发油损失都较小，且藁本内酯含量均较高。冷冻分离法为物理方法，简便，易行，不会使有机溶剂残留，不加热，故最终选择将其作为脱水方法进行川芎挥发油的脱水处理。2.2川芎挥发油的质量标准、稳定性研究川芎挥发油的质量标准、稳定性研究 2.2.2.1川芎挥发油质量标准研究（1）挥发油中功能基的鉴定：根据实验结果，鉴定出挥发油中含有酚类，醛类，内酯类及不饱和化合物。（2）物理常数测定 相对密度 暂定为0.89171.0899。折光率 暂定为1.36001.6641。pH值 暂定为3.834.67。酸值 暂定酸值为24.830.4。皂化值 暂定为201245。（3）川芎挥发油的TLC鉴别 取本品10mg，加甲醇20ml使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材1g，加乙醇20ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作为对照药材溶液。取藁本内酯对照品适量，加甲醇使溶解作为对照品溶液，照薄层色谱法（附录B）试验，以正己烷-醋酸乙酯（9:1）和石油醚-醋酸乙酯（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，结果见图4和图5。图图4 川芎挥发油的川芎挥发油的TLC鉴别鉴别 图图5川芎挥发油的川芎挥发油的TLC鉴别鉴别 展开剂：石油醚-醋酸乙酯（9：1）展开剂：正己烷-醋酸乙酯（9:1）1藁本内酯对照品；2川芎对照药材；3、4、5川芎挥发油 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5（4）川芎挥发油中藁本内酯的含量测定色谱条件色谱柱：Kromasil C18柱（4.6mm250mm）；流动相：甲醇-水（75：25）；流速：1ml/min；检测波长：280nm；灵敏度：0.01AUFS。在上述色谱条件下藁本内酯与其他组分均能达到基线分离（结果见图6、图7）。图图6 藁本内酯对照品的藁本内酯对照品的HPLC图图图图7 川芎挥发油的川芎挥发油的HPLC图谱图谱标准曲线的制备取藁本内酯对照品约20mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，再精密吸取1ml置25ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得（每1ml含32.032g藁本内酯）。分别吸取1、2、4、6、8、10l进样，测定，记录色谱图，测定峰面积，结果见下表。并以峰面积A对进样量C（g）回归得回归方程为：A=12684557.6513C-47471.5452，r=0.9999，结果见表13和图8。表表13 进样量与峰面积线性关系进样量与峰面积线性关系 进样量(g)0.0320320.0640640.1281280.1921920.2562560.32032峰面积3802397700581538792239137832020964028272 图图8 线性关系图线性关系图 测定结果表明，藁本内酯进样量在0.032032g0.320320g内呈良好线性关系。精密度实验试验结果表明，该仪器精密度良好。重复性实验结果表明该测定方法重复性良好。稳定性实验结果表明：供试品溶液峰面积值在8小时内无显著性变化，可满足测定要求。加样回收率实验表明该含量测定方法合理可行。样品含量测定表表18 川芎挥发油中藁本内酯的含量测定结果（川芎挥发油中藁本内酯的含量测定结果（n=3）批次藁本内酯含量（%）平均值（%）161.64261.9161.86362.03测定结果表明：三批样品的测定结果表明，川芎挥发油中藁本内酯含量稳定，暂定其标示量为61.86%，样品的含量以标示量计应在10%以内，即55.67%68.05%。