实验一普通生物显微镜的使用省公共课一等奖全国赛课获奖课件.pptx

试验一、普通生物显微镜使用试验一、普通生物显微镜使用(一一)动、植物细胞、真菌观察及生物绘动、植物细胞、真菌观察及生物绘图法图法第1页一、实验目：1.1.了解普通光学显微镜和体视显微镜基本构了解普通光学显微镜和体视显微镜基本构 造及功用，并正确掌握使用和维护方法。造及功用，并正确掌握使用和维护方法。2.观察一些真核细胞结构，学习基本生物绘观察一些真核细胞结构，学习基本生物绘图方法。图方法。3.学习暂时装片制作方法。学习暂时装片制作方法。第2页二、试验原理：二、试验原理：（一）、显微镜概述：（一）、显微镜概述：显微镜是观察细胞主要工具。依据光源不一显微镜是观察细胞主要工具。依据光源不一样，可分为样，可分为光学显微镜光学显微镜和和电子显微镜电子显微镜两大类。两大类。前者以可见光（紫外线显微镜以紫外光）为光前者以可见光（紫外线显微镜以紫外光）为光源，后者则以电子束为光源。源，后者则以电子束为光源。第3页（二）、显微镜创造：（二）、显微镜创造：1.最早由荷兰眼镜商在最早由荷兰眼镜商在16前后制造，它前后制造，它结构简单，放大倍数只有结构简单，放大倍数只有1030倍，能够倍，能够观察一些小昆虫，如跳蚤等，因而有些人称观察一些小昆虫，如跳蚤等，因而有些人称它它为为“跳蚤镜跳蚤镜”。这种显微镜是用光线照明，属于光学显微镜。这种显微镜是用光线照明，属于光学显微镜。第4页2.2.英国物理学家罗伯特英国物理学家罗伯特虎克（虎克（Robert HookeRobert Hooke，1635 1635 1703 1703）研制出能够放大研制出能够放大140140倍光学显微倍光学显微 镜，并用它来观察软木薄片，发觉了细胞。镜，并用它来观察软木薄片，发觉了细胞。第5页3.3.16731673年有个名叫列文年有个名叫列文.虎克（虎克（Antoni van Antoni van LeeuwenhoekLeeuwenhoek）荷荷兰人用自己制造人用自己制造显微微镜观察到了被他称察到了被他称为“小小动物物”微生物世界。微生物世界。他也被称为微生物开山祖。他也被称为微生物开山祖。第6页4.1938年，德国工程师鲁斯卡（年，德国工程师鲁斯卡（Ernest Ruska,Ernest Ruska,1906 1906-1988)1988)制造出世界第一台透射电子显微镜制造出世界第一台透射电子显微镜（TEM）。）。1952年，英国工程师年，英国工程师CharlesOatley制造出第一台扫描电子显微镜（制造出第一台扫描电子显微镜（SEM）第7页（三）、显微镜分辨率（三）、显微镜分辨率:分辨率分辨率：也称为分辨力，它是指能把两个物点分：也称为分辨力，它是指能把两个物点分 辨清楚最小距离。辨清楚最小距离。分辨率数值越高，分辨距离越大，则分辨率越低。分辨率数值越高，分辨距离越大，则分辨率越低。反之亦然。所以，分辨率是以分辨距离来表示。反之亦然。所以，分辨率是以分辨距离来表示。其其计算公式计算公式为为:D=0.61 D=0.61入入/N NA NA NA A=n=n sina/2 sina/2 式式中中D D为为分分辨辨率率，A A为为光光波波波波长长，N NA A为为物物镜镜数数值孔径值孔径(镜口率镜口率)。第8页 在物镜上，有在物镜上，有镜口率镜口率(N.A.)N.A.)标志，它反应该镜头标志，它反应该镜头 分辨力大小，其数字越大，表示分辨率越高。分辨力大小，其数字越大，表示分辨率越高。各物镜镜口率以下表：各物镜镜口率以下表：物镜 镜口率(N.A.)