艾滋病常用实验室检测及临床意义分析.pptx

艾滋病常用实验室检测艾滋病常用实验室检测及临床意义分析及临床意义分析 广西疾病预防控制中心广西疾病预防控制中心 梁富雄梁富雄 2013.42013.4主要内容主要内容nHIVHIV抗体检测抗体检测nCD4CD4检测检测n病毒载量检测病毒载量检测n实验室安全防护实验室安全防护HIVHIV抗体抗体-感感染染成成功功抗抗体体转转阳阳诊诊断断艾艾滋滋病病死死亡亡-4-8周周-出出现现症症状状 2-10 年年 1年年 0.5-2年年 HIV抗体抗体+无症状无症状有症状有症状HIV抗体抗体+艾滋病艾滋病感染艾滋病毒后的自然发展过程感染艾滋病毒后的自然发展过程急性感急性感染期染期潜伏期潜伏期发病期发病期艾滋病感染者艾滋病感染者艾滋病患者艾滋病患者窗口期窗口期1234急性感染期急性感染期KINETICS OF VIRAL MARKERS DURING PRIMARY HIV-1 INFECTIONHIV RNAHIV p24 antigenHIV antibodiesHIV感染后血液中核酸、抗原和抗体动态变化感染后血液中核酸、抗原和抗体动态变化窗口期暴露天数检测域感染HIV后病毒载量、CD4与病程变化规律 中国中国HIVHIV实验室网络实验室网络 国家艾滋病参比实验室国家艾滋病参比实验室 中国中国CDCCDC性艾中心性艾中心 艾滋病确认中心实验室艾滋病确认中心实验室 省、市省、市 艾滋病确认实验室艾滋病确认实验室 省、市省、市 艾滋病筛查中心实验室艾滋病筛查中心实验室 省、市、州、县省、市、州、县 艾滋病筛查实验室艾滋病筛查实验室 省、市、州、县省、市、州、县 艾滋病检测点艾滋病检测点 乡、镇乡、镇HIVHIV实验室条件实验室条件n人员人员:经过专门技术培训经过专门技术培训,取得培训合格证取得培训合格证/上岗证上岗证;n环境环境:功能分区功能分区,符合生物安全二级要求符合生物安全二级要求;n仪器设备仪器设备:按要求配备，满足检测要求。按要求配备，满足检测要求。实验室必须经过资质认证实验室必须经过资质认证/验收！验收！HIVHIV病原体诊断病原体诊断 HIV HIV抗体检测抗体检测 艾滋病病毒抗原检测（艾滋病病毒抗原检测（P24P24）HIV HIV核酸检测核酸检测 病毒分离病毒分离检测样品检测样品n血清、血浆血清、血浆n尿液尿液n抗凝全血（抗凝全血（CBCCBC、CD4CD4、VL)VL)nPBMCPBMC（外周血淋巴细胞）（外周血淋巴细胞）样品的采集和处理样品的采集和处理 一、样品的采集一、样品的采集 最最常常用用的的样样品品是是血血液液，包包括括血血清清、血血浆浆和和全全血血(抗抗凝凝血血)。唾唾液液或或尿尿液液有有时时也也可可作作为为测测试试样样品品。常常用用样样品品的的采采集方法如下：集方法如下：（一一）采采集集样样品品应应按按临临床床采采血血技技术术规规范范及及检检测测试试剂剂盒盒要要求进行。求进行。（二二）采采集集标标本本时时应应注注意意安安全全，操操作作应应戴戴双双层层手手套套。建建议采用真空采血管及蝶形针具，以免直接接触血液。议采用真空采血管及蝶形针具，以免直接接触血液。（三三）血血清清样样品品采采集集：用用注注射射器器抽抽静静脉脉血血3 35ml5ml，室室温温放放置置1-21-2小小时时，待待血血液液凝凝固固或或用用3000rpm3000rpm离离心心1515分分钟钟，吸吸出出血血清清备备用。用。（四四）抗抗凝凝血血样样品品采采集集(免免疫疫功功能能CD4/CD8CD4/CD8测测定定、血血液液常常规规CBCCBC测测定定、病病毒毒载载量量）：用用加加有有抗抗凝凝剂剂（K K3 3EDTAEDTA）的的真真空空采采血血管管或或试试管管抽抽取取静静脉脉血血，反反复复轻轻摇摇，常常温温6 6小小时时以以内内送送达达实实验验室室检测检测CD4/CD8CD4/CD8或或CBCCBC后，再分离血浆和血细胞备用。后，再分离血浆和血细胞备用。（五五）血血清清或或血血浆浆样样品品应应存存放放于于-20-20，短短期期内内（1 1周）进行检测的样品可存放于周）进行检测的样品可存放于2-82-8。（六六）用用于于抗抗原原和和核核酸酸检检测测的的血血浆浆和和血血细细胞胞样样品品应应冻冻存存于于-20-20以以下下，进进行行病病毒毒 RNARNA检检测测的的样样品品如如长长期期（3 3个月以上）保存应置于个月以上）保存应置于-80-80。