人教版教学酶的生产条件的优化以及常用酶的应用省公共课一等奖全国赛课获奖课件.pptx

第二章第二章第二章第二章 酶生产酶生产酶生产酶生产 The production of EnzymeThe production of Enzyme 1第1页一、酶生产方法一、酶生产方法 n1、提取法提取法 (Extraction)酶作为生物催化剂普遍存在于动物、植物、微生物中，酶作为生物催化剂普遍存在于动物、植物、微生物中，能够直接从生物体中分离提纯而取得，早期酶生产多是能够直接从生物体中分离提纯而取得，早期酶生产多是以动植物为主要原料提取而得。以动植物为主要原料提取而得。动、植物等原料中提取。n例：胰脏胰蛋白酶、胰淀粉酶、胰脂肪酶；n 动物胃胃蛋白酶；n 动物小肠碱性磷酸酶；n 木瓜木瓜蛋白酶；n 菠萝皮菠萝蛋白酶；n 柠檬酸发酵废菌体果胶酶 等。第2页n利用动物、植物细胞和组织培养方法来生产酶，因为周利用动物、植物细胞和组织培养方法来生产酶，因为周期较长、成本较高，也存在一定难度。期较长、成本较高，也存在一定难度。n50年代以来酶生产主要方法。n80年代以来，植物细胞或动物细胞发酵。n主要方式：固态发酵和液体发酵法n2、发酵生产法、发酵生产法(Biosynthesis)第3页1 1、氧化、氧化-还原酶还原酶（1 1）葡萄糖氧化酶）葡萄糖氧化酶（起源于霉菌）（起源于霉菌）（2 2）D D氨基酸氧化酶氨基酸氧化酶（起源于霉菌、肾脏）（起源于霉菌、肾脏）（3 3）尿激酶）尿激酶（起源于酵母菌、肾脏）（起源于酵母菌、肾脏）（4 4）过氧化氢酶）过氧化氢酶（起源于细菌、霉菌、红血球）（起源于细菌、霉菌、红血球）（5 5）近氧化物酶）近氧化物酶（起源于植物）（起源于植物）2 2、转移酶、转移酶（1 1）转氨基酶）转氨基酶（起源于细菌、动物肝脏）（起源于细菌、动物肝脏）（2 2）核苷磷酸转移酶）核苷磷酸转移酶（起源于细菌）（起源于细菌）3 3、水解酶脂肪酶、水解酶脂肪酶（起源于细菌、霉菌、胰脏）（起源于细菌、霉菌、胰脏）5-5-磷酸二酯酶磷酸二酯酶（起源于霉菌）（起源于霉菌）淀粉酶淀粉酶（起源于细菌、霉菌、胰脏、麦芽）（起源于细菌、霉菌、胰脏、麦芽）果胶酶果胶酶（起源于细菌、霉菌）（起源于细菌、霉菌）纤维素酶纤维素酶（起源于霉菌、蘑菇）（起源于霉菌、蘑菇）半纤维素酶半纤维素酶（起源于霉菌）（起源于霉菌）溶菌酶溶菌酶（起源于细菌、鸡卵白）（起源于细菌、鸡卵白）蜜二糖酶蜜二糖酶（起源于霉菌）（起源于霉菌）乳糖酶乳糖酶（起源于细菌、霉菌）（起源于细菌、霉菌）转化酶转化酶（起源于细菌、酵母）（起源于细菌、酵母）透明质酸酶透明质酸酶（起源于细菌、动物睾丸）（起源于细菌、动物睾丸）凝乳酶凝乳酶（起源于霉菌、小牛胃、羊胃）（起源于霉菌、小牛胃、羊胃）天冬酰胺酶天冬酰胺酶（起源于细菌）（起源于细菌）脲酶脲酶（起源于豆科植物）（起源于豆科植物）青霉素酰化酶青霉素酰化酶（起源于细菌、霉菌）（起源于细菌、霉菌）氨基酰化酶氨基酰化酶（起源于细菌、霉菌、牛肾脏）（起源于细菌、霉菌、牛肾脏）橙皮苷酶橙皮苷酶（起源于霉菌）（起源于霉菌）蛋白酶蛋白酶（起源于霉菌、放线菌、动物内脏、植物瓜果）（起源于霉菌、放线菌、动物内脏、植物瓜果）第4页4 4、裂合酶、裂合酶裂合酶天冬氨酸天冬氨酸-脱羧酶脱羧酶（起源于细菌）（起源于细菌）-酪氨酸酶酪氨酸酶（起源于细菌）（起源于细菌）延胡索酸酶延胡索酸酶（起源于细菌）（起源于细菌）谷氨酸脱羧酶谷氨酸脱羧酶（起源于细菌）（起源于细菌）5 