工作距离(mm)10 0.25 5.40 40 0.65 0.39 100 1.30 0.11显微镜显微镜总放大倍数总放大倍数=目镜放大倍数物镜放大倍数 公式为:M=K1 K2 第9页焦点深度焦点深度:显微镜调焦到看清标本某一点时，不显微镜调焦到看清标本某一点时，不 仅是这一物点，而且它上下两侧也仅是这一物点，而且它上下两侧也 能看清楚厚度叫做焦点深度。能看清楚厚度叫做焦点深度。要看到标本全厚度，必须调整螺旋要看到标本全厚度，必须调整螺旋 仔细地从上到下进行观察仔细地从上到下进行观察。第10页三、材料和仪器：三、材料和仪器：仪器：普通光学显微镜、体视镜仪器：普通光学显微镜、体视镜（附显微用具：擦镜纸、香柏油、二甲苯、载玻片、盖玻片）材料与器材：新鲜酵母液、滴管、镊子、培养材料与器材：新鲜酵母液、滴管、镊子、培养皿、标本盒（内有各种装片）皿、标本盒（内有各种装片）第11页四、试验步骤：四、试验步骤：（一）普通显微镜使用及维护：（一）普通显微镜使用及维护：I I .光学显微镜结构光学显微镜结构普通生物显微镜由普通生物显微镜由2 2部分组成：部分组成：光学部分光学部分：包含物镜、目镜、光源、聚光器，是显：包含物镜、目镜、光源、聚光器，是显 微镜主体。微镜主体。：机械部分机械部分：包含镜筒、镜臂、镜座、镜台：包含镜筒、镜臂、镜座、镜台(载物台）、载物台）、调整旋钮、物镜转换器等，用于固定材调整旋钮、物镜转换器等，用于固定材 料和观察方便料和观察方便。第12页IIII.显微镜使用显微镜使用1.1.观察前准备工作观察前准备工作 .显微镜在使用之前应检验一下它各个部件是否显微镜在使用之前应检验一下它各个部件是否 完整和正常，并对载物台、目镜、物镜以及聚光完整和正常，并对载物台、目镜、物镜以及聚光 器上端透镜进行必要清洁工作。然后进行调整。器上端透镜进行必要清洁工作。然后进行调整。.观察时要观察时要双眼同时睁开双眼同时睁开，一边观察一边进行统计，一边观察一边进行统计 或描绘。或描绘。.观察时所用材料、药品和各种器具要预先备好观察时所用材料、药品和各种器具要预先备好第13页2.使用方法：使用方法：（1）低倍镜使用：）低倍镜使用：观察任何标本，均需从低倍镜观察任何标本，均需从低倍镜开始开始。检验：检验显微镜是否完好。检验：检验显微镜是否完好。准备：将显微镜放于准备：将显微镜放于前策略偏左前策略偏左，转动粗调旋钮，转动粗调旋钮将将载物台下降载物台下降，旋转物镜转换器使，旋转物镜转换器使低倍镜低倍镜正对通正对通光孔。光孔。对光：对光：放标本片：放标本片：调整焦距调整焦距 计算放大倍数：计算放大倍数：第14页错误原因：如按上述操作，依然看不到图象，错误原因：如按上述操作，依然看不到图象，可能有以下原因：可能有以下原因：A.转动调整太快，超出焦点，需重新调整。转动调整太快，超出焦点，需重新调整。B.物镜未对准通光孔。物镜未对准通光孔。C.标本没放在视野内，需移动标本片寻找观察标本没放在视野内，需移动标本片寻找观察对象。对象。D.光线太强或太弱。尤其观察透明或未染色标光线太强或太弱。尤其观察透明或未染色标本时，应将光线调稍暗些，有利观察。本时，应将光线调稍暗些，有利观察。第15页（2 2）高倍镜使用：）高倍镜使用：依照上述操作步骤，依照上述操作步骤，先用低倍镜先用低倍镜找到清楚物象，找到清楚物象，将需要观察部分移到视野中央，将需要观察部分移到视野中央，眼睛眼睛从侧面注视物镜从侧面注视物镜，移动转换器，换高倍镜，移动转换器，换高倍镜，看目镜，看目镜，微调细调旋钮微调细调旋钮，至看到清楚物象。，至看到清楚物象。第16页错误原因：如按上述操作，依然看不到图象，错误原因：如按上述操作，依然看不到图象，可能有以下原因：可能有以下原因：A.观察标本不在视野内。应在低倍镜下找到观察标本不在视野内。应在低倍镜下找到后，移到视野中央，再换高倍镜观察。后，移到视野中央，再换高倍镜观察。B.标本放反了。标本放反了。C.焦距未调好。