探讨高危型HPV感染对宫颈阴道微生态菌群及miR-222、miR-18a表达的影响.pdf

中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 收稿日期：2023 年 12 月 21 日 作者简介：李雯琪（1998），女，汉族，陕西西安人，本科，研究方向为妇产。-1-探讨高危型 HPV 感染对宫颈阴道微生态菌群及 miR-222、miR-18a 表达的影响 李雯琪 沈阳医学院，辽宁 沈阳 110000 摘要：摘要：目的 探讨高危型 HPV 感染对宫颈阴道微生态菌群及 miR-222,miR-18a 表达的影响。方法 在 2021 年 12 月到 2022 年 12 月期间，随机选取 1000 例在我院接受宫颈筛查的妇女，均检查 HPV。以是否感染为标准，将所有研究对象分为为 HR-HPV 阴性组（n=892）和 HR-HPV 阳性组（n=108）。应用 PCR 检测法对宫颈和阴道脱落细胞进行检测，了解其 HR-HPV 感染情况；应用 DNA 探针技术对阴道分泌物中的加德纳细菌(BV)、霉菌(VVC)和滴虫(TV)进行检测，了解其 HR-HPV 感染情况；应用阴道微生态检测仪对过氧化氢、唾液酸苷酶、白细胞酯酶进行检测；应用实时定量荧光 PCR 对 miR-222、miR-18a 表达进行检测；应用 Spearman 法对阴道微生态和 miR-222、miR-18a的相关性进行分析。结果 1000 名接受筛查的妇女中，108 例 HR-HPV 阳性，HPV16 检出人数最多，为 61 例，占比56.48%；在 HR-HPV 阳性组中，研究对象菌群多样性、BV 阳性率、过氧化氢阳性率为 33.33%（36 例）、30.56%（33例）、95.37%（103 例），阳性组各项数据高于阴性组，P0.05。在 HR-HPV 阳性组中，miR-222 和 miR-18a 的表达量分别为 2.740.45、3.120.51。在 HR-HPV 阴性组中，miR-222 和 miR-18a 的表达量分别为 0.550.09、0.810.14。两组差异具有统计学意义，P0.05；BV 阳性率、过氧化氢阳性率与 miR-222 和 miR-18a 均表现出正相关，P0.05。结论 患者感染 HR-HPV后，其机体微生态环境会变得紊乱，miR-222 和 miR-18a 表达量升高，BV 阳性率、过氧化氢阳性率 miR-222 和miR-18a 均是危险因素。关键词：关键词：高危型 HPV 感染；宫颈阴道；微生态菌群；miR-222；miR-18a 表达 中图分类号：中图分类号：R71 宫颈癌是一种发生在女性宫颈部位的恶性肿瘤。宫颈是连接子宫和阴道的部分，宫颈癌通常起源于宫颈上皮细胞的异常增生，逐渐发展为恶性肿瘤1。宫颈癌通常与人乳头瘤病毒（HPV）感染有关，特别是高危型 HPV 感染（如 HPV16 和 HPV18）。这种病毒通过性接触传播，感染后可引起宫颈细胞的异常变化，最终导致癌变。定期进行宫颈癌筛查，如宫颈细胞学检查（Pap涂片）和 HPV 检测，可以帮助早期发现宫颈癌或前癌变病变。目前的研究表明，HR-HPV 感染和宫颈阴道微生态菌群的失衡可能存在一定的关联。微生态菌群是指生活在人体内的微生物群落，包括细菌、真菌和病毒等。宫颈阴道微生态菌群的平衡对于维持女性生殖道的健康非常重要。另外，高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）感染与 miR-222 和 miR-18a 的表达之间存在一定的关系。研究表明，HR-HPV 感染可以导致miR-222 的上调。miR-222 是一种微小 RNA，它参与了多种生物学过程的调控，包括细胞增殖、凋亡和侵袭等。miR-222 的上调与肿瘤的发生和发展密切相关，因为它可以抑制抗肿瘤基因的表达，促进肿瘤细胞的增殖和侵袭。HR-HPV 感染也可以影响 miR-18a 的表达。