二、样品的运送二、样品的运送（一）抗体检测实验室间传递的样品应为血清或血浆，血（一）抗体检测实验室间传递的样品应为血清或血浆，血液常规、液常规、CD4CD4和病毒载量等要求送抗凝血。样品应置于带和病毒载量等要求送抗凝血。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。或受检者姓名、种类和采集时间。（二二）将将试试管管放放入入专专用用带带盖盖的的容容器器内内，容容器器的的材材料料要要易易于于消消毒毒处处理理。在在试试管管的的周周围围应应垫垫有有缓缓冲冲吸吸水水材材料料，以以免免碰碰碎碎。如如果果路路程程较较远远或或气气候候炎炎热热，应应在在2-82-8条条件件下下运运送送。抗抗凝凝血血和和抗抗体体检检测测样样品品路路程程短短可可常常温温送送检检。包包装装内内需需附附有有送送检检单。单。（三三）特特殊殊情情况况下下如如需需对对个个别别样样品品进进行行复复测测，可可以以用用特特快快专专递递形形式式投投寄寄，但但必必须须将将盛盛样样品品的的试试管管包包扎扎好好，保保证证不不会会破碎和溢漏。破碎和溢漏。三、样品的接收三、样品的接收 （一一）含含有有感感染染性性样样品品的的包包裹裹必必须须在在具具有有处处理理感感染染源源设设备备的的实实验验室室内内由由经经过过培培训训的的工工作作人人员员打打开开，用用后后的的包包裹裹应应进进行消毒。行消毒。（二）核对标本与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。（二）核对标本与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。（三三）检检查查样样品品的的状状况况，记记录录有有无无严严重重溶溶血血、微微生生物物污污染染、血脂过多以及黄疸等情况。血脂过多以及黄疸等情况。（四四）因因特特殊殊临临床床治治疗疗导导致致自自发发荧荧光光的的样样品品不不可可用用于于荧荧光光方法测试。方法测试。HIVHIV抗体检测的目的抗体检测的目的n诊断诊断 确定个体确定个体HIV感染状况，包括临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需要感染状况，包括临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需要进行的体检等。进行的体检等。n血液筛查血液筛查防止输血传播防止输血传播HIV，包括献血员筛查和原料血浆筛查。，包括献血员筛查和原料血浆筛查。n监测监测 了了解解不不同同人人群群HIV感感染染率率及及其其变变化化趋趋势势，包包括括各各类类高高危危人人群群、重重点点人人群群和一般人群。和一般人群。HIVHIV抗体检测的方法抗体检测的方法n筛查试验（包括初筛和复检）：酶联免疫吸附试验筛查试验（包括初筛和复检）：酶联免疫吸附试验（ELISA)ELISA)、化学发光试验、明胶颗粒凝聚试验（、化学发光试验、明胶颗粒凝聚试验（PAPA）、免）、免疫渗滤试验、免疫层析试验等疫渗滤试验、免疫层析试验等n确证试验：免疫印迹试验（确证试验：免疫印迹试验（WB)WB)、条带免疫试验、放射免、条带免疫试验、放射免疫沉淀试验、免疫荧光试验等。疫沉淀试验、免疫荧光试验等。艾滋病抗体确证试验艾滋病抗体确证试验 免疫印迹法（免疫印迹法（WBWB）为目前最常用的）为目前最常用的HIVHIV抗体确认方法，抗体确认方法，被公认为判断被公认为判断HIVHIV感染的黄金方法。感染的黄金方法。艾滋病抗体检测试剂使用条件艾滋病抗体检测试剂使用条件 HIVHIV筛筛查查或或确确认认试试剂剂必必须须是是HIV/1+2HIV/1+2混混合合型型，国国家家卫卫生生部部批批准准或或注注册册，经经过过国国家家医医药药监监督督管管理理局局批批批批检检合合格格，临临床试剂评估优良，并且在有效期内。床试剂评估优良，并且在有效期内。检测要点检测要点1 1、严格按照试剂说明书操作，不得擅自更改。、严格按照试剂说明书操作，不得擅自更改。2 2、注意防止交叉污染。、注意防止交叉污染。3 3、严格遵守实验室操作规程。、严格遵守实验室操作规程。4 4、认真做好实验记录。、认真做好实验记录。HIVHIV抗体检测结果及结论抗体检测结果及结论 HIVHIV抗抗体体筛筛查查结结果果阴阴性性反反应应可可做做HIVHIV抗抗体体阴阴性性报报告告，筛筛查查试试验验呈呈阳阳性性反反应应，可可出出具具“HIVHIV抗抗体体待待复复查查”报报告告，不不能能出出HIVHIV抗抗体体阳阳性性报报告告。