焦距未调好。第17页（3 3）油镜使用：）油镜使用：先用先用低倍镜低倍镜观察标本情况。观察标本情况。换换高倍镜高倍镜，把需观察部分移至视野中央。，把需观察部分移至视野中央。将将聚光器升至最高位置，光圈开至最大。聚光器升至最高位置，光圈开至最大。在盖玻片所要观察位置滴一小滴香柏油，在盖玻片所要观察位置滴一小滴香柏油，放于载物台。放于载物台。把油镜移至工作位置。把油镜移至工作位置。第18页 慢慢调整粗细调整旋钮，使载物台慢慢调整粗细调整旋钮，使载物台迟缓上升迟缓上升，同，同 时细心时细心从侧面观察从侧面观察物镜前端与标本之间距离。物镜前端与标本之间距离。先使物镜前端与油滴先使物镜前端与油滴接触接触，再慢慢上升载物台，再慢慢上升载物台，至物镜前端至物镜前端靠近而没有碰触到靠近而没有碰触到盖玻片为止。（小盖玻片为止。（小 心损伤油镜或装片）心损伤油镜或装片）眼睛从目镜观察，迟缓调整细调旋钮至看清标本眼睛从目镜观察，迟缓调整细调旋钮至看清标本（注意只能（注意只能下降载物台下降载物台）第19页 观察完成，下降载物台，使油镜离开光轴，观察完成，下降载物台，使油镜离开光轴，及及时做好油镜清洁工作时做好油镜清洁工作（先用洁净擦镜纸擦去大（先用洁净擦镜纸擦去大部分香柏油，再用二甲苯滴湿擦镜纸擦拭两次，部分香柏油，再用二甲苯滴湿擦镜纸擦拭两次，最终用干擦镜纸擦拭一次）。最终用干擦镜纸擦拭一次）。玻片上油可用玻片上油可用“拉纸法拉纸法”擦去：把一小张擦镜擦去：把一小张擦镜纸盖在载玻片油滴上，其上滴一两滴二甲苯，纸盖在载玻片油滴上，其上滴一两滴二甲苯，趁湿把纸往外拉，连续几次，即可擦净（注意趁湿把纸往外拉，连续几次，即可擦净（注意不要使用过多二甲苯，并及时擦洁净上面香柏不要使用过多二甲苯，并及时擦洁净上面香柏油，以免使装片受损）。油，以免使装片受损）。第20页注意：注意：假如不出现物象或者目标不理想要重找，假如不出现物象或者目标不理想要重找，A.A.在在加油区之外加油区之外重找时应按：低倍重找时应按：低倍高倍高倍 油镜程序。油镜程序。B.B.在在加油区内加油区内重找应按：低倍重找应按：低倍油镜程序，油镜程序，不得经高倍镜，以免油沾污镜头。不得经高倍镜，以免油沾污镜头。第21页3.显微镜使用后复原：显微镜使用后复原：（1）下降聚光器约）下降聚光器约1cm，（2）使物镜离开光轴，使通光孔正队两个物镜中使物镜离开光轴，使通光孔正队两个物镜中间，提升载物台至原来位置，间，提升载物台至原来位置，（3）把载物台上标本移动器移至适当位置，）把载物台上标本移动器移至适当位置，（4）关闭电源。）关闭电源。第22页4 4、显微镜使用注意事项、显微镜使用注意事项（1 1）持镜时必须是右手握臂、左手托座姿势，不）持镜时必须是右手握臂、左手托座姿势，不 可单手提取，以免零件脱落或碰撞到其它地方。可单手提取，以免零件脱落或碰撞到其它地方。（2 2）轻拿轻放，不可把显微镜放置在试验台边轻拿轻放，不可把显微镜放置在试验台边缘，以免碰翻落地。缘，以免碰翻落地。（3 3）保持显微镜清洁，光学和照明部分只能用擦保持显微镜清洁，光学和照明部分只能用擦镜纸擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，机械部分镜纸擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，机械部分用布擦拭。用布擦拭。（4 4）水滴、酒精或其它药品切勿接触镜头和载物台水滴、酒精或其它药品切勿接触镜头和载物台假如沾污应马上擦净。假如沾污应马上擦净。第23页（5 5）放置玻片标本时要对准通光孔中央，且不能放置玻片标本时要对准通光孔中央，且不能反放玻片，预防压坏玻片或碰坏物镜。反放玻片，预防压坏玻片或碰坏物镜。