2.2.2.22.2.2.2川芎挥发油的稳定性研究川芎挥发油的稳定性研究在避光、不避光、室温、在避光、不避光、室温、2020、4 4、3737、密闭、不密闭、密闭、不密闭等条件下取挥发油等条件下取挥发油进行留样观察进行留样观察，在不同时间（，在不同时间（1 1天、天、1515天、天、3030天、天、6060天、天、9090天）精密取样，天）精密取样，并进并进行含量测定。实验结果见表行含量测定。实验结果见表。表表表表19 19 川芎挥发油的稳定性测定结果（川芎挥发油的稳定性测定结果（川芎挥发油的稳定性测定结果（川芎挥发油的稳定性测定结果（n=3n=3）贮存条件贮存时间（d）性状藁本内酯含量（%）未贮存0金黄色、澄明油状液体61.64室温不避光密闭1金黄色、澄明油状液体59.1115黄棕色、浑浊油状液体45.2830棕褐色、浑浊油状液体39.2960棕褐色、浑浊油状液体37.3390棕褐色、浑浊油状液体35.25室温避光密闭1金黄色、澄明油状液体59.1815浅黄棕色、浑浊油状液体52.3930黄棕色、浑浊油状液体46.8860深黄棕色、浑浊油状液体44.6890棕褐色、浑浊油状液体43.304避光密闭1金黄色、澄明油状液体59.1715金黄色、澄明油状液体57.9830金黄色、澄明油状液体55.3360浅黄棕色、稍有浑浊油状液体54.0190浅黄棕色、稍有浑浊油状液体52.644避光不密闭1金黄色、澄明油状液体59.0115黄棕色、稍有浑浊油状液体31.1030棕褐色、浑浊油状液体28.0560棕褐色半固体24.2190棕褐色半固体20.6537避光密闭1金黄色、澄明油状液体59.1815棕褐色、浑浊油状液体42.2830棕褐色、浑浊油状液体34.5160棕褐色、浑浊油状液体31.2190棕褐色、浑浊油状液体30.1720避光密闭1金黄色、澄明油状液体61.1315金黄色、澄明油状液体61.0130金黄色、澄明油状液体60.4560金黄色、澄明油状液体60.0890浅黄棕色、澄明油状液体58.33 根据上述试验结果对川芎挥发油的不同影响因素进行分析，结果见图9图11。图图9 光线对川芎挥发油稳定性的影响光线对川芎挥发油稳定性的影响图图10 空气对川芎挥发油稳定性的影响空气对川芎挥发油稳定性的影响图图11 温度对川芎挥发油稳定性的影响温度对川芎挥发油稳定性的影响由此可见，为了保证川芎挥发油的质量和制剂临床疗效，应将其置于-20避光、密闭条件下保存，同时可选用不透光的棕色塑料瓶进行包装。2.3 芎冰滴丸的研制2.3.2 2.3.2 实验方法与结果实验方法与结果2.3.2.12.3.2.1药物配伍剂量的确定药物配伍剂量的确定本实验设计了川芎与冰片配伍的三个剂量组进行药效学实本实验设计了川芎与冰片配伍的三个剂量组进行药效学实验。验。该实验如下：该实验如下：（1 1）热板法镇痛试验）热板法镇痛试验取取雌性小鼠雌性小鼠，于给药后，于给药后1515分钟、分钟、3030分钟、分钟、4545分钟、分钟、6060分分钟，分别在恒温镇痛仪上测痛阈值，如钟，分别在恒温镇痛仪上测痛阈值，如6060秒仍无反应，其秒仍无反应，其痛阈值以痛阈值以6060秒计算。结果见表秒计算。结果见表2020。