5、异构酶、异构酶氨基酸消旋酶氨基酸消旋酶（起源于细菌、霉菌、酵母）（起源于细菌、霉菌、酵母）葡萄糖异构酶葡萄糖异构酶起源于细菌、放线菌（起源于细菌、放线菌第5页（1）酶液体发酵生产普通过程）酶液体发酵生产普通过程液体酶制剂生产流程图液体酶制剂生产流程图第6页n微生物种类多、酶种丰富;n微生物生长繁殖快，酶易提取;n微生物培养基起源广泛、价格廉价;n酶发酵生产过程可实现规模化连续化。（2）微生物产酶优点）微生物产酶优点第7页n3、化学合成法：、化学合成法：n60年代中期出现新技术。n人工合成酶方法人工合成酶方法 1969 年，美国首次用化学合成法得到含有124个氨基酸核糖核酸酶。n要求氨基酸纯度高，合成成本高昂。至今停留在试验室阶段。n当前还受到试剂、设备条件限制。当前还受到试剂、设备条件限制。第8页nn1 1 1 1、中心法则（中心法则（Central Dogma Central Dogma）二、酶生物合成过程二、酶生物合成过程Reverse transcription第9页2、RNA生物合成生物合成(转录转录)-Transcription 在在RNARNA合成中，合成中，DNADNA二条链中仅有一条链可作为转录模板，称为转录不对称二条链中仅有一条链可作为转录模板，称为转录不对称性。性。转录所需酶转录所需酶 依赖依赖DNARNADNARNA聚合酶又称为转录酶。聚合酶又称为转录酶。原核生物转录酶由原核生物转录酶由1 1种种RNARNA聚合酶催化全部聚合酶催化全部RNARNA生物合成。生物合成。真核生物中真核生物中RNARNA聚合酶分别为聚合酶分别为RNARNA聚合酶聚合酶、RNARNA聚合酶聚合酶和和RNARNA聚合酶聚合酶33种，种，它们都属于寡聚酶，酶亚基数目为它们都属于寡聚酶，酶亚基数目为4 41010个，亚基种类有个，亚基种类有4 46 6种。种。第10页n过程过程：RNARNA聚合酶聚合酶 DNADNA开启基因开启基因，DNADNA双螺旋部分解开双螺旋部分解开，以其中，以其中一条一条链为模板链为模板，经过碱基互补方式结合进入第一个核苷酸，然后，经过碱基互补方式结合进入第一个核苷酸，然后，RNARNA聚合酶聚合酶移动移动，DNADNA逐步解开，按模板碱基次序逐一加入核苷酸并聚合成逐步解开，按模板碱基次序逐一加入核苷酸并聚合成多聚核苷酸链多聚核苷酸链。转录成。转录成RNARNA按结构和功效不一样分为按结构和功效不一样分为mRNA,tRNAmRNA,tRNA和和rRNArRNA。RNA聚合酶聚合酶第11页nn3 3、翻译：、翻译：、翻译：、翻译：nn以以mRNAmRNA为为模模板板，以以氨氨基基酸酸为为底底物物，在在核核糖糖体体上上经经过过各各种种tRNAtRNA，酶和辅助因子，合成多肽。，酶和辅助因子，合成多肽。nn分四个过程：分四个过程：nnA A、氨基酸活化生成氨酰、氨基酸活化生成氨酰-tRNA-tRNA nnB B、肽链合成起始、肽链合成起始nnC C、肽链延长、肽链延长nnD D、肽链合成终止、肽链合成终止第12页nA、氨基酸活化生成氨酰-tRNAn氨基酸在氨酰-tRNA合成酶作用下，与特定tRNA结合，由ATP供给能量；第13页A A ULeucineAC UAsparticAcidAUGThreonineTRANSFER RNAAMINO ACIDS第14页A A ULeucineAC UAsparticAcidAUGThreonineAmino acids combine with the tRNAs using the energy from the splitting of ADP.