综上，本文主要探讨高危型 HPV 感染对宫颈阴道微生态菌群及 miR-222,miR-18a 表达的影响。研究结果如下。1 资料与方法 1.1 一般资料 在 2021 年 12 月到 2022 年 12 月期间，随机选取1000 例在我院接受宫颈筛查的妇女，均检查 HPV。以是否感染为标准，将所有研究对象分为为 HR-HPV 阴性组（n=892）和 HR-HPV 阳性组（n=108）。所有研究对象均处于 18-65 岁之间，并签署知情同意书。排除近期使用过阴道炎相关药物、存在严重疾病、进行免疫治疗的人。中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生-2-1.2 方法 应用PCR检测法对宫颈和阴道脱落细胞进行检测。使用专用的采样刷或刮片，从宫颈和阴道表面采集脱落细胞样本。通常在妇科检查中进行采集，也可以由医生或护士指导患者自行采集。将采集到的脱落细胞样本放入适当的容器中，加入保存液或缓冲液，以保持细胞的完整性和稳定性。样本处理的具体方法可能因实验室的要求而有所不同。使用 DNA 提取试剂盒等方法，从脱落细胞样本中提取 DNA。提取过程旨在分离和纯化细胞中的 DNA 分子，以便进行后续的 PCR分析。根据需要检测的目标基因或序列，设计合适的引物（primers）和探针（probes）。引物和探针是PCR 反应中用于扩增和检测目标 DNA 序列的特定序列。将提取的 DNA 加入 PCR 反应体系中，包括引物、探针、酶和缓冲液等。通过一系列的温度循环，包括变性、退火和延伸步骤，使目标 DNA 序列得以扩增。利用凝胶电泳、荧光探针或其他方法，对 PCR 扩增产物进行分析和检测。可以根据 PCR 产物的大小、荧光信号或其他特征来确定目标基因或序列的存在与否。根据PCR分析的结果，判断目标基因或序列的有无、数量或变异情况。结合临床资料和其他检测结果，进行综合判断和诊断。应用 DNA 探针技术对阴道分泌物中的加德纳细菌（BV）、霉菌（VVC）和滴虫（TV）进行检测。使用专用的采样刷或刮片，从阴道分泌物中采集样本。通常在妇科检查中进行采集，也可以由医生或护士指导患者自行采集。将采集到的阴道分泌物样本放入适当的容器中，加入保存液或缓冲液，以保持样本的完整性和稳定性。样本处理的具体方法可能因实验室的要求而有所不同。使用 DNA 提取试剂盒等方法，从样本中提取 DNA。提取过程旨在分离和纯化样本中的DNA 分子，以便进行后续的 PCR 分析。根据需要检测的目标细菌或真菌，设计合适的引物（primers）和探针（probes）。引物和探针是 PCR 反应中用于扩增和检测目标 DNA 序列的特异性分子。将提取到的 DNA 样本与 PCR 反应体系中的引物和探针一起进行 PCR 扩增。PCR 反应会在特定的温度条件下，使目标 DNA 序列得以扩增。使用特定的 DNA 探针技术，如荧光探针技术或其他标记技术，对 PCR 扩增产物进行检测。这些探针会与目标 DNA 序列特异性结合，并产生荧光信号或其他标记信号。通过检测荧光信号或其他标记信号，判断样本中是否存在目标细菌或真菌。根据信号的强度和特征，可以确定是否阳性或阴性。应用阴道微生态检测仪对过氧化氢、唾液酸苷酶和白细胞酯酶进行检测收集阴道分泌物样本。可以使用专门的采样器具，如阴道拭子或吸管，将阴道分泌物采集到样本容器中。将采集到的阴道分泌物样本放入阴道微生态检测仪中进行处理。根据具体的检测仪器，可能需要将样本进行离心、稀释或其他预处理步骤。阴道微生态检测仪会使用特定的化学试剂或传感器来测量样本中的过氧化氢水平。过氧化氢是一种常见的氧化剂，其水平可用于评估阴道微生态的平衡状态。唾液酸苷酶是一种酶类物质，其水平可用于评估阴道黏膜的健康状况。阴道微生态检测仪会使用特定的试剂或传感器来测量样本中的唾液酸苷酶水平。白细胞酯酶是一种酶类物质，其水平可用于评估阴道炎症反应的程度。阴道微生态检测仪会使用特定的试剂或传感器来测量样本中的白细胞酯酶水平。阴道微生态检测仪会根据测量结果生成报告。报告可能包括过氧化氢、唾液酸苷酶和白细胞酯酶的水平，以及对阴道微生态平衡和健康状况的评估。