筛筛查查阳阳性性反反应应或或可可疑疑阳阳性性反反应应不不能能作作最最终终报报告告通通知知被被检检测测者者，对对个个体体诊诊断断来来说说,只只有有经经过确证试验，结果阳性才可做过确证试验，结果阳性才可做HIVHIV抗体阳性报告。抗体阳性报告。检测程序及流程图检测程序及流程图1 1、筛查检测、筛查检测 验验收收标标本本，用用筛筛查查试试剂剂进进行行检检测测，如如呈呈阴阴性性反反应应，报报告告HIVHIV抗体阴性；对呈阳性反应的标本，须进行重复检测。抗体阴性；对呈阳性反应的标本，须进行重复检测。2 2、重复检测、重复检测 对对筛筛查查呈呈阳阳性性反反应应的的标标本本用用原原有有试试剂剂和和另另外外一一种种不不同同原原理理或不同厂家的试剂重复检测。或不同厂家的试剂重复检测。HIVHIV抗体筛查检测流程抗体筛查检测流程样样样样 品品品品初筛检测初筛检测初筛检测初筛检测筛查试剂筛查试剂筛查试剂筛查试剂阳性反应阳性反应阳性反应阳性反应阴性反应阴性反应阴性反应阴性反应重复检测重复检测重复检测重复检测原有试剂和另外一种不同原理原有试剂和另外一种不同原理原有试剂和另外一种不同原理原有试剂和另外一种不同原理（或厂家）的试剂，或另外两（或厂家）的试剂，或另外两（或厂家）的试剂，或另外两（或厂家）的试剂，或另外两种不同原理或不同厂家的试剂种不同原理或不同厂家的试剂种不同原理或不同厂家的试剂种不同原理或不同厂家的试剂 一阴一阳一阴一阳一阴一阳一阴一阳均阴性反应均阴性反应均阴性反应均阴性反应均阳性反应均阳性反应均阳性反应均阳性反应送确认实验室确认送确认实验室确认送确认实验室确认送确认实验室确认报告阴性报告阴性报告阴性报告阴性 HIVHIV抗体确证抗体确证 1 1、常用的确证实验方法是免疫印迹法（、常用的确证实验方法是免疫印迹法（WBWB）。）。2 2、免免疫疫印印迹迹试试剂剂有有HIV-1/2HIV-1/2混混合合型型和和单单一一型型。一一般般先先用用HIV-1/2HIV-1/2混混合合型型试试剂剂进进行行检检测测，如如果果呈呈阴阴性性反反应应，则则报报告告HIVHIV抗抗体体阴阴性性，如如果果呈呈阳阳性性反反应应，则则报报告告HIV-1HIV-1抗抗体体阳阳性性，如如果果不不满满足足阳阳性性标标准准，则则判判为为HIVHIV抗抗体体不不确确定定。如如果果出出现现HIV-2HIV-2型型的的特特异异性性指指示示条条带带，还还需需要要用用HIV-2HIV-2型型免免疫疫印印迹迹试试剂剂再再做做单单一一的的HIV-2HIV-2型型抗抗体体确确认认试试验验，呈呈阴阴性性反反应应，报报告告HIV-2HIV-2抗抗体体阴阴性性；呈呈阳阳性性反反应应的的则则报报告告HIV-2HIV-2抗抗体体血血清清学学阳阳性。性。HIVHIV抗体确证检测流程抗体确证检测流程免疫印迹法（免疫印迹法（免疫印迹法（免疫印迹法（WBWB，HIV-1/2HIV-1/2混合型）混合型）混合型）混合型）HIV-1HIV-1阳性反应阳性反应阳性反应阳性反应不确定反应不确定反应不确定反应不确定反应 出现出现出现出现HIV-2HIV-2指示条带指示条带指示条带指示条带报告报告报告报告HIV-1HIV-1阳性阳性阳性阳性结合流行病学资料，可以在结合流行病学资料，可以在结合流行病学资料，可以在结合流行病学资料，可以在4 4周后随访检测，如带型没有进展或呈阴性反应，则报告阴性；如随访期间出现阳性反应，则报周后随访检测，如带型没有进展或呈阴性反应，则报告阴性；如随访期间出现阳性反应，则报周后随访检测，如带型没有进展或呈阴性反应，则报告阴性；如随访期间出现阳性反应，则报周后随访检测，如带型没有进展或呈阴性反应，则报告阴性；如随访期间出现阳性反应，则报告阳性；如随访期间带型有进展，但不满足阳性标准，应继续随访到告阳性；如随访期间带型有进展，但不满足阳性标准，应继续随访到告阳性；如随访期间带型有进展，但不满足阳性标准，应继续随访到告阳性；如随访期间带型有进展，但不满足阳性标准，应继续随访到8 8周。如带型没有进展或呈阴性反应则报告阴性；满足周。如带型没有进展或呈阴性反应则报告阴性；满足周。如带型没有进展或呈阴性反应则报告阴性；满足周。如带型没有进展或呈阴性反应则报告阴性；满足HIVHIV抗体阳性诊断标准则报告阳性，不满足阳性判断标准可视情况决定是否继续随访。抗体阳性诊断标准则报告阳性，不满足阳性判断标准可视情况决定是否继续随访。抗体阳性诊断标准则报告阳性，不满足阳性判断标准可视情况决定是否继续随访。