第15页A A ULeucineAC UAsparticAcidAUGThreonineAmino acids combine with the tRNAs using the energy from the splitting of ADP.第16页A A ULeucineAC UAsparticAcidAUGThreonineANTICODON第17页nnB B、肽链合成起始：、肽链合成起始：nn在在GTPGTP和起始因子参加下核糖体和起始因子参加下核糖体30S30S亚基、甲酰甲硫氨酰亚基、甲酰甲硫氨酰-tRNAFtRNAF（fMet-tRNAFfMet-tRNAF）、）、mRNA mRNA 和和 50S 50S亚基结合组成起始复亚基结合组成起始复合物。合物。第18页nn30S30S与起始因子与起始因子IF3IF3结合；结合；30S30S与与mRNAmRNA结合形成结合形成30S-IF3-mRNA30S-IF3-mRNA复合物；复合物；fMet-tRNAFfMet-tRNAF与起始因子与起始因子IF2IF2以及以及GTPGTP结合；结合；n过程可分为五个阶段进行：第19页nn在起始因子在起始因子IF1IF1参加下，参加下，fMet-tRNAF-IF2-GTPfMet-tRNAF-IF2-GTP与与30S-IF3-mRNA30S-IF3-mRNA结合生成结合生成30S30S起始复合物，起始复合物，fMet-fMet-tRNAFtRNAF恰好位于恰好位于mRNAmRNA起始密码子起始密码子AUGAUG上；上；第20页nn50S50S50S50S与与与与30 S30 S30 S30 S起始复合物结合，形成含有完整起始复合物结合，形成含有完整起始复合物结合，形成含有完整起始复合物结合，形成含有完整结构结构结构结构70S 70S 70S 70S 核糖体。同时放出核糖体。同时放出核糖体。同时放出核糖体。同时放出IF1 IF1 IF1 IF1、IF2 IF2 IF2 IF2、IF3IF3IF3IF3并使并使并使并使GTPGTPGTPGTP水解生成水解生成水解生成水解生成GDPGDPGDPGDP和和和和PiPiPiPi；第21页nnC C、肽链延长：在延伸因子参加下，与、肽链延长：在延伸因子参加下，与mRNAmRNA上密码子对应氨上密码子对应氨酰酰-tRNA-tRNA进入进入70S70S核糖体之中核糖体之中“A”“A”位。位。第22页nn经过肽合成酶作用，经过肽合成酶作用，P P位上位上fMet-tRNAFfMet-tRNAF甲酰甲硫氨酰甲酰甲硫氨酰(fMet)(fMet)与与A A位上氨酰位上氨酰-tRNA(aa1-tRNA-tRNA(aa1-tRNA：)以肽键结合，形成肽酰以肽键结合，形成肽酰-tRNAtRNA。第23页nnmRNAmRNA和核糖体作相对移动，和核糖体作相对移动，A A位上肽酰位上肽酰t-RNAt-RNA转至转至P P位，而原在位，而原在P P位上位上t-RNAFt-RNAF游离出去。