应用实时定量荧光 PCR（Real-Time Quantitative Polymerase Chain Reaction）对 miR-222 和 miR-18a的表达进行检测。从目标组织或细胞中提取总 RNA。可以使用商业化的 RNA 提取试剂盒，按照说明书的指引 进 行 样 本 提 取。使 用 逆 转 录 酶（ReverseTranscriptase）将提取得到的总 RNA 转录为 cDNA。在反应体系中加入逆转录酶、引物（primers）和核苷酸三磷酸（dNTPs），根据实验设计选择合适的温度和时间进行逆转录反应。在 PCR 反应管中加入合 成 的cDNA、引 物（primers）、荧 光 探 针（fluorescentprobes）、PCRMasterMix（包含聚合酶、缓冲液和其他反应物）和去离子水。引物和荧光探针的设计应基于目标 miRNA 的序列。将 PCR 反应管放入实时定量 PCR 仪器中，按照设定的程序进行 PCR 扩增。程序通常包括初始变性步骤、循环扩增步骤和荧光信号检测步骤。循环扩增步骤会重复多次，每个循环包括 DNA 变性、引物结合和 DNA 合成。实时定量PCR 仪器会记录每个循环的荧光信号，并根据设定的阈值确定荧光信号的阴性和阳性。根据荧光信号的变化，可以计算出 miR-222 和 miR-18a 的表达量。数据分析 中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生-3-表 1 两组受试者阴道微生态情况比较n(%)组别 例数 菌群多样性级 BV 阳性率 过氧化氢阳性率 VVC 阳性率 TV 阳性率 唾液酸苷酶阳性率 白细胞酯酶阳性率 HR-HPV 阳性组 108 33.33%(36 例)30.56%(33 例)95.37%(103 例)11.11%(12 例)3.70%(4 例)12.96%(14 例)67.59%(73 例)HR-HPV 阴性组 892 23.65%(211 例)20.96%(187 例)88.57%(790 例)12.56%(112 例)5.04%(45 例)8.97%(80 例)65.02%(580 例)X2 4.852 5.165 4.669 0.185 0.372 1.805 0.281 P 0.028 0.023 0.031 0.667 0.542 0.179 0.596 表 2 HR-HPV 感染者 miR-222 和 miR-18a 的表达（）组别 例数 miR-222 表达量 miR-18a 表达量 HR-HPV 阳性组 108 2.740.45 3.120.51 HR-HPV 阴性组 892 0.550.09 0.810.14 t 50.454 46.858 P 0.000 0.000 表 3 HR-HPV 感染患者阴道微生态与 miR-222 和 miR-18a 的相关性 指标 miR-222 miR-18a r P r P BV 阳性率 0.397 0.000 0.256 0.003 过氧化氢阳性率 0.321 0.001 0.373 0.000 通常使用特定软件进行。1.3 观察指标 HPV 感染情况；HR-HPV 感染者阴道微生态情况；HR-HPV 感染者宫颈脱落细胞中 miR-222,miR-18a 表达；HR-HPV 感染者阴道微生态和 miR-222,miR-18a 相关性。1.4 统计学处理 所收集的数据使用 SPSS22.0 软件进行分析，计量方式是（），检验值为“t”，计数方式为n(%)，使用 x2检验计数资料，应用 Spearman 法对阴道微生态和 miR-222、miR-18a 的相关性进行分析，“P0.05”。2 结果 2.1 HPV 感染阴道微生态情况 1000 名接受筛查的妇女中，108 例 HR-HPV 阳性，HPV16 检出人数最多，为 61 例，占比 56.48%，P0.05。在 HR-HPV 阳性组中，研究对象菌群多样性、BV 阳性率、过氧化氢阳性率分别为 33.33%（36 例）、30.56%（33例）、95.37%（103 例）。