抗体阳性诊断标准则报告阳性，不满足阳性判断标准可视情况决定是否继续随访。阴性反应阴性反应阴性反应阴性反应报告阴性报告阴性报告阴性报告阴性筛查试验阳性反应样品筛查试验阳性反应样品筛查试验阳性反应样品筛查试验阳性反应样品根据具体情况进一步检测根据具体情况进一步检测根据具体情况进一步检测根据具体情况进一步检测HIV-2HIV-2检测结果的报告和处理检测结果的报告和处理 HIV HIV抗体筛查：抗体筛查：筛筛查查实实验验呈呈阴阴性性反反应应出出具具HIVHIV抗抗体体阴阴性性报报告告，如如果果近近期期有有高高危危行行为为，如如性性乱乱、注注射射毒毒品品等等，或或有有急急性性流流感感样样症症状状等等情情况况，为为排排除除“窗窗口口期期”的的可可能能，建建议议2323个个月月以后再做抗体检测。以后再做抗体检测。筛筛查查实实验验呈呈阳阳性性反反应应，可可出出具具“HIV“HIV抗抗体体待待复复查查”报报告告，不能出阳性报告。不能出阳性报告。HIVHIV抗体筛查呈阳性的处理抗体筛查呈阳性的处理 （1 1）填写）填写HIVHIV抗体筛查阳性送检单抗体筛查阳性送检单 （2 2）尽可能重新采集受检者的血样。）尽可能重新采集受检者的血样。（3 3）将将二二份份血血样样（或或仅仅原原血血样样）连连同同HIVHIV抗抗体体筛筛查查阳阳性性送送检检单单一一并并送送当当地地艾艾滋滋病病筛筛查查中中心心实实验验室室，再再转转送送艾艾滋滋病病确确认实验室，或直接送确认实验室确认。认实验室，或直接送确认实验室确认。（4 4）筛查中心实验室应尽快进行复测。）筛查中心实验室应尽快进行复测。（5 5）做好检测后咨询。）做好检测后咨询。HIVHIV抗体确证结果报告抗体确证结果报告 1 1、HIVHIV抗抗体体阳阳性性应应出出具具HIVHIV抗抗体体阳阳性性确确认认报报告告，并并按按相相关关规定做好咨询、保密和报告工作规定做好咨询、保密和报告工作;2 2、HIVHIV抗抗体体阴阴性性应应出出具具HIVHIV抗抗体体阴阴性性确确认认报报告告，如如果果近近期期有有高高危危行行为为，如如性性乱乱、注注射射毒毒品品等等，或或有有急急性性流流感感样样症症状状等等情情况况，为为排排除除“窗窗口口期期”的的可可能能，建建议议1 1个个月月以以后后再再做做抗体检测抗体检测;抗体确证不确定结果抗体确证不确定结果 HIVHIV抗抗体体不不确确定定出出具具HIVHIV抗抗体体不不确确定定确确认认报报告告，在在备注中应注明备注中应注明“1“1个月后复查个月后复查”。1 1、随访：每、随访：每1 1个月一次，连续个月一次，连续2 2次，共次，共2 2个月。个月。2 2、做好检测后咨询。、做好检测后咨询。全国艾滋病检测技术规范全国艾滋病检测技术规范2009版全国艾滋病检测技术规范2009版实验室记录要求实验室记录要求1 1、标本的登记、标本的登记 收到标本后，及时登记有关参数，包括受检者姓名或收到标本后，及时登记有关参数，包括受检者姓名或代号、试管编号、性别、年龄、职业、送检单位、人群类代号、试管编号、性别、年龄、职业、送检单位、人群类别、检验结果、送检日期、报告日期、备注别、检验结果、送检日期、报告日期、备注(必要时记录必要时记录通信地址通信地址)等。等。2 2、实验原始记录表实验原始记录表 应应按按实实验验要要求求，设设计计操操作作的的原原始始记记录录表表，标标明明空空白白对对照照、阳阳性性对对照照、阴阴性性对对照照、外外部部对对照照以以及及待待检检样样品品的的位位置置，便便于于指指导导实实验验人人员员加加样样。要要注注明明试试剂剂盒盒来来源源、测测定定方方法法、批号、有效期、操作人员和复核人员姓名及检测日期。批号、有效期、操作人员和复核人员姓名及检测日期。3 3、HIV HIV 阳性标本的保存记录阳性标本的保存记录 记记录录HIVHIV阳阳性性标标本本的的储储存存量量、储储存存温温度度、储储存存起起始始时时间以及标本保管人姓名。间以及标本保管人姓名。4 4、文件存档、文件存档 实实验验原原始始记记录录表表、打打印印数数据据、检检测测记记录录表表、标标本本登登记记、标标本本保保存存记记录录以以及及仪仪器器设设备备维维修修和和校校准准记记录录等等都都应应该该妥妥善善存存档档保保存存1515年年以以上上。最最好好同同时时使使用用计计算算机机保保存各种文件和记录。存各种文件和记录。