表表20 川芎挥发油与冰片川芎挥发油与冰片配伍对小鼠的镇痛作用配伍对小鼠的镇痛作用（热板法）（热板法）（xs）组别给药前痛阈值（s）给药后不同时间痛阈值（s）15min30min45min60min空白对照组12.0354.47111.8663.90712.1224.88611.7502.67311.4565.213低剂量组12.7443.59014.9627.25014.8615.36216.4744.84817.4645.008中剂量组13.5865.56817.2955.02918.687663122.89413.52219.7518.216高剂量组12.3113.88815.9292.99717.7554.86823.0129.00923.62214.566注：与给药前相比P0.05、P0.01。从上表可知，川芎挥发油与冰片配伍各剂量组给药后15min60min不同时间均可提高小鼠的痛阈值，显示其具有明显的镇痛作用。（2）扭体法镇痛试验表表21 川芎挥发油与冰片配伍对小鼠的镇痛作用（扭体法）（川芎挥发油与冰片配伍对小鼠的镇痛作用（扭体法）（xs）组别动物数（只）给药后扭体次数（次/30min）镇痛抑制率（%）P值空白对照组1047.9008.412-低剂量组1022.40019.77853.240.05中剂量组1016.0009.70766.600.05高剂量组1020.00013.92058.250.01 从上表可知，川芎挥发油与冰片配伍的各剂量组均可显著减少小鼠的扭体次数，与对照组相比有显著差异，提示该药具有明显的镇痛作用。根据药效学实验结果，选择川芎、冰片的用量初步定为：川芎挥发油0.67mg/kg，冰片0.22mg/kg，即成人（60kg）一日用量为川芎挥发油40mg、冰片13mg。2.3.2.2 滴丸的制备（1 1）处方中药材的提取）处方中药材的提取 采用共水蒸馏法提取川芎挥发油，再采用冷冻采用共水蒸馏法提取川芎挥发油，再采用冷冻分离法进行脱水处理。分离法进行脱水处理。（2 2）实验步骤）实验步骤 与冰片按与冰片按3 3：1 1的比例混匀后加一定量的基质熔的比例混匀后加一定量的基质熔融后滴制。融后滴制。评价方法：以滴制的难易（与基质熔融后的粘稠评价方法：以滴制的难易（与基质熔融后的粘稠度等有关），圆整度，溶散时限，丸重差异，硬度等有关），圆整度，溶散时限，丸重差异，硬度，光洁度等为指标进行考察，在不同的情况下度，光洁度等为指标进行考察，在不同的情况下选择不同的指标。选择不同的指标。（3）冷却剂的选择 分别用植物油，液体石蜡，甲基硅油及后两者的混合液做冷却剂，结果见表22。表表22 冷却剂的选择冷却剂的选择冷却剂圆整度（%）（n=20）丸重差异n=20）光洁度植物油77.612.1较差甲基硅油90.56.5较差液体石蜡85.77.8较差液体石蜡：甲基硅油混合液（2：1）87.85.8较好液体石蜡：甲基硅油混合液（1：1）92.24.5较好液体石蜡：甲基硅油混合液（1：2）88.66.2较好结果表明，用液体石蜡与甲基硅油1：1的混合液为冷却剂较好。（4）药物与基质比例范围的筛选以PEG4000作基质，将其熔融后与药物混合均匀后，滴入80cm长的冷却柱中，以滴丸基本能成型为依据，结果见表23。表表23 药物与基质比例的筛选药物与基质比例的筛选 药物：基质 圆整度（%）（n=20）丸重差异（%）（n=20）溶散时限（min）1：191.98.131：1.588.37.541：294.84.84.51：394.14.75经综合分析，筛选出药物与基质的最低配比为1：2。（5）成型处方筛选处方设计在药物与基质最低配比的基础上，以PEG6000替换PEG4000，设计出一系列不同配比的复合基质处方，见表24。表表24 成型处方组成成型处方组成组成处方号药物PEG4000PEG60001120211.50.53111410.51.55102 按上述表称取各处方的药物和基质，制成滴丸，以其圆整度，溶散时限，影响滴丸滴制时的难易程度及滴丸的硬度为考察指标，结果见表25。