1、n教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生n实验课时：实验课时：4 4学时学时n课程类型：专业实验课课程类型：专业实验课n课程要求：必修课程要求：必修n每组人数：每组人数：2 2人人实验目的和要求实验目的和要求n掌握细菌的培养方法。n掌握平板划线法、斜面、液体和半固体培养基等各种接种方法。n熟悉接种工具、接种环境要求和无菌操作要领。n学会观察平板、斜面、液体、半固体培养基中细菌的生长现象。实验内容实验内容n常用细菌培养方法。n细菌的分离培养和接种技术。n细菌生长现象观察。一、常用细菌培养方法一、常用细菌培养方法n需氧培养法（一般培养）n适用于需氧菌和兼性厌氧
2、菌培养。n培养温度：37（采用恒温培养箱）。n培养时间：1824h。n二氧化碳培养法n适用于奈瑟菌属和布鲁菌属等苛养菌培养。n可采用烛缸法、二氧化碳培养箱。一、常用细菌培养方法一、常用细菌培养方法n微需氧培养法n适用于空肠弯曲菌、幽门螺杆菌等微需氧菌培养。n可采用抽气换气法。n厌氧培养法n适用于专性厌氧菌培养。n厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等。二、细菌的分离培养和接种技术二、细菌的分离培养和接种技术(一)接种工具n接种针和接种环：由三部分组组成，即环（针）、金属柄和绝缘柄。接种前后都要过火灭菌。接种针用于穿刺接种细菌，接种环用于固体、液体培养基的细菌接种。nL型玻璃棒：
3、用于琼脂平板涂布接种细菌。（二）接种环境（二）接种环境n操作需在接种罩、超净工作台或无菌室内进行。（三）细菌接种的基本程序（三）细菌接种的基本程序灭菌接种环灭菌接种环沾取标本沾取标本接种接种灭菌接种环灭菌接种环杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境细菌接种的基本程序细菌接种的基本程序取菌种试管和待取菌种试管和待接种的斜面试管接种的斜面试管灭菌接种环灭菌接种环沾取标本沾取标本接种接种接种后灭菌接种环接种后灭菌接种环（四）接种方法（四）接种方法1.平板划线接种法：n目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形
4、成单个菌落，以便获得纯菌。n方法：n分区划线法：适用于含菌量较多的标本。n连续划线法：适用于含菌量较少的标本。分区划线法分区划线法第一区划线第一区划线灭菌接种环灭菌接种环第二区划线第二区划线灭菌接种环灭菌接种环第三区划线第三区划线灭菌接种环灭菌接种环连续划线法连续划线法（四）接种方法（四）接种方法2.液体培养基接种法n可观察细菌在培养基中的生长现象或用作生化反应实验。（四）接种方法（四）接种方法3.半固体培养基接种法：n穿刺接种法，用于保存菌种或观察细菌动力。11（四）接种方法（四）接种方法4.斜面接种法：n用于鉴定和保存菌种。（四）接种方法（四）接种方法5.涂布接种法：n用于测定标本中活菌数
5、和药敏实验细菌接种。（四）接种方法（四）接种方法6.倾注培养法：用于细菌计数。n将上述已接种细菌的培养基置37恒温培养箱中孵育1824h，观察细菌的生长现象。三、细菌在培养基上的生长现象三、细菌在培养基上的生长现象1、细菌在、细菌在固体固体培养基中的生长现象培养基中的生长现象n菌落n定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。n菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性。n菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。菌落与菌苔菌落与菌苔菌落菌落菌苔菌苔2、细菌在、细菌在液体液体培养基中的生长现象培养基中的生长现象n混浊n沉淀：多见于链状排列的细菌。n菌膜：多见于厌氧菌。细菌在液体培养基中的生长现象细菌在液体培养基中的生长现象菌膜菌膜菌沉淀菌沉淀均匀浑浊均匀浑浊对照对照3、细菌在、细菌在半固体半固体培养基中的生长现象培养基中的生长现象n有鞭毛细菌：n在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘模糊。n无鞭毛细菌：n只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。细菌在半固体培养基中的生长现象细菌在半固体培养基中的生长现象有动力有动力 现象现象无动力无动力 现象现象
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