HIVHIV感染产妇所生儿童感染产妇所生儿童HIVHIV抗体抗体检测策略及流程检测策略及流程 适用范围适用范围 HIV感染产妇所生婴幼儿；已满18个月的婴幼儿，其母亲HIV感染状态不详，儿童出现HIV相关临床表现，临床怀疑HIV感染的儿童。HIVHIV感染产妇所生儿童感染产妇所生儿童HIVHIV抗体抗体检测策略及流程检测策略及流程 检测程序及结果报告检测程序及结果报告 婴儿满婴儿满1212个月进行第一次个月进行第一次HIVHIV抗体检测。使用两种不同原理或不抗体检测。使用两种不同原理或不同厂家筛查试剂进行抗体检测，两种筛查试剂检测结果均为阴性反应，同厂家筛查试剂进行抗体检测，两种筛查试剂检测结果均为阴性反应，报告报告“HIV“HIV抗体阴性（）抗体阴性（）”，可排除感染。检测结果出现阳性反应，可排除感染。检测结果出现阳性反应（一种为阴性反应一种为阳性反应或两种均呈阳性反应），不能排除（一种为阴性反应一种为阳性反应或两种均呈阳性反应），不能排除感染，应继续追踪随访，至儿童满感染，应继续追踪随访，至儿童满1818个月时再次进行个月时再次进行HIVHIV抗体检测。抗体检测。HIVHIV感染产妇所生儿童感染产妇所生儿童HIVHIV抗体抗体检测策略及流程检测策略及流程 检测程序及结果报告检测程序及结果报告 婴儿满婴儿满1818个月时应再次进行个月时应再次进行HIVHIV抗体检测。使用两种抗体检测。使用两种不同原理或不同厂家筛查试剂进行抗体检测。两种筛查试不同原理或不同厂家筛查试剂进行抗体检测。两种筛查试剂的检测结果均为阴性反应，报告剂的检测结果均为阴性反应，报告“HIV“HIV抗体阴性（）抗体阴性（）”，可排除感染。检测出现阳性反应（一种为阴性反应一，可排除感染。检测出现阳性反应（一种为阴性反应一种为阳性反应或两种均呈阳性反应），进一步进行确证试种为阳性反应或两种均呈阳性反应），进一步进行确证试验，根据确证试验的结果判断是否感染验，根据确证试验的结果判断是否感染HIV HIV。HIVHIV感染产妇所生儿童感染产妇所生儿童HIVHIV抗体抗体检测策略及流程检测策略及流程 检测程序及结果报告检测程序及结果报告 在发放检测报告的同时上报疫情；在发放检测报告的同时上报疫情；做好检测后咨询。做好检测后咨询。全国艾滋病检测技术规范全国艾滋病检测技术规范2009版免疫功能（免疫功能（CD4/CD8CD4/CD8）的检测）的检测T T淋巴细胞分类淋巴细胞分类 在在T T淋巴细胞分类中，淋巴细胞分类中，CD4CD4代表代表T T辅助细胞而辅助细胞而CD8CD8代代表表T T抑制细胞和抑制细胞和T T杀伤细胞。杀伤细胞。CD4+TCD4+T淋巴细胞是淋巴细胞是HIVHIV感染感染的主要靶细胞，也是免疫反应的中心细胞；的主要靶细胞，也是免疫反应的中心细胞；CD8+TCD8+T淋巴淋巴细胞是免疫反应的效应细胞。细胞是免疫反应的效应细胞。T T淋巴细胞分类淋巴细胞分类 正常人的正常人的CDCD4 4+T T淋巴细胞约占总的淋巴细胞约占总的T T淋巴细胞的淋巴细胞的65%65%，CDCD8 8+T T淋巴细胞约占淋巴细胞约占35%35%。人体感染了。人体感染了HIVHIV后，涉及的主要病后，涉及的主要病理过程就是免疫系统的损害，主要表现为：理过程就是免疫系统的损害，主要表现为：CDCD4 4+T T淋巴细胞淋巴细胞的丢失，绝对数量的减少，同时的丢失，绝对数量的减少，同时CDCD8 8+T T淋巴细胞数量增加，淋巴细胞数量增加，CDCD4 4和和CDCD8 8的比例失调。因此的比例失调。因此CDCD4 4+T T淋巴细胞计数作为直接测淋巴细胞计数作为直接测定免疫功能的方法，是提供定免疫功能的方法，是提供HIVHIV感染病人免疫系统损害状感染病人免疫系统损害状况最明确的指标。况最明确的指标。CD4+TCD4+T淋巴细胞正常值淋巴细胞正常值 CD4 CD4：410-1590/mm410-1590/mm3 3 CD8 CD8：190-1140/mm190-1140/mm3 3 CD4/CD8 CD4/CD8：1 1CDCD4 4+T T淋巴细胞计数意义淋巴细胞计数意义 是艾滋病疾病分期、确定诊断、制定抗病毒治疗和预是艾滋病疾病分期、确定诊断、制定抗病毒治疗和预防机会性感染方案的标准实验室指标，也是与病毒载量相防机会性感染方案的标准实验室指标，也是与病毒载量相配合预测疾病进程的可靠指标。配合预测疾病进程的可靠指标。CD4+TCD4+T淋巴细胞检测意义淋巴细胞检测意义1 1、用于、用于HIVHIV感染者的疾病分期：凡感染者的疾病分期：凡CD4+TCD4+T淋巴细胞淋巴细胞200/mm200/mm3 3或或CD4+TCD4+T淋巴细胞的百分比淋巴细胞的百分比14%14%的的HIVHIV感染者可归入艾滋病。