表表25 处方筛选结果处方筛选结果处方号圆整度（%）溶散时限（min）滴制难易硬度192.23易较差291.63.5较易较差392.94较易较好487.36.5较难较好582.58难好由表可看出，随着PEG6000量的增加，虽硬度得到改善但其它指标均有下降趋势，综合分析后选取PEG4000与PEG6000二者以1：1的比例混合。吸收剂的选择 由于方中含大量挥发油，为使滴丸硬度增加加入吸收剂。所加吸收剂种类及比例见表26。表表26 吸收剂的选择吸收剂的选择吸收剂（%）圆整度（%）滴制难易硬度磷酸氢钙(10)89.5较易较好硫酸钙(10)90.2较易较好碳酸钙(10)89.6较易较好淀粉(5)91.5易较好淀粉(10)93.4易好淀粉(15)92.8较易好糊精10)93.0易较好淀粉(5),糊精(5)92.3易好-环糊精(10)93.2较易好注：吸收剂的比例为占挥发油的比例 结果表明，加入吸收剂后能提高滴丸硬度。以淀粉为吸收剂的滴丸各指标较好，且价廉易得，最终选择淀粉为吸收剂，加入量为10%。抗氧剂的选择抗氧剂的选择 因挥发油中藁本内酯在室温条件下不稳定，因挥发油中藁本内酯在室温条件下不稳定，实验中也发现放置一段时间后，实验中也发现放置一段时间后，滴丸颜色变浅，说明有效成分已有所变化。滴丸颜色变浅，说明有效成分已有所变化。为提高为提高滴丸的滴丸的稳定性加入一系稳定性加入一系列抗氧剂，列抗氧剂，并对挥发油的有效成分藁本内酯的含量变化进行考察。并对挥发油的有效成分藁本内酯的含量变化进行考察。实验结果见表实验结果见表2727。表表27 抗氧剂的考察抗氧剂的考察抗氧剂（%）外观藁本内酯含量（%）0浅黄色52.35Na2S205（2）浅黄色78.26Vit E（0.1）黄色98.88Vit C（0.5）黄色85.92C9H10O5（0.5）黄色92.35 结果表明，加入抗氧剂后能有效提高藁本内酯含量，保证滴丸的质量。维生素E（Vit E）效果最好，故选用0.1%的Vit E为抗氧剂。本实验筛选出滴丸最佳成型处方是药物（含占挥发油10%的淀粉和0.1%Vit E）与基质比例为1:2，基质为PEG4000与PEG6000（1:1）的混合物。（6）成型工艺研究药物的加入顺序实验发现，药物与基质混合的顺序对滴丸质量有一定影响。实验结果见表28。表表28 药物与基质混合顺序的考察药物与基质混合顺序的考察混合顺序圆整度（%）(n=20)丸重差异（%）(n=20)滴制难易基质与药物一起熔融90.68.9较难基质熔融后加入药物95.33.8易 结果表明，药物在基质熔融后加入较理想。药物与基质熔融温度的考察实验中，对药物与基质混合熔融的温度进行了考察。结果见表29。表表29 药物与基质熔融温度的考察药物与基质熔融温度的考察熔融温度（）圆整度（%）(n=20)丸重差异（%）(n=20)滴制难易7094.24.9易8092.64.5较易结果表明，药物在70时圆整度较好，丸重差异相差不大，为避免温度过高对药物成分的影响，故选择在药物与基质的混合熔融温度为70。滴制温度、冷却柱长、滴口径的选择滴制温度、冷却柱长、滴口径的选择 经预试，确定滴丸的滴距为经预试，确定滴丸的滴距为5cm5cm，滴速为，滴速为/min/min。