1、定磷法测定定磷法测定RNA含量含量2、定磷法的原理、定磷法的原理 a、比色法的测定原理、比色法的测定原理由由于于钼钼蓝蓝的的OD660值值与与溶溶液液中中的的磷磷含含量量成成正正比比，因因此此，如如以以磷磷含含量量为为横横坐坐标标，OD660值值为为纵纵坐坐标标，二二者者之之间间的关系应为直线。如下图：的关系应为直线。如下图：磷酸磷酸 +钼酸钼酸 磷钼酸磷钼酸 钼蓝钼蓝H+还原剂还原剂（抗坏血酸）（抗坏血酸）蓝蓝色色，660nm处处有有特特征征光光吸吸收收，OD值值与与无无机机磷磷含含量量成成正正比比，可可据据此此通通过过比比色法测定磷含量。色法测定磷含量。定磷法测定定磷法测定RNA含量含量未
2、知样品磷含量的测定：未知样品磷含量的测定：由未知样品的由未知样品的OD660值，值，通过标准曲线，用作图通过标准曲线，用作图 法即可知道未知样品的法即可知道未知样品的 磷含量，如右图所示：磷含量，如右图所示：b、定磷法的特点：、定磷法的特点：定定磷磷法法测测定定时时如如用用抗抗坏坏血血酸酸作作还还原原剂剂，比比色色的的最最适适范范围为围为1-10微克无机磷。微克无机磷。钼钼蓝蓝反反应应极极为为灵灵敏敏，微微量量杂杂质质的的磷磷、硅硅酸酸盐盐、铁铁离离子子、以及酸度偏高偏低均会影响测定结果。以及酸度偏高偏低均会影响测定结果。OD660未知未知磷含量磷含量（ugug）定磷法测定定磷法测定RNA含量
3、含量3、RNA含量的测定原理含量的测定原理由由于于RNA的的含含磷磷量量为为9.5%，因因此此，将将测测得得的的含含磷磷量量乘乘以以100/9.5即为即为RNA的量。的量。4、定糖法的定性测定原理、定糖法的定性测定原理2、材料与试剂、材料与试剂1、实验材料、实验材料RNA粗制品粗制品戊糖戊糖 糠醛糠醛 绿色复合物绿色复合物苔黑酚苔黑酚-FeCl3H+定磷法测定定磷法测定RNA含量含量2、实验试剂、实验试剂实验试剂配制中的注意事项参实验试剂配制中的注意事项参P-139。3、实验步骤、实验步骤实验中的注意事项及解说详见实验讲义实验中的注意事项及解说详见实验讲义P-140。4、实验结果及处理、实验结果及处理1、无机磷标准曲线的制作、无机磷标准曲线的制作将将所所得得的的实实验验数数据据以以磷磷含含量量为为横横坐坐标标，光光密密度度为为纵纵坐坐标，画出标准曲线。标，画出标准曲线。定磷法测定定磷法测定RNA含量含量2、样品测定、样品测定a、RNA的定性鉴定的定性鉴定认真观察颜色变化并解释实验现象。认真观察颜色变化并解释实验现象。b、RNA的定量测定的定量测定记录样品的光密度值，根据下式计算记录样品的光密度值，根据下式计算RNA的含量：的含量：0RNA（ug/mg鲜重）鲜重）=标准曲线上查得标准曲线上查得的含磷量（的含磷量（ug）样品鲜重（样品鲜重（mg）稀释倍数稀释倍数 100095
浙ICP备2021020529号-1 | 浙B2-20240490 
