液相色谱培训二理论基础.pptx

液相色谱培训二、理论基础1、基本概念2、基本参数1、基本概念1.1、色谱图(chromatogram)-样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号-时间曲线，又称色谱流出曲线(elution profile)。1.2、基线(base line)-经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴。1.3、噪音(noise)-基线信号的波动。通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。1、基本概念1.4、漂移(drift)-基线随时间的缓缓变化。主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。1.5、色谱峰(peak)-组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线上的突起部分。正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线。不对称色谱峰有两种：前延峰(leading peak)和拖尾峰(tailing peak)。1、基本概念1.6、拖尾因子(tailing factor，T)，用以衡量色谱峰的对称性。也称为对称因子(symmetry factor)或不对称因子(asymmetry factor)。1.7、峰宽（peak width，W)-峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。1.8、峰高(peak height，h)-峰的最高点至峰底的距离。1.9、峰面积(peak area，A)-峰与峰底所包围的面积。1、基本概念1.10、半峰宽（peak width at half-height，Wh/2)-峰高一半处的峰宽。Wh/22.3551.11、标准偏差（standard deviation，)-正态分布曲线x1 时（拐点）的峰宽之半。正常峰的拐点在峰高的0.607 倍处。标准偏差的大小说明组分在流出色谱柱过程中的分散程度。小，分散程度小、极点浓度高、峰形瘦、柱效高；反之，大，峰形胖、柱效低。2、基本参数2.1、定性参数（保留值）2.1.1、死时间(dead time，t0)-不保留组分的保留时间。即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。2.1.2、死体积(dead volume，V0)-由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。2、基本参数2.1.3、保留时间(retention time，tR)-从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。2.1.4、保留体积(retention volume，VR)-从进样开始到某组分在柱后出现浓度极大值时流出溶剂的体积。又称洗脱体积。VRFtR2、基本参数2.2、柱效参数2.2.1、理论塔板数(theoretical plate number，N)-用于定量表示色谱柱的分离效率（简称柱效）。N 取决于固定相的种类、性质（粒度、粒径分布等）、填充状况、柱长、流动相的种类和流速及测定柱效所用物质的性质。2、基本参数N 与柱长成正比，柱越长，N 越大。用N 表示柱效时应注明柱长，如果未注明，则表示柱长为1 米时的理论塔板数。（一般HPLC 柱的N 在1000 以上。）2.2.2、理论塔板高度(theoretical plate height，H)-每单位柱长的方差。实际应用时往往用柱长L 和理论塔板数计算。2、基本参数2.3、相平衡参数2.3.1、分配系数(distribution coefficientK)在一定温度下，化合物在两相间达到分配平衡时，在固定相与流动相中的浓度之比。随着浓度的增大，K 减小，这时色谱峰为拖尾峰；而有时随着溶质浓度增大，K 也增大，这时色谱峰为前延峰。在同一色谱条件下，样品中K 值大的组分在2、基本参数固定相中滞留时间长，后流出色谱柱；K值小的组分则滞留时间短，先流出色谱柱。混合物中各组分的分配系数相差越大，越容易分离。在HPLC 中，固定相确定后，K 主要受流动相的性质影响。实践中主要靠调整流动相的组成配比及pH 值，以获得组分间的分配系数差异及适宜的保留时间，达到分离的目的2、基本参数2.3.2、容量因子(capacity factor，k)-化合物在两相间达到分配平衡时，在固定相与流动相中的量之比。因此容量因子也称质量分配系数。容量因子的物理意义：表示一个组分在固定相中停留的时间（tR）是不保留组分保留时间（t0）的几倍。k0 时，化合物全部存在于流动相中，在固定相中不保留，tR0；k 2、基本参数越大，说明固定相对此组分的容量越大，出柱慢，保留时间越长。容量因子与分配系数的不同点是：K 取决于组分、流动相、固定相的性质及温度，而与体积Vs、Vm 无关；k 除了与性质及温度有关外，还与Vs、Vm 有关。由于tR、t0 较VsVm 易于测定，所以容量因子比分配系数应用更广泛。2、基本参数2.3.3、选择性因子(selectivity factor，)-相邻两组分的分配系数或容量因子之比。要使两组分得到分离，必须使1。与化合物在固定相和流动相中的分配性质、柱温有关，与柱尺寸、流速、填充情况无关。从本质上来说，的大小表示两组分在两相间的平衡分配热力学性质的差异，即分子间相互作用力的差异。2、基本参数2.4、分离参数2.4.1、分离度(resolution，R)-相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值。也叫分辨率，表示相邻两峰的分离程度。R1.5 称为完全分离。中国药典规定R 应大于1.5。提高分离度有三种途径：增加塔板数。方法之一是增加柱长，但这样会延长保留时间、增加柱压。更好的方法2、基本参数是降低塔板高度，提高柱效。增加选择性。一般可以采取以下措施来改变选择性：a.改变流动相的组成及pH 值；b.改变柱温；c.改变固定相。改变容量因子。这常常是提高分离度的最容易方法，可以通过调节流动相的组成来实现。本次培训结束本次培训结束 谢谢大家！谢谢大家！