3030滴滴影响滴丸成型工艺的因素除药物、基质本身外，影响滴丸成型工艺的因素除药物、基质本身外，滴制温度、冷凝柱长短、滴口径滴制温度、冷凝柱长短、滴口径(丸重丸重)对成型工对成型工艺的稳定、可控和易行有着重要影响，故用艺的稳定、可控和易行有着重要影响，故用正交正交试验法试验法L L9 9(3(34 4)，以滴制温度，以滴制温度(A)A)、冷却柱长、冷却柱长(B)(B)、滴、滴口径口径(C)3(C)3因素选用表安排实验，因素选用表安排实验，滴丸的优选方案为A3B1C1，并通过验证实验证明较优冷却时间的考察 按优选的药物与基质的配比及滴制条件进行滴制，经冷却柱缓慢下降后冷凝成型，分别冷凝30min，60min，90min，120min后，取出，用石油醚洗去冷凝液，以圆整度、硬度、及藁本内酯含量作为评价标准。结果见表38。表表38 冷凝时间的考察冷凝时间的考察冷凝时间(min)圆整度（n=20）（%）硬度藁本内酯含量（%）30较差6098.12较好97.699098.26较好92.9212098.21较好92.22通过外观与内在质量综合分析，确定冷凝时间为60min。（7）去冷却剂方法的选择 滴制完成后，滴丸表面冷却剂的去除在实验室中选择了石油醚洗涤和用纸屑擦拭进行比较。以表面光洁度和藁本内酯含量变化作为评价指标进行分析，结果见表39。表表39 滴丸去冷却剂方法的比较滴丸去冷却剂方法的比较方法光洁度处理后藁本内酯含量（%）石油醚（3060）洗涤一般97.35石油醚（6090）洗涤一般97.36纸屑擦拭好99.68 结果表明，纸屑擦拭光洁度较好且对有效成分的影响较小。因此，在实验制备过程中选择纸屑擦拭作为去除冷却剂的方法，以保证滴丸的内在质量。（8）滴丸干燥方法的选择实验中以光洁度及藁本内酯含量变化作为评价指标进行分析，以选择最适合滴丸的干燥方法，结果见表40。表表40 滴丸干燥方法的选择滴丸干燥方法的选择方法光洁度处理后藁本内酯含量（%）40 烘干好92.1850 烘干好90.3660 烘干好85.79吸湿干燥好99.52微波干燥较好94.91结果表明吸湿干燥较理想。2.4芎冰滴丸的质量评价研究2.4.1 2.4.1 质量标准研究质量标准研究（1）鉴别(对滴丸中的挥发油进行TLC鉴别）样品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上（Rf=0.7），显相同颜色的亮蓝色荧光斑点。图图9 滴丸的滴丸的TLC鉴别鉴别 图图10 滴丸的滴丸的TLC鉴别鉴别 展开剂：石油醚-醋酸乙酯（9：1）展开剂：正己烷-醋酸乙酯（91）1藁本内酯对照品；2川芎挥发油；3、4、5样品 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5（2）检查溶出度检查测定藁本内酯含量，并计算相对累积溶出百分率，即得。结果见表41。表表41 藁本内酯累积溶出百分率（藁本内酯累积溶出百分率（%）（）（n=3）取样时间点lmin3min6min10min15min20min30min累积溶出百分率（%）17.844.169.584.892.393.193.7 以取样时间点为横坐标，藁本内酯累积溶出百分率为纵坐标作图，得藁本内酯溶出曲线。见图11。根据测定结果，暂定在6分钟时，本品的累积溶出百分率不得少于65%。含量均匀度检查取本品10粒，研细，分别置100ml量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，0.45m微孔滤膜滤过，测定藁本内酯含量，计算结果。结果见表42。表表42 样品均匀度测定结果（样品均匀度测定结果（n=10）批次相对含量（%）A+1.80S1100.13.82100.33.6399.74.3结果表明，A+1.80S均小于15.0，符合规定。(3)含量测定项目项目项目项目 川芎挥发油川芎挥发油川芎挥发油川芎挥发油（藁本内酯）（藁本内酯）（藁本内酯）（藁本内酯）冰片冰片冰片冰片测定方法测定方法HPLC HPLC 气相色谱法气相色谱法系统适应性实验样品在各自的色谱条件下分离好，阴性无干扰。