然后下一个氨酰游离出去。然后下一个氨酰-tRNA-tRNA进入进入A A位，再位，再重复上述过程，使肽链不停延伸，直至终止密码子为止。重复上述过程，使肽链不停延伸，直至终止密码子为止。第24页nnD D、肽链合成终止：肽链合成终止：nn伴伴随随肽肽链链延延伸伸，mRNAmRNA与与70s70s核核糖糖体体不不停停地地作作相相对移动。对移动。n当mRNA分子中终止密码子(UAA，UAG，UGA)移动到核糖体A位时，没有对应氨酰-tRNA进入，此时释放因子(Release Factor)进入A位，并与终止密码子结合第25页n新合成肽链释放出来需经过加工形成完整空间结构酶或蛋白质。n先经过肽脱甲酰酶作用，使甲酰甲硫氨酸残基上甲酰基除去。n有时还需在氨肽酶作用下从肽链N-末端切除一个或数个氨基酸残基。n然后自动折迭弯曲成完整空间结构。第26页n三、酶生物合成调整三、酶生物合成调整 n雅各布(Jacob)和莫诺德(Monod)于1960年提出操纵子学说来说明酶生物合成调整。操纵子调整基因调整基因Regulator gene开启基因开启基因Promoter gene操纵基因操纵基因Operator gene结构基因结构基因Strutural gene第27页n（1）基因调控模式）基因调控模式3种调控模式：种调控模式：分解代谢物阻遏作用；分解代谢物阻遏作用；酶合成诱导作用；酶合成诱导作用；酶合成反馈阻遏作用酶合成反馈阻遏作用。第28页n 1）分解代谢物阻遏作用）分解代谢物阻遏作用n易利营养基质代谢使细胞内ATP浓度增加，从而使AMP浓度降低。cAMP可经过磷酸二酯酶水解成AMP致使cAMP浓度之而降低。cAMP-CRP复合物浓度跟着降低。结果，在开启基因(P)上没有cAMP-CRP复合物结合，RNA聚合酶也就无法结合到开启基因位点上。结构基因(S)上遗传信息无法转录，酶合成无法进行。第29页n当易利用基质不存在或用完后，伴随细胞中ATP浓度下降，而使ADP，AMP，cAMP浓度增加。当cAMP-CRP浓度增加到一定量时候，cAMP-CRP复合物结合到开启基因特定位点上，RNA聚合酶也伴随结合到它位点上，酶生物合成就有可能进行。第30页n2）酶生物合成诱导作用）酶生物合成诱导作用n无诱导物时，阻抑蛋白与操纵基因结合较强，开启基因上RNA 聚合酶无法进入结构基因上转录，酶不能合成。n有诱导物时，诱导物与阻抑蛋白结合，阻抑蛋白结构改变，不能与操纵基因结合，RNA聚合酶可进行转录生成mRNA，再深入翻译成酶蛋白多肽链。第31页n3）酶生物合成反馈阻遏作用）酶生物合成反馈阻遏作用n当没有共阻遏物（酶催化产物或路径末端产物）时，阻抑蛋白不能与操纵基因结合，开启基因上RNA聚合酶能顺利经过操纵基因位置结构基因进行转录，进而合成酶蛋白多肽链。n当有共阻遏物时与阻抑蛋白特异结合形成完全阻遏物，与操纵基因亲和力增强，阻止RNA聚合酶经过，结构基因无法转录，酶合成受阻。第32页四、酶生物合成模式四、酶生物合成模式细胞生长过程细胞生长过程：调整期、生长久、平衡期和衰退期等4个阶段比较细胞生长与酶产生关系比较细胞生长与酶产生关系,酶生物合成模式分为酶生物合成模式分为：同时合成型、延续合成型、中期合成型和滞后合成型。第33页1 1、同时合成型、同时合成型 酶生物合成与细胞生长同时进行。酶生物合成与细胞生长同时进行。酶合成速度与细胞生长速度紧密联络，又称为生长偶联型。