1、血清谷丙转氨酶测定1、原理转氨作用：将-氨基酸的氨基通过酶促作用转移到-酮基上，生成相应的酮酸与氨基酸的反应。催化这一反应的酶称为转氨酶。转氨酶广泛存在于机体的各种组织中。在肝、心、肾等组织中，谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）的活性均较高。在正常的新陈代谢过程中，血清内两种酶维持一定水平的转氨酶活性（即正常值）。血清谷丙转氨酶测定当肝、心、肾等组织发生病变时，由于组织细胞肿胀、坏死导致大量的酶释放到血流中，从而引起血清谷丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶(GOT)活性显著升高。因此测定这些酶的活性对某些疾病的临床诊断具有重要的参考价值。本试验用丙氨酸和-酮戊二酸为底物(基质液成分)经血清
2、谷丙转氨酶作用生成谷氨酸及丙酮酸。丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成2，4-二硝基苯腙，此物在碱性条件下呈棕红色。根据棕红色的深浅与同样处理的丙酮酸标准液进行比较，即可计算出酶的活性。其反应过程如下：血清谷丙转氨酶测定0COOHC OCH3NO2 H2N HNNO2COOHC CH3NO2 N HNNO2+丙酮酸-2，4-二硝基苯腙 棕红色，520nm处具特征光吸收，颜色深浅（OD520值）与丙酮酸含量成正比，可据此进行比色测定。2，4-二硝基苯肼COOHC NH2CH3 COOH C O(CH2)2 COOHCOOHC OCH3 COOH C NH2(CH2)2 COOH+谷丙转氨酶AlaG
3、lu-KG丙酮酸血清谷丙转氨酶测定King氏法谷丙转氨酶活性单位：每毫升血清在37与pH7.4的基质液作用60分钟，生成1umol丙酮酸为一个活力单位。临床检验取血清量为0.1，报告数据以100ml血清计算，因此实际侧得结果乘1000即可。2、实验材料及试剂实验材料：动物或人血清实验试剂：丙酮酸标准液要求临用前配制；其它试剂的配制见P188。3、试验结果的处理血清谷丙转氨酶测定、标准曲线的制作以表1中的A520为纵坐标，酶活性单位为横坐标，绘制标准曲线。、样品中转氨酶活性的计算a、标准曲线测定法根据样品管的A520（已减去空白管的）查标准曲线，即得每100ml血清中转氨酶的活性单位数。b、标准管测定法根据表2数据按下式计算酶活力：样品管A520 A-AGPT活性单位数/100ml血清 =200 =200 标准管A520 A-A血清谷丙转氨酶测定、回收率计算 实际测得值 （样品+标准测得值）A-(A+A)/2回收率/%=100 =100 理论计算值 (A A)/2+(A A)/2 （样品+标准计算值）/2
浙ICP备2021020529号-1 | 浙B2-20240490 