（6 6）要养成两眼同时睁开习惯，以左眼观察视要养成两眼同时睁开习惯，以左眼观察视野右眼用以绘图。野右眼用以绘图。（7 7）不要随意取下目镜，以预防尘土落入物镜，不要随意取下目镜，以预防尘土落入物镜，也不要任意拆卸各种零件，以防损坏。也不要任意拆卸各种零件，以防损坏。（8 8）使用完成后，必须复原才能放回镜箱内。）使用完成后，必须复原才能放回镜箱内。第24页（二）、体视镜使用（二）、体视镜使用 体视显微镜又称实体显微镜体视显微镜又称实体显微镜，它在观察物体，它在观察物体时能产生正立三维空间影像。时能产生正立三维空间影像。立体感强立体感强，成像清成像清楚和宽敞楚和宽敞，又含有，又含有长工作距离长工作距离，并可依据观察物，并可依据观察物特点选取不一样反射和透射特点选取不一样反射和透射光照明，是适用范围非常广泛光照明，是适用范围非常广泛常规显微镜。常规显微镜。第25页（三）、标本观察（三）、标本观察1.“5”字片：低倍字片：低倍2.人血涂片：低倍人血涂片：低倍高倍高倍油镜油镜3.兔精虫涂片：低倍兔精虫涂片：低倍高倍高倍4.单层扁平上皮：低倍单层扁平上皮：低倍高倍高倍5.动、植物细胞有丝分裂切片：低倍动、植物细胞有丝分裂切片：低倍高倍高倍6.日本血吸虫雌雄合抱装片：肉眼日本血吸虫雌雄合抱装片：肉眼低倍低倍第26页（四）、酵母暂时装片制作（四）、酵母暂时装片制作1.滴一滴鲜酵母液于洁净载玻片上，滴一滴鲜酵母液于洁净载玻片上，2.轻轻盖上盖玻片，注意轻轻盖上盖玻片，注意不要产生气泡，不要产生气泡，3.低倍、高倍镜下观察。低倍、高倍镜下观察。注意：观察时注意光线不要太强，以免影响观察注意：观察时注意光线不要太强，以免影响观察效果。效果。第27页（五）生物学绘图方法：（五）生物学绘图方法：1.用用2H铅笔绘轮廓，用铅笔绘轮廓，用HB铅笔描深，线条要光滑，铅笔描深，线条要光滑，2.图及文字部分全部用铅笔，文字用汉字楷书，图及文字部分全部用铅笔，文字用汉字楷书，3.绘图纸上端写清试验名称，中部画图，下部写清所绘图纸上端写清试验名称，中部画图，下部写清所绘图名称、放大倍数，绘图名称、放大倍数，4.标明图中各部分名称，用直线引线并标在图右侧，标明图中各部分名称，用直线引线并标在图右侧，名称较多时，可先标在右侧，再标在左侧，名称较多时，可先标在右侧，再标在左侧，5.可用光滑黑点表示明暗不一样，不可大面积涂黑。可用光滑黑点表示明暗不一样，不可大面积涂黑。第28页五、作业：五、作业：1.绘图：绘出你用油镜所观察到人红细胞视野图。绘图：绘出你用油镜所观察到人红细胞视野图。2.思索题：思索题：（1 1）总结使用显微镜应尤其注意几个问题。）总结使用显微镜应尤其注意几个问题。（2 2）从低倍物镜转高倍物镜时应注意哪几点？）从低倍物镜转高倍物镜时应注意哪几点？（3 3）接物镜上各铭文有何意义？）接物镜上各铭文有何意义？（4 4）用油镜观察和嗣后操作步骤。为何要）用油镜观察和嗣后操作步骤。为何要 用香柏油作介质？还有哪些可作介质？用香柏油作介质？还有哪些可作介质？第29页（5）镜检时，因光线过亮而成像不清楚，怎么办）镜检时，因光线过亮而成像不清楚，怎么办？（6）为何不能直接用高倍镜观察标本？）为何不能直接用高倍镜观察标本？（7）怎样计算显微镜放大倍数？放大倍数是对）怎样计算显微镜放大倍数？放大倍数是对长度还是面积而言？长度还是面积而言？（8）观察时若发觉视野内有异物，怎样确定该异）观察时若发觉视野内有异物，怎样确定该异物在目镜、物镜、还是在玻片上，怎样去除物在目镜、物镜、还是在玻片上，怎样去除？（9）光学显微镜与体视镜有何不一样？）光学显微镜与体视镜有何不一样？（10）制作暂时玻片标本时，怎样防止产生气泡？）制作暂时玻片标本时，怎样防止产生气泡？第30页