酶合成速度与细胞生长速度紧密联络，又称为生长偶联型。属于该合成型酶，细胞进入旺盛生长久时，酶大量生成；当细胞生长进入平衡期后，酶合成伴随停顿。细胞浓度mg/ml酶浓度U/ml总细胞浓度 活细胞浓度胞外酶浓度 胞内酶浓度大部分组成酶生物合成属于同时合成型，大部分组成酶生物合成属于同时合成型，有部分诱导酶也按照此种模式进行生物合有部分诱导酶也按照此种模式进行生物合成。成。比如米曲霉在含有单宁或者没食子酸培比如米曲霉在含有单宁或者没食子酸培养基中生长，在单宁或没食子酸诱导作用养基中生长，在单宁或没食子酸诱导作用下，合成单宁酶（下，合成单宁酶（tanase EC3.1.1.20）。）。第34页2 2、延续合成型、延续合成型 酶生物合成在细胞生长阶段开始，在细胞生长进入平衡期后，酶酶生物合成在细胞生长阶段开始，在细胞生长进入平衡期后，酶还能够延续合成一段较长时间。还能够延续合成一段较长时间。属于该类型酶能够是组成酶，也能够是诱导酶。比如，在黑曲霉在以半乳糖醛酸或果胶为单一碳源培养基中培养，能够诱导聚半乳糖醛酸酶（Polygalacturonase，EC3.2.1.15）生物合成。细胞浓度mg/ml酶浓度U/ml细胞浓度mg/ml酶浓度U/ml以半乳糖醛酸为诱导物 以含有葡萄糖果胶为诱导物 第35页3 3、中期合成型、中期合成型 该类型酶在细胞生长一段时间以后才开始，而在细胞生长进入平衡期以该类型酶在细胞生长一段时间以后才开始，而在细胞生长进入平衡期以后，酶生物合成也伴随停顿后，酶生物合成也伴随停顿。细胞浓度mg/ml酶浓度U/ml比如，枯草杆菌碱性磷酸酶比如，枯草杆菌碱性磷酸酶（Alkaline phophatase，EC 3.1.3.1)生物合成模式属于中期合成型。因为该酶合成受到其反应产物无机磷酸反馈阻遏，而磷又是细胞生长所必不可缺营养物质，培养基中必须有磷存在。在细胞生长开始阶段,培养基中磷阻遏碱性磷酸酶合成，只有当细胞生长一段时间，培养基中磷几乎被细胞用完（低于0.01 mmol/L）以后，该酶才开始大量生成。又因为碱性磷酸酶所对应mRNA不稳定，其寿命只有30 min左右，所以当细胞进入平衡期后，酶生物合成伴随停顿。第36页4 4、滞后合成型、滞后合成型 这类型酶是在细胞生长一段时间或者进入平衡期以后才开始其生物这类型酶是在细胞生长一段时间或者进入平衡期以后才开始其生物合成并大量积累。又称为合成并大量积累。又称为非生长偶联型非生长偶联型。许多水解酶生物合成都属于这一类型。许多水解酶生物合成都属于这一类型。酶合成受到培养基中存在阻遏物受到培养基中存在阻遏物阻遏作用。只有伴随细胞生长，阻遏物几乎被细胞用完而使阻遏解除后，阻遏作用。只有伴随细胞生长，阻遏物几乎被细胞用完而使阻遏解除后，酶才开始大量合成。酶才开始大量合成。若培养基中不存在阻遏物，该酶合成能够转为延续合成型。该类型酶所对应mRNA稳定性很好，能够在细胞生长进入平衡期后相当长一段时间内，继续进行酶生物合成。黑曲霉羧基蛋白酶生物合成 放线菌素D 对产酶影响细胞浓度mg/ml酶浓度U/ml酶浓度U/ml酶浓度U/ml3022不加加入不加加入第37页5、理想酶合成模式、理想酶合成模式nmRNAmRNA稳定性好，平衡期以后继续合成酶；不受阻遏物影响；生产稳定性好，平衡期以后继续合成酶；不受阻遏物影响；生产中，中，最理想合成模式应是延续合成型。