感染者可归入艾滋病。CD4+TCD4+T淋巴细胞检测意义淋巴细胞检测意义 2 2、判断、判断HIVHIV感染者的临床合并症（各种机会性感染与感染者的临床合并症（各种机会性感染与CD4+TCD4+T淋巴细胞的相关性），如淋巴细胞的相关性），如CD4+TCD4+T淋巴细胞淋巴细胞200/mm200/mm3 3时，时，很容易发生卡氏肺囊虫肺炎；而巨细胞病毒感染和鸟分支杆很容易发生卡氏肺囊虫肺炎；而巨细胞病毒感染和鸟分支杆菌感染常发生于菌感染常发生于CD4+TCD4+T淋巴细胞淋巴细胞50/mm50/mm3 3的病人，极少见于的病人，极少见于CD4+TCD4+T淋巴细胞淋巴细胞100/mm100/mm3 3的病人。的病人。CD4+TCD4+T淋巴细胞检测意义淋巴细胞检测意义3 3、帮助确定抗帮助确定抗HIVHIV药物治疗及机会性感染预防性治疗的适应症，药物治疗及机会性感染预防性治疗的适应症，例如，当例如，当CD4+TCD4+T淋巴细胞淋巴细胞200/mm200/mm3 3时，应给予抗卡氏肺囊虫时，应给予抗卡氏肺囊虫肺炎的预防性治疗；肺炎的预防性治疗；4 4、抗、抗HIVHIV药物疗效的重要判断指标。药物疗效的重要判断指标。成人及青少年艾滋病分期标准成人及青少年艾滋病分期标准（美国（美国CDC.1993CDC.1993）CD4200/ulCD410001000）提示感染发生的可能性非常大。）提示感染发生的可能性非常大。2 2、窗口期辅助诊断、窗口期辅助诊断n在窗口期抗原峰出现前后通常出现一个病毒载量的高峰，在窗口期抗原峰出现前后通常出现一个病毒载量的高峰，通常此高峰高于发病时的血浆病毒水平，早期病毒通常此高峰高于发病时的血浆病毒水平，早期病毒RNARNA测测定具有特殊的意义。定具有特殊的意义。n目前国际上正在尝试使用这种检测对采供血样品进行多个目前国际上正在尝试使用这种检测对采供血样品进行多个样品混合后的样品混合后的RNARNA检测以降低窗口期传播的残余危险度。检测以降低窗口期传播的残余危险度。3 3、病程监控、病程监控n由于由于HIVHIV感染发生后病毒载量的变化具有一定规律，并且感染发生后病毒载量的变化具有一定规律，并且这种变化与疾病的进程有着密切的相关性。这种变化与疾病的进程有着密切的相关性。n通常在感染后无症状期内发生的临床症状很难与通常在感染后无症状期内发生的临床症状很难与AIDSAIDS发病发病时的症状区别，病毒载量测定可以帮助医生判断一个刚发时的症状区别，病毒载量测定可以帮助医生判断一个刚发生的症状是否与生的症状是否与HIVHIV感染有关。感染有关。4 4、指导治疗方案及疗效测定、指导治疗方案及疗效测定n并非在任何情况下感染者都应并非在任何情况下感染者都应该进行抗病毒治疗，这不但是该进行抗病毒治疗，这不但是经济上的原因，更重要的是在经济上的原因，更重要的是在于抗病毒药物的副作用和疗效。于抗病毒药物的副作用和疗效。通常在病毒载量达到一定水平通常在病毒载量达到一定水平后（如后（如35000-5000035000-50000拷贝拷贝/毫升）毫升）才具有良好的效果。才具有良好的效果。n只有通过治疗后病毒水平的检只有通过治疗后病毒水平的检测才能确定治疗是否有效，通测才能确定治疗是否有效，通常治疗后病毒水平降低常治疗后病毒水平降低50%50%才被才被认为临床有效。认为临床有效。100010008008006006004004002002006 65 54 43 32 20 20 40 60 week0 20 40 60 weekHAARTHAARTSTISTIHIV-1 plasma RNAHIV-1 plasma RNACD4+T cell countCD4+T cell countHIV-1 plasma RNAHIV-1 plasma RNACD4+T cell countCD4+T cell count5 5、预测疾病进程、预测疾病进程nHIVHIV疾病进程与病毒载量的关系疾病进程与病毒载量的关系十分密切，观察感染者病毒十分密切，观察感染者病毒RNARNA水平可大致预测其发病的可能。水平可大致预测其发病的可能。如右图所示，病毒载量与如右图所示，病毒载量与6 6年发年发病率的关系为：病率的关系为：500 3000030000时则为时则为80%80%。