生物技术实验凝集反应市公开课一等奖百校联赛特等奖课件.pptx

生物技术试验凝集反应免疫学教研室免疫学教研室 刘平刘平第1页凝集反应【试验目标】1了解凝集反应原理、基本类型及其临床意义。2掌握玻片凝集试验、间接凝集试验试验方法和结果分析。第2页【概述】在一定浓度电解质溶液中，颗粒性抗原与对应抗体结合后，出现肉眼可见凝集块，称为凝集反应。抗原抗原特异性特异性抗体抗体特异特异结合结合电解质电解质抗原抗体复合物抗原抗体复合物第3页 凝集反应是一个定性检测方法，也能够进行半定量检测。因为凝集反应方法简便，当前在临床检验中仍被广泛应用。凝集反应可分为直接凝集反应和间接凝集反应。第4页一、直接凝集反应细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参加下可直接与对应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应。惯用凝集试验有玻片法和试管法两种。第5页玻片凝集试验ABO血型判定 玻片凝集试验为定性试验，普通用已知抗体作为诊疗血清，与受检颗粒抗原，如菌液或红细胞抗原各加一滴在玻片上，混匀，数分钟后即可用肉眼观察凝集结果，出现凝集颗粒为阳性。此法简便，快速，适合用于从病人标本中分离得到菌种诊疗或分型，也可用于红细胞ABO血型判定。第6页【试验原理】人类ABO血型抗原主要有A和B两种，依据红细胞表面这两种抗原有没有可把血型分为四种。据此，将抗A和抗B抗体分别与待测红细胞混合，抗A或（和）抗B抗体与红细胞表面上对应抗原结合而引发红细胞凝集，据其凝集情况便可判定出受试者血型。ABO血型划分 红细胞表面Ag血清中AbA型A抗BB型B抗AAB型A、B、O型、抗A、抗B第7页【试验材料】1ABO血型判定试剂盒内含抗A分型试剂和抗B分型试剂各1支。2一次性采血针1枚、洁净玻片2块、75酒精、灭菌棉签。第8页 3用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。用另一载玻片一端取适量血液加入抗抗A分型试剂，并混匀；用另一端再取适量血液加入抗抗B分型试剂，并混匀。用干棉签止血。4观察红细胞有没有凝集发生。如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。判定结果后把玻片放入消毒液中。【试验方法】1取洁净载玻片1块，并标识（如图）2将抗A、B分型试剂分别加1滴于标识有A、B玻片两侧。AB抗A抗B第9页【试验结果】第10页二、间接凝集反应将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小颗粒性载体表面（这种载体与免疫无关），然后与对应抗体或抗原结合，在适量电解质存在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应。依据载体不一样可将间接凝集反应分为：间接血细胞凝集试验、间接乳胶凝集试验（及间接乳胶凝集抑制试验）和金黄色葡萄球菌协同凝集试验等。第11页载体载体可溶性抗原可溶性抗原致敏致敏致敏颗粒致敏颗粒NSNS凝集颗粒凝集颗粒 间接凝集试验示意图间接凝集试验示意图原理第12页载体种类及其处理方法载体种类及其处理方法红细胞：红细胞：新鲜红细胞吸附蛋白质能力差。普通新鲜红细胞吸附蛋白质能力差。普通先醛化后应用。先醛化后应用。聚苯乙烯胶乳颗粒：聚苯乙烯胶乳颗粒：可物理吸附蛋白质；常制备带有化学可物理吸附蛋白质；常制备带有化学活性基团颗粒活性基团颗粒第13页间接凝集抑制试验妊娠试验【试验原理】可溶性抗原致敏乳胶颗粒与对应抗体作用可使乳胶颗粒凝集，此为间接乳胶凝集试验。若使抗体先与可溶性抗原作用，再加入该抗原致敏乳胶颗粒，则乳胶凝集被抑制，此为间接乳胶凝集抑制试验。孕妇尿中绒毛膜促性腺激素（HCG）含量显著增高。HCG与抗HCG抗体先作用后，再加入HCG致敏乳胶颗粒，不出现凝集反应，此为妊娠试验阳性；非孕妇尿中HCG含量不足以消耗掉抗HCG抗体，抗体与后加入HCG致敏乳胶结合展现凝集现象，则妊娠试验阴性。第14页第15页间接凝集抑制试验间接凝集抑制试验待测抗原待测抗原已知抗体已知抗体特异特异结合结合抗原抗体复合物抗原抗体复合物NSNS致敏颗粒致敏颗粒无凝集颗粒无凝集颗粒阳性阳性第16页间接凝集抑制试验间接凝集抑制试验待测抗原待测抗原已知抗体已知抗体无结合无结合抗原抗体分散抗原抗体分散NSNS致敏颗粒致敏颗粒有凝集颗粒有凝集颗粒阴性阴性第17页【试验材料】1妊娠诊疗试剂盒：内含抗血清（抗HCG）、乳胶抗原（HCG致敏）各一支2 1号尿、2号尿。3有格玻片和毛细吸管等。第18页【试验方法】1在玻片第1、第2内分别加1滴1号尿、2号尿。2每格内加入妊娠诊疗试剂抗血清1滴。轻轻摇动12 min使其充分混匀。3每格加入乳胶抗原1滴，轻轻摇动玻片35 min后观察结果，统计各标本有没有凝集现象。第19页【试验结果】孕妇尿格呈均匀浑浊乳状液，无凝集，妊娠试验阳性；正常尿格出现白色细小凝集物，随时间延长凝集物变成小块状，妊娠试验阴性。待检尿若为乳状液，妊娠试验阳性；若出现凝集，则妊娠试验阴性。12孕妇尿孕妇尿正常尿正常尿第20页【注意事项】1试验所用诊疗试剂用前应充分摇匀，而且应在使用期内使用。2加样用滴管及混匀用牙签不能共用。3加样不宜太多，玻片应一直保持水平，以防两格之反应液相混。第21页【试验思索】1统计血型判定试验、乳胶妊娠诊疗试验材料、方法及结果判定（可用图示或表格方式表示）。2直接凝集试验与间接凝集试验有何不一样？3在各凝集试验中都设有对应对照，有何意义？若对照出现异常怎样分析及处理？第22页