n同时合成型要尽可能提升其对应同时合成型要尽可能提升其对应mRNAmRNA稳定性，为此适当降低发酵温度是可稳定性，为此适当降低发酵温度是可取办法；取办法；n滞后合成型要设法降低培养基中阻遏物浓度滞后合成型要设法降低培养基中阻遏物浓度 ，尽可能降低甚至解除产物阻，尽可能降低甚至解除产物阻遏或分解代谢物阻遏作用，使酶生物合成提早开始；遏或分解代谢物阻遏作用，使酶生物合成提早开始；n中期合成型则要在提升中期合成型则要在提升mRNAmRNA稳定性以及解除阻遏两方面下功夫，使其生物稳定性以及解除阻遏两方面下功夫，使其生物合成开始时间提前，合成开始时间提前，并尽可能延迟其生物合成停顿时间。并尽可能延迟其生物合成停顿时间。第38页6 6、酶生产过程中细胞生长动力学、酶生产过程中细胞生长动力学 细胞生长动力学主要研究细胞生长速度以及外界环境原因对细胞生长速度影响规律。1950年，法国 Monod首先提出了表述微生物细胞生长动力学方程。在培养过程中，在培养过程中，细胞生长速率与细胞浓度成细胞生长速率与细胞浓度成正比正比 。假设培养基中只有一个限制性基质，而不存假设培养基中只有一个限制性基质，而不存在其它生长限制原因时，在其它生长限制原因时，为这种限制性基为这种限制性基质浓度函数。质浓度函数。KS KS 为为MonodMonod常数，常数，是指比生长速率到达最是指比生长速率到达最大比生长速率二分之一时限制性基质浓度。大比生长速率二分之一时限制性基质浓度。第39页限制性基质物料平衡式限制性基质物料平衡式连续培养时方程改变形式第40页7 7、酶生产过程中产酶动力学、酶生产过程中产酶动力学 第41页与生长相关与生长部分相关与生长无关第42页惯用几个模型惯用几个模型第43页五、酶生产菌种五、酶生产菌种n枯草杆菌枯草杆菌：淀粉酶、蛋白酶；n巨大芽孢杆菌巨大芽孢杆菌：葡萄糖异构酶；n大肠杆菌大肠杆菌：谷氨酸脱羧酶、青霉素酰化酶等。n啤酒酵母啤酒酵母：转化酶、醇脱氢酶；n假丝酵母假丝酵母：脂肪酶、转化酶；n黑曲酶黑曲酶：果胶酶、酸性蛋白酶、糖化酶；n根霉根霉：糖化酶、转化酶；n毛霉菌毛霉菌：蛋白酶、糖化酶、脂肪酶；n青霉青霉：纤维素酶、葡萄糖氧化酶；n米曲霉米曲霉：糖化酶、蛋白酶；n链霉菌链霉菌：青霉素酰化酶、碱性蛋白酶、几丁质酶。第44页六、酶发酵生产工艺过程六、酶发酵生产工艺过程n1、种子扩大培养、种子扩大培养n目标：为每次发酵罐投料提供一定数量代谢旺盛菌种。n 种子扩大培养级数分为多级流程（普通三级）：斜面菌种摇床一级种子培养-二级种子罐培养-发酵罐第45页n2、发酵方法、发酵方法n（1）固体发酵法：）固体发酵法：第46页n（2）液体发酵法：）液体发酵法：第47页n（3）固定化细胞）固定化细胞n（4）固定化原生质体）固定化原生质体第48页n3、发酵工艺条件控制、发酵工艺条件控制（液体发酵为例）n（1 1）pHpH值调整值调整n细胞产酶最适pH通常靠近于该酶反应最适pH。n如：碱性蛋白酶最适pH为pH8.5-9.0；中性蛋白酶最适pH为pH6.0-7.0；酸性蛋白酶最适pH为pH4-6；n不一样细胞需不一样pH值;同一细胞不一样pH值条件下产物也不一样.n黑曲霉中性时产-淀粉酶多于产糖化酶，偏酸时产糖化酶提升而产淀粉酶降低。第49页n（2）温度调整：n产酶速度：分段控温。