液相分析中样品溶剂的选择.pptx

1/20液相分析中样品溶剂的选择2/20目目 录录p溶剂效应的概念p含有离子对试剂实验中的溶剂效应p梯度洗脱方法中的溶剂效应p抗生素与甲硝唑实验中的溶剂效应3/20什么是溶剂效应？溶剂效应的现象p色谱图上较早洗脱的峰前沿或者开叉，与此同时较晚洗脱的峰则较为正常，这些现象可能是有以下原因引起的样品溶液的溶剂很可能强于流动相。可能发生溶剂效应的情况p出峰时间早p保留弱p进样量大溶剂效应溶剂效应p样品溶液的溶剂强度强于流动相溶剂强度时可能会造成的峰展宽、峰分叉现象。4/20离子对方法中的溶剂效应离子对方法中的溶剂效应5/20051015205 m mL10 m mL20 m mL30 m mL40 m mL50 m mL75 m mL100 m mL min 硫胺吡哆醇核黄素样品溶剂:CH3CN/H2O=10/901 26/2005101520 min 5 5 m mL L10 10 m mL L20 20 m mL L30 30 m mL L40 40 m mL L50 50 m mL L75 75 m mL L100 100 m mL L吡哆醇硫胺核黄素样品溶剂:流动相 1 27/20p 使用10%乙腈作为样品溶剂时，随着进样量的增加，保留较弱的吡哆醇和硫胺出现裂峰p使用含有离子对试剂的流动相作为样品溶剂时，则不会发生上述现象。结论8/20CAPCELL PAK C18 MG,2.0 mm i.d.X 150 mm,40 H H2 2O,CHO,CH3 3OH,0-100%OH,0-100%梯度分析梯度分析,200 mL/min杀虫剂的标准混合物质(10 g/mL)用甲醇溶解用甲醇溶解,Injection vol.10 10 m mL LLeadLeadinging梯度洗脱时的溶剂效应梯度洗脱时的溶剂效应9/20结论p出峰早的峰受溶剂效应影响发生前沿p解决方案:降低进样量；使用初始有机相进行样品溶解10/20抗生素甲硝唑分析中的溶剂效应抗生素甲硝唑分析中的溶剂效应 实验背景：实验背景：我们按照2007版化妆品卫生规范中抗生素与甲硝唑的方法进行分析，在实验中发现溶剂效应。11/20化妆品中抗生素与甲硝唑的分析化妆品中抗生素与甲硝唑的分析1、盐酸美满霉素（M.W.493.9）Minocycline hydrochloride2、甲硝唑（M.W.171.15）Metronidazole3、二水土霉素（M.W.496.46）Oxytetracycline dihydrate4、盐酸四环素（M.W.480.9）Tetracycline hydrochloride5、盐酸金霉素（M.W.515.34）Chlortetracycline hydrochloride6、盐酸多西环素（M.W.480.9）Doxycycline hydrochloride7、氯霉素（M.W.323.13）Chloramphenicol12/200707版卫生规范实验条件版卫生规范实验条件p实验方法介绍甲醇+0.1mol/L盐酸=1+1色谱柱：C18 250mm*4.6mm I.D.，5m；检测器：二极管阵列检测器，检测波长268nm；流动相：0.01mol/L草酸溶液（磷酸调节水溶液的pH至2.0）+甲醇+乙腈=67+11+22（HPLC分析前，经0.45m滤膜过滤及真空脱气）；流 量：0.8mL/min；柱 温：室温。p样品溶剂13/20MG混标结果混标结果：按照07版化妆品卫生规范的样品提取溶液（甲醇+0.1mol/L盐酸=1:1）溶解基线抬高，影响定量0707版化妆品卫生规范方法版化妆品卫生规范方法14/20MG空白结果由于出现未知的基线抬升，为确定是何原因引起的，分别对空白溶剂和各个单标进行分析MG单标1结果MG单标2结果各单标及空白各单标及空白均无杂峰均无杂峰15/20通过混标与单标对比，发现每个单标均无杂峰；单标1、2在混合进样后峰高降低了（实际样品量同为1ug）；因此确定1、2号峰中间的物质为1、2号标准品在卫生规范溶剂中相互作用的结果。123416/20样品溶解方法：取单标1、2各100L混合用卫生规范溶剂定溶至1mL结果不同溶剂下单标不同溶剂下单标1、2混合物的出峰行为混合物的出峰行为样品溶解方法：取单标1、2各250L混合用流动相定溶至1mL结果样品溶解方法：取单标1、2各100L混合用流动相定溶至1mL结果随着样品溶随着样品溶剂中流动相剂中流动相比例增大会比例增大会逐渐消除单逐渐消除单标标1 1和和2 2之间之间的相互作用的相互作用17/20MG流动相溶解标准品结果用流动相溶解标准物质用流动相溶解标准物质1 1和和2 2之间基线之间基线未抬升未抬升HPLC Conditions HPLC Conditions：色谱柱：CAPCELL PAK C18 MG 250mm*4.6mm I.D.，5m；检测器：二极管阵列检测器，检测波长268nm；流动相：0.01mol/L草酸溶液（磷酸调节水溶液的pH至2.0）+甲醇、乙腈=74+26（HPLC分析前，经0.45m滤膜过滤及真空脱气）；流 量：0.8mL/min；柱 温：30。18/20结论p综上所述，样品1-盐酸美满霉素与样品2-甲硝唑在07版卫生规范中的提取溶液内会发生某种相互作用，导致混合样品中相应峰高降低，基线抬升；p若在提取后用流动相进行10倍稀释，或直接用流动相对标准品进行溶解则可解决该问题。19/20结论尽可能选用流动相作为样品溶剂尽可能选用流动相作为样品溶剂20/20