两种方法检测病毒载量两种方法检测病毒载量（一）（一）RT-PCRRT-PCR（二）（二）NASBA EasyQNASBA EasyQ病毒载量检测样品要求病毒载量检测样品要求n血浆血浆n样品量约样品量约1 1毫升毫升n样品要求保存低温保存（样品要求保存低温保存（-20-20以下）以下）n冷冻运输冷冻运输实验室网络实验室网络n自治区自治区CDC确证中心实验室确证中心实验室n柳州市柳州市CDC确证实验室确证实验室n梧州市梧州市CDC确证实验室确证实验室n贺州市贺州市CDC确证实验室确证实验室n龙潭医院确证实验室龙潭医院确证实验室n桂林市桂林市CDC确证实验室确证实验室3.12105低于最低检测限（400拷贝/毫升）高于最高检测限（7.5105拷贝/毫升）RT-PCRRT-PCR病毒载量结果的报告三种情况病毒载量结果的报告三种情况n具体的一个数值（该值在具体的一个数值（该值在400-7.510400-7.5105 5拷贝拷贝/毫升）毫升）n低于最低检测限（低于最低检测限（400400拷贝拷贝/毫升）毫升）n高于最高检测限（高于最高检测限（7.5107.5105 5拷贝拷贝/毫升）毫升）1.6105低于最低检测限（50拷贝/毫升）高于最高检测限（3.0106拷贝/毫升）NASBANASBAEASYQEASYQ病毒载量结果报告的三种情况病毒载量结果报告的三种情况n具体的一个数值（该值在具体的一个数值（该值在50 3.01050 3.0106 6拷贝拷贝/毫升）毫升）n低于最低检测限（低于最低检测限（5050拷贝拷贝/毫升）毫升）n高于最高检测限（高于最高检测限（3.0103.0106 6拷贝拷贝/毫升）毫升）注意事项注意事项1 1、不同检测方法的结果不能直接比较，必须转、不同检测方法的结果不能直接比较，必须转化为国际单位化为国际单位 RT-PCR:1IU/ml=0.51copies/ml RT-PCR:1IU/ml=0.51copies/ml NASBA EASYQ:1IU/ml=1copies/ml NASBA EASYQ:1IU/ml=1copies/ml注意事项注意事项2 2、检测结果低于最低检测限不能排除、检测结果低于最低检测限不能排除HIVHIV感染感染3 3、病毒载量结果低于、病毒载量结果低于1000copies/ml1000copies/ml不进行耐药检测，只有大不进行耐药检测，只有大于于1000copies/ml1000copies/ml的病人才做耐药检测。的病人才做耐药检测。艾滋病检测实验室安全防护艾滋病检测实验室安全防护一、建立安全制度一、建立安全制度（一一）实实验验室室的的设设备备、建建筑筑和和设设施施的的安安全全性性应应通通过过专专家家的评审。的评审。（二二）建建立立安安全全标标准准操操作作程程序序，该该程程序序应应适适用用于于现现有有的的实验条件，并与实验室其他规章制度一致。实验条件，并与实验室其他规章制度一致。（三三）无无论论是是否否发发生生意意外外事事故故，每每年年都都要要对对安安全全标标准准操操作程序及其实施情况进行检查。作程序及其实施情况进行检查。（四四）制制定定意意外外事事故故处处理理预预案案。建建立立意意外外事事故故的的登登记记和和报告制度。报告制度。二、人员管理和培训二、人员管理和培训（一）人员管理（一）人员管理 1 1、实实验验室室主主任任应应了了解解所所有有工工作作人人员员。在在安安排排工工作作区区域域时时，要要根根据据人人员员的的工工作作种种类类和和所所涉涉及及的的生生物物材材料料，对对实实验验室室环境做安全检查。环境做安全检查。2 2、新新调调入入人人员员、外外来来合合作作、进进修修和和学学习习的的人人员员在在进进入入实实验验室室之之前前必必须须经经过过实实验验室室主主任任的的批批准准。非非实实验验室室人人员员和和物品不得进入实验室。物品不得进入实验室。3 3、严严格格执执行行实实验验室室工工作作人人员员年年度度采采血血检检测测HIVHIV抗抗体体和和备备案制度，工作人员血清应长期保留。案制度，工作人员血清应长期保留。（二）培训（二）培训 1 1、所所有有工工作作人人员员必必须须经经过过HIVHIV检检测测技技术术和和实实验验室室安安全全培培训训，包包括括上上岗岗培培训训和和复复训训，并并接接受受实实验验室室管管理理人人员员的的监监督督。实实验验室室的的安安全全责责任任人人要要对对工工作作和和环环境境的的安安全全负负责责，所有工作人员都有责任保护自己和他人的安全。所有工作人员都有责任保护自己和他人的安全。