n产热原因：生物热+搅拌热-蒸发烧-显热-辐射热n控制：冷却n（3）溶解氧调整nN=KLC（C*-C）n影响：菌体生长；代谢路径n原因：菌体生长代谢；发酵异常（染菌：好氧杂菌、噬菌体；设备故障：加油器失灵、搅拌停顿、温控失灵、空气管堵塞）n控制：供氧角度（罐结构L/D、搅拌、气体成份、通气速率、罐压）；耗氧角度（基质浓度、温度、表面活性剂）。第50页n4、提升酶产量办法、提升酶产量办法n（1）添加诱导物：酶作用底物、酶反应产物、酶底物类似物。n（2）控制阻遏物浓度：流加难利用碳源；降低未端产物浓度。n（3）添加表面活性剂：非离子表面活性剂（吐温等）可增加细胞通透性。n（4）添加产酶促进剂：植酸钙镁霉菌蛋白酶；PVA糖化酶；醋酸钠纤维素酶第51页1 1、激肽释放酶、激肽释放酶（1）药理功效-含有扩张血管功效，并能提升血管通透性，起到改进血液循环作用。（2）临床应用-治疗动脉硬化、血管炎、四肢皮肤溃疡。（3）生产方法 提取法生产-以猪颔下腺为原料进行提取。提取法生产-以猪胰脏为原料进行提取。七、常见药用酶生产七、常见药用酶生产第52页2 2、双链酶、双链酶（1）药理作用-内含二种酶，二者适用可去除炎症物、脓块、瘀血，促进外伤伤愈合。链激酶链激酶（SK）、又称为溶栓酶。能溶解血栓和渗出物纤维部分。链道酶链道酶（SD）、又称为脱氧核糖核酸酶。能够液化死细胞（2）临床应用-治疗血肿、脓肿、骨髓炎、创伤性感染、溃疡。（3）生产方法-细菌发酵法生产。第53页3 3、超氧化物歧化酶、超氧化物歧化酶（1）药理作用-能专一性地去除人体内超氧阴离子自由基。（2）临床应用-治疗类风湿关节炎，本身免疫疾病、心肌缺血、抗衰老、断肢再植、整形美容。（3）生产方法（1）提取法-从新鲜猪血中提取（2）提取法-从玉米中提取第54页4 4、弹性酶、弹性酶（1）药理作用-能够水解弹性蛋白、血纤维蛋白、血红蛋白。（2）临床应用-用于治疗高血脂、慢性支气管炎、动脉硬化、高血压、脂肪肝。（3）生产方法提取法生产-以猪胰脏为原料进行提取。第55页5 5、胰酶、胰酶（1）药理作用-其成份为胰蛋白酶、胰淀粉酶、胰脂肪酶。能够消化淀粉、蛋白质、脂肪。（2）临床应用-助消化，增加食欲。（3）生产方法提取法生产-以猪胰脏为原料进行提取。第56页6 6、含糖蛋白酶、含糖蛋白酶（1 1）药理作用-是一个蛋白质消化酶（2）临床应用-助消化，增加食欲（3）生产方法提取法生产-以猪胰脏为原料进行提取。第57页7 7、淀粉酶、淀粉酶（1）药理作用-是一个消化酶（2）临床应用-助消化，增加食欲（3）生产方法发酵法生产-以黄曲霉发酵生产。第58页8 8、-半乳糖苷酶半乳糖苷酶（1）药理作用-消化酶，能够消化乳糖（2）临床应用-适合用于婴儿乳糖消化不良。（3）生产方法发酵法生产-以毛霉（米曲酶）发酵生产。第59页天门冬酰胺酶天门冬酰胺酶（1 1）药理作用）药理作用-对肿瘤细胞含有抑制作用。对肿瘤细胞含有抑制作用。（2 2）临床应用）临床应用-抗肿瘤制剂抗肿瘤制剂（3 3）生产方法）生产方法加入甘氨酸，60热处理30分钟 得酶溶液，加入聚乙二醇，在不一样PH值下进行精制 得无热源酶液 冻干、无菌分装 天门冬酰胺酶冻干制剂发酵法生产-以大肠杆菌发酵生产。大肠杆菌种子级菌种 加入玉米浆，发酵罐、37下培养7小时 取发酵液，加入丙酮后压滤 滤饼风干，得干菌体 加入硼酸缓冲液，PH=8、37下提取 得提取液，加醋酸调整PH=4.3，得沉淀物，即为干粗酶 第60页