样品在各自的色谱条件下分离好，阴性无干扰。线性关系的考察藁本内酯进样量在0.016213g0.16213g范围内呈良好线性关系。冰片进样量在0.044g0.265g范围内线性关系良好。供试品溶液的制备 A.溶媒的选择 B.制备方法的选择 C.加入溶剂量的选择 D.超声时间的选择制备内标溶液，测定校正因子制备内标溶液，测定校正因子精密度实验RSD值小于2，表明该仪器精密度良好。RSD值小于2，表明该仪器精密度良好。重复性实验。结果表明该测定方法重复性良好结果表明该测定方法重复性良好稳定性实验供试品溶液峰面积值在8小时内无显著性变化，可满足测定要求。供试品溶液在10小时内稳定，可满足测定要求。加样回收率实验 该含量测定方法合理可行。该方法合理可行。样品测定结果芎冰滴丸中藁本内酯含量稳定，暂定其标示量为2.697mg/丸芎冰滴丸中冰片的含量稳定，暂定其标示量为1.05mg/丸2.4.2 溶出度考察2.4.2.22.4.2.2溶出度溶出度溶出度溶出度方法学考察方法学考察方法学考察方法学考察 溶出介质的选择溶出介质的选择 以藁本内酯为指标，考察藁本内酯在水、酸水（以藁本内酯为指标，考察藁本内酯在水、酸水（HCl 9ml1000mlHCl 9ml1000ml）、人）、人工胃液中的溶出情况。工胃液中的溶出情况。测定方法：测定方法：高效液相色谱法。高效液相色谱法。图图20 对照品对照品HPLC图图图图21 人工胃液人工胃液HPLC图图图图22 芎冰滴丸芎冰滴丸HPLC图图表表60 溶出介质的考察实验溶出介质的考察实验溶出介质水酸水人工胃液藁本内酯溶出百分率（%）3.9325.091.8结果表明，藁本内酯在人工胃液中的溶出率高于水和酸水，故选择人工胃液为溶出介质。转速考察结果见表61。表表61 溶出度检查转速考察结果溶出度检查转速考察结果转速(r/min)50100150藁本内酯溶出百分率()89.7892.5392.65 结果表明，转速对溶出度影响不大，选择100r/min进行实验。制备标准曲线精密度试验重复性实验稳定性实验加样回收率实验 2.4.2.3溶出度实验结果分析同法测定芎冰包合片及胶囊的溶出度。结果见表67。表表67 溶出度实验结果溶出度实验结果 取样时间点（min）藁本内酯累积溶出百分率（%）（n=3）芎冰滴丸芎冰包合片芎冰包合胶囊117.8未检出未检出344.1未检出未检出669.5未检出7.181084.8未检出8.261592.33.4010.82093.15.4114.13093.75.7218.545未检验10.1927.360未检验11.628.5以取样时间点为横坐标，藁本内酯累积溶出百分率为纵坐标作图，得芎冰滴丸、芎冰包合片及芎冰包合胶囊溶出曲线。见图24。图图24 溶出曲线对比分析图溶出曲线对比分析图项目芎冰滴丸芎冰包合片芎冰包合胶囊溶出达到基本完全时间（min）154545最高累积溶出百分率93.711.628.5表表68 溶出度实验结果分析表溶出度实验结果分析表图图25 溶出度实验结果分析柱形图溶出度实验结果分析柱形图 以藁本内酯达到溶出基本完全的时间和最高累积溶出百分率为指标进行分析，结果见表68，图25。由此可以看出，滴丸无论是达峰时间还是累积溶出百分率都较好。表明滴丸极大地提高了挥发油的溶出度。实验结果表明，芎冰滴丸与其它口服固体制剂相比，溶出速度快，累积溶出量高。2.5 初步稳定性试验初步稳定性试验根据中国药典2005年版药物制剂稳定性实验指导原则，对芎冰滴丸的基本性状、含量进行了室温留样考察。按芎冰滴丸制备工艺制备滴丸三批，密封包装，置于40、RH75%恒温恒湿