交叉配血聚凝胺法微柱凝胶法.pptx

交叉配血第1页/共14页交叉配血聚凝胺法：n原理：原理：将将红细胞和血清放置在胞和血清放置在低离子低离子介介质中孵育，可促中孵育，可促进抗体和抗体和红细胞膜血型抗原胞膜血型抗原结合，再加入合，再加入聚凝胺聚凝胺促促进红细胞非特异性凝胞非特异性凝集。离心后加入集。离心后加入重重悬液液(电荷中和荷中和)，正常，正常红细胞的凝集解散，胞的凝集解散，而抗体抗原而抗体抗原结合引起的合引起的红细胞胞凝集仍然存在。凝集仍然存在。第2页/共14页操作步骤：n抽取受血者静脉血抽取受血者静脉血3 34ml4ml，枸，枸橼酸酸钠抗凝，以生理抗凝，以生理盐水洗水洗涤受血者受血者红细胞胞3 3次，配成次，配成3%3%红细胞胞悬液，同液，同样方法方法处理献血者理献血者样本；本；n取取洁净小小试管管2 2支，支，1 1支支标记为主主侧管，另管，另1 1支支标为次次侧管；管；n主主侧管内加受血者血清管内加受血者血清2 2滴、献血者滴、献血者红细胞胞悬液液1 1滴；滴；次次侧管加献血者血清管加献血者血清2 2滴、受血者滴、受血者红细胞胞悬液液1 1滴；滴；n每管各加每管各加LIMLIM溶液溶液0.6ml0.6ml，混匀，室温孵育，混匀，室温孵育1min;1min;n每管各加每管各加2 2滴聚凝胺溶液，混合后静置滴聚凝胺溶液，混合后静置15s;15s;n1300g1300g离心离心15s15s，倾去上清液；去上清液；n轻轻摇动试管，目管，目测细胞有无凝集，如无凝集，必胞有无凝集，如无凝集，必须重做；重做；n加入加入2 2滴重新滴重新悬浮液，并浮液，并轻轻转动试管混合，肉眼管混合，肉眼观察察结果，必要果，必要时用用显微微镜观察察结果。果。第3页/共14页结果判断：n主主侧管和次管和次侧管内管内红细胞凝集在胞凝集在1min1min散开，散开，则为聚凝胺引起的非特异性凝集，表示受血者和聚凝胺引起的非特异性凝集，表示受血者和献血者配血相容。献血者配血相容。n如果主如果主侧管和管和/或次或次侧管内管内红细胞凝集不散开，胞凝集不散开，则表明两血不相容，献血者血液不可表明两血不相容，献血者血液不可输注。注。第4页/共14页注意事注意事项：n 实验结果必果必须在在3 3分分钟内判内判读n在冬天气温在冬天气温较低低时，某些病人血清中含有冷，某些病人血清中含有冷凝集素而凝集素而导致交叉配血假阳性致交叉配血假阳性;遇此遇此现象可用象可用37-4037-40生理生理盐水洗水洗涤红细胞并置胞并置3737水溶水溶中中轻轻摇动，观察察结果。果。第5页/共14页LIM:降低降低 溶液的离子强度溶液的离子强度,减少红细胞周围的阳离子云，减少红细胞周围的阳离子云，可促进抗体和红细胞膜血型抗原结合。可促进抗体和红细胞膜血型抗原结合。第6页/共14页聚凝胺聚凝胺:高价阳离子高价阳离子,中和红细胞表面的负电荷，缩短细胞中和红细胞表面的负电荷，缩短细胞间距间距,促进红细胞非特异性凝集。促进红细胞非特异性凝集。第7页/共14页第8页/共14页重悬液重悬液:电荷中和电荷中和。第9页/共14页第10页/共14页第11页/共14页微柱凝胶卡交叉配血试验 n原理：原理：将受血者、献血者的血清和将受血者、献血者的血清和红细胞，放置主胞，放置主侧和和次次侧管的反管的反应室中，放置室中，放置37孵育器中孵育，孵育器中孵育，如果血清中存在如果血清中存在针对红细胞抗原的血型抗体胞抗原的血型抗体（lgM型或型或IgG型）型）时，红细胞胞发生凝集，离心生凝集，离心后留在微柱的表面，后留在微柱的表面，为阳性；如果血清中不含有阳性；如果血清中不含有针对红细胞膜上血型抗原的抗体，胞膜上血型抗原的抗体，红细胞下沉到胞下沉到微柱管的底部，微柱管的底部，为阴性。阴性。第12页/共14页操作步骤：n按照按照试剂说明配制好献血者、受血者的明配制好献血者、受血者的红细胞胞悬液液以及分离血清。以及分离血清。n主主侧：25ul 受血者血清受血者血清+50ul 1%献血者献血者红细胞，胞，加入主加入主侧管反管反应室内；室内；n次次侧：25ul献血者血清献血者血清+50ul 1%受血者受血者红细胞，胞，加入到次加入到次侧管反管反应室内；室内；n加加样后的后的试剂卡放置卡放置专用孵育器用孵育器37孵育孵育15min；n取出取出试剂卡，放置卡，放置专用离心机用离心机1000g离心离心9min；n取出取出试剂卡，肉眼卡，肉眼观察察结果。果。第13页/共14页结果判断：n阴性阴性结果：果：红细胞完全沉降于凝胶管底胞完全沉降于凝胶管底部。部。n阳性阳性结果：果：红细胞凝集胞凝集块位于凝胶表面位于凝胶表面或凝胶中，和（或）出或凝胶中，和（或）出现溶血。溶血。第14页/共14页