在 HR-HPV 阴性组中，研究对象菌群多样性、BV 阳性率、过氧化氢阳性率分别为23.65%（211 例）、20.96%（187 例）、88.57%（790 例）。阳性组各项数据高于阴性组，P0.05。见表 1。2.2 HR-HPV 感染者 miR-222 和 miR-18a 表达 在 HR-HPV 阳性组中，miR-222 和 miR-18a 的表达量分别为 2.740.45、3.120.51。在 HR-HPV 阴性组中，miR-222 和 miR-18a 的表达量分别为 0.550.09、0.810.14.两组差异具有统计学意义，P0.05。见表2。2.3 HR-HPV 感染患者阴道微生态与 miR-222 和miR-18a 的相关性 BV 阳性率、过氧化氢阳性率与 miR-222 和 miR-18a均表现出正相关，P0.05。见表 3。3 讨论 高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染与宫颈癌的发生密切相关2。该病毒感染可引起宫颈细胞的异常变化，并对阴道微生态菌群和 miR-222、miR-18a 的表达产生影响。高危型 HPV 感染可导致阴道微生态菌群的失衡3。正常情况下，阴道内存在多种有益菌群，如乳酸杆菌等，能够维持阴道的酸碱平衡并抑制有害菌的生长。然而，高危型 HPV 感染可能导致阴道微生态的改变，使有益菌数量减少，有害菌的数量增加，从而增加了宫颈癌的风险。miR-222 和 miR-18a 是两种与宫颈癌发生和发展相关的 miRNA4。研究发现，高危型 HPV 感染可导致 miR-222 和 miR-18a 的表达水平上调。miR-222的上调可能促进宫颈癌细胞的增殖和侵袭，并抑制细胞凋亡。而 miR-18a 的上调可能抑制宫颈癌细胞的凋亡和增殖。因此，高危型 HPV 感染对宫颈阴道微生态菌群和 miR-222、miR-18a 的表达产生影响，这些变化可能与宫颈癌的发生和发展密切相关。了解这些影响有助于深入研究宫颈癌的机制，并为宫颈癌的预防和中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生-4-治疗提供新的思路5。在本研究中，1000 名接受筛查的妇女中，有 108例 HR-HPV 阳性，HPV16 检出人数最多，为 61 例，占比56.48%；在 HR-HPV 阳性组中，研究对象菌群多样性、BV 阳性率、过氧化氢阳性率均高于阴性组，P0.05。在 HR-HPV 阳性组中，miR-222 和miR-18a 的表达量高于 HR-HPV 阴性组，两组差异具有统计学意义，P0.05；BV 阳性率、过氧化氢阳性率与miR-222 和 miR-18a 均表现出正相关，P0.05。因此，HR-HPV 感染者机体微生态环境会变得紊乱，miR-222 和 miR-18a 表达量升高，BV 阳性率、过氧化氢阳性率、miR-222 和 miR-18a 均是危险因素。参考文献 1 石 瑞 芳,杨 胜 梅,周 红 艳.不 同 高 危 型 HPV 感 染 与 宫 颈 癌 及 高 级 别 病 变 的 相 关 性 J.临 床 研究,2023,31(09):12-16.2明小琼,陈莉莉.抗 HPV 生物蛋白敷料联合保妇康栓治疗宫颈糜烂合并高危型 HPV 感染的效果及对阴道微生态和炎症因子的影响J.中外医学研究,2022,20(30):48-52.3 杨 颖,韦 玉 姣.阴 道 微 生 态 与 高 危 型 HPV 感 染 及 宫 颈 病 变 的 相 关 性 研 究 进 展 J.右 江 医学,2021,49(12):952-956.4黄梅,张琳,孙宇佳等.高危型 HPV 感染和宫颈癌前病变与阴道微生态的相关性研究J.当代医学,2021,27(09):151-152.5吴小梅,吉昌兰,杨慧等.阴道微生态异常与高危型 HPV 感染的相关性J.中外医学研究,2021,19(08):87-89.