2 2、必必须须告告知知新新上上岗岗人人员员实实验验室室工工作作的的潜潜在在危危险险，进进行行安安全教育，直至有能力后方可单独工作。全教育，直至有能力后方可单独工作。三、安全保障措施三、安全保障措施（一）个人保健（一）个人保健 1 1、高高标标准准的的个个人人保保健健对对于于减减少少感感染染的的危危险险性性很很重重要要。皮皮肤肤受受损损、患患病病都都会会增增加加感感染染的的危危险险。皮皮肤肤的的伤伤口口和和擦擦伤都应以防水敷料覆盖。伤都应以防水敷料覆盖。2 2、进进实实验验室室前前要要摘摘除除首首饰饰，修修剪剪长长的的带带刺刺的的指指甲甲，以以免刺破手套。免刺破手套。3 3、进进入入实实验验室室应应穿穿隔隔离离衣衣，戴戴手手套套。如如果果接接触触物物传传染染危险性大，则应戴双层手套和防护眼镜。危险性大，则应戴双层手套和防护眼镜。4 4、脱去隔离衣，离开实验室前必须洗手。、脱去隔离衣，离开实验室前必须洗手。5 5、严严禁禁在在艾艾滋滋病病检检测测实实验验室室内内进进食食、饮饮水水、吸吸烟烟和和化化妆。妆。（二）带入和带出实验室的物品（二）带入和带出实验室的物品 1 1、对对所所有有带带入入实实验验室室的的物物品品都都应应进进行行检检查查。含含有有测测试试样样品品的的包裹应在安全柜或其他适当的装置内打开。包裹应在安全柜或其他适当的装置内打开。2 2、将将HIVHIV测测试试样样品品转转送送其其他他实实验验室室时时，应应防防止止对对人人员员和和环环境境的的污污染染。护护送送样样品品的的人人应应明明确确接接收收地地点点和和接接收收人人，实实验验室室负负责责人人或或其其指指定定的的人人员员应应及及时时确确认认样样本本已已送送达达指指定定的的实实验验室室，被被转转入入安全位置并得到妥善处理。安全位置并得到妥善处理。3 3、污染或可能造成污染的材料在带出实验室前应进行消毒。、污染或可能造成污染的材料在带出实验室前应进行消毒。（三）减少利器的使用（三）减少利器的使用 1 1、尽尽量量避避免免在在实实验验室室使使用用针针头头、刀刀片片等等利利器器，如如果果必必须须使使用用在在处处理理或或清清洗洗时时，应应采采取取措措施施防防止止刺刺伤伤或或划划伤伤，并应对用过的物品进行消毒处理。并应对用过的物品进行消毒处理。2 2、最好不使用玻璃制品。、最好不使用玻璃制品。3 3、尽尽量量使使用用安安全全针针具具采采血血，如如蝶蝶形形真真空空针针，自自毁毁性性针针具具等等，以以降降低低直直接接接接触触血血液液和和刺刺伤伤的的危危险险性性。.应应将将用用过的针头直接放入坚固的容器内，消毒后废弃。过的针头直接放入坚固的容器内，消毒后废弃。（四）（四）HIVHIV消毒方法消毒方法 实验室常用物品的消毒方法如下：实验室常用物品的消毒方法如下：1 1、废废弃弃物物缸缸：10%10%（v/vv/v）次次氯氯酸酸钠钠（含含1010，000 000 mg/Lmg/L有有效效氯）。氯）。2 2、生物安全柜工作台面和仪器表面：、生物安全柜工作台面和仪器表面：70%70%乙醇。乙醇。3 3、溢出物：、溢出物：10%10%次氯酸钠。次氯酸钠。4 4、生生物物安安全全柜柜和和实实验验室室：甲甲醛醛蒸蒸气气熏熏蒸蒸。生生物物安安全全柜柜：25ml25ml福福尔尔马马林林（40%w/v40%w/v甲甲醛醛）和和等等量量水水混混合合后后放放在在一一个个蒸蒸发发皿皿中中使使其其在在密密封封的的生生物物安安全全柜柜中中蒸蒸发发，保保持持至至少少6 6小小时时，最最好好过过夜夜。实实验验室室：福福尔尔马马林林和和水水加加热热沸沸腾腾，其其体体积积根根据据实验室的大小而定。实验室的大小而定。5 5、污污染染的的台台面面和和器器具具：37%37%甲甲醛醛水水溶溶液液，也也可可以以用用过过氧氧化化氢或过氧乙酸。氢或过氧乙酸。四、实验室事故处理四、实验室事故处理（一）紧急处理措施（一）紧急处理措施 发发生生意意外外事事故故时时，应应立立即即进进行行紧紧急急处处理理，根根据据具具体情况采用相应的方法。体情况采用相应的方法。1 1、皮皮肤肤针针刺刺伤伤或或切切割割伤伤：立立即即用用肥肥皂皂和和大大量量流流水水冲冲洗洗，尽尽可可能能挤挤出出损损伤伤处处的的血血液液，用用70%70%乙乙醇醇或或其其他他消消毒毒剂剂消消毒伤口。毒伤口。2 2、皮皮肤肤污污染染：用用水水和和肥肥皂皂冲冲洗洗污污染染部部位位，并并用用适适当当的的消毒剂浸泡，如消毒剂浸泡，如70%70%乙醇或其他皮肤消毒剂。乙醇或其他皮肤消毒剂。3 3、粘膜污染：用