水杨酸钠药代动力学实验分析培训课件.doc

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全血水杨酸钠药物代谢动力学参数的测定
一、 实验目的：
掌握药物代谢动力学参数的意义及其测定方法，掌握用分光光度法测定水杨酸钠（sodium salicylate）的血药浓度。

二、实验动物：
家兔 体重2.585kg 性别：雌

三、 实验药品：
20%乌拉坦、 生理盐水、0.5%水杨酸钠、0.06%水杨酸钠标准液、10%三氯醋酸、10%三氯化铁、蒸馏水
水杨酸钠在酸性环境中成为水杨酸（salicylic acid），与三氯化铁生成一种紫色络合物。该络合物在520nm 波长下比色，其光密度与salicylic acid 浓度成正比。反应式为：

四、 实验器材：
电子天平、兔台、5ml和1ml枪头、5ml注射器、6号针头、手术器械、动脉插管、棉球、头皮针、10ml离心管、722分光光度计、离心机、涡旋混匀器

五、实验方法
1、 取10支10ml试管，用0.5%肝素润湿管壁。
2、 家兔称重，从兔耳缘静脉注射20%乌拉坦（1g/kg体重，注射了13ml），待兔麻醉后，将其仰卧，先后固定四肢及兔头(此时家兔惊醒，补助乌拉坦6ml)。
3、 剪去颈前部兔毛，正中切开皮肤5-6cm，用止血钳纵向分离软组织及颈部肌肉，暴露器官及与气管平行的颈动脉。分离颈动脉，行颈动脉插管。手术完毕后，用温热的生理盐水纱布覆盖手术创口。静脉注射肝素，剂量为1000U/kg体重（约为2.58ml）。
4、 取1支10ml试管，家兔颈动脉取血1.5ml，摇匀试管内血液，防止凝血。
5、 沿对侧耳缘静脉缓慢注射10%水杨酸钠150mg/kg（因注射过程中发现部分药品漏出，补注了一部分，估计约为3.9ml）。于注射后1、3、5、10、20、50、80、110min分别颈动脉放血1.5ml入相应的试管并摇匀。
6、 取10支10ml离心管，水杨酸注射前取血管子标为“对照”，水杨酸注射之后不同时间取血管标为相应“取血时间”，另有1个管子没有取血，直接加入配置好的0.06%水杨酸钠标准液标为“标准”，按下表加入样品及试剂：
试管号
10%三氯制酸（ml）
全血（ml）
0.06%水杨酸钠（ml）
蒸馏水（ml）
对照
4
1
0
1
标准
4
1
1
0
各取血时间
4
1
0
1
7、 各试管用涡旋混匀器充分混匀，2000rpm，离心10min。
8、 各试管取上清液3ml加入另一套干净试管中，再加入10%三氯化铁0.3ml，混匀显色。以对照管调零，再722分光光度计上读取520nm的OD值。
9、 求出水杨酸钠在家兔体内的血药浓度（Y）。先求出标准管浓度（Y0）与OD值（X0）的比值（K），K=Y0/X0, Y=XK。
10、绘出药-时曲线，以水杨酸钠浓度的对数值为纵坐标，对应时间横坐标作图，分析 水杨酸钠药动力学模型及药动学参数计算。

六、 注意事项
1. 颈总动脉插管术。
2. 取血前注意用肝素润湿注射器和针头，取血后注意用肝素封管，避免血液凝固。
3. 注意取药时间的精准性。
4. 注意先放掉残留在管中的液体后再放出的血才为该被收集的血液，不要误取了管中残留的血液和肝素等。
5. 离心后不要用力摇晃细管避免沉淀物溶解。
6. 每次加样时剂量一定要准确。

七、 实验记录
采血时间
校零前实测数据
校零后数据
计算所得药物浓度(mg/ml)
对照
0.185
0
0
标准
0.226

0.041
0.060
1
0.26
0.075
0.109
3
0.229
0.044
0.064
5
0.233
0.048
0.070
10
0.228
0.043
0.063
20
0.222
0.037
0.054
50
0.165
-0.020
-0.029
80
0.163
-0.022
-0.032
110
0.154
-0.031
-0.045

八、数据分析：
因为后三组测量数据偏低，甚至低于对照组，导致计算所得的血药浓度变为负数，这明显是不现实的。因此在之后的软件分析中，将后三组血药浓度视为0进行分析（即舍弃后三组数据）。
分析时采用的程序为PKSolver Compartmental Analysis Report（Version 2.0 ），具体分析结果如下：

PKSolver Compartmental Analysis Report
==== Version 2.0 ====
User Information
Analyst: User
Date: 2014-4-15
Time: 15:03:48

User Settings
Time Unit: min
Concentration Unit: mg/ml
Dose: 390
Dose Unit: mg
Number of compartment: 2
Fitting Weight: 1
Model PKSolver #206: Compartmental Analysis of Plasma Data after IV Bolus Input

Summary Table
Time
Conc
ln(Conc)
Conc_pre
Residual
Weight
1
1.09256
0.088523566
1.09255235
7.64997E-06
1
3
0.6439
-0.44021184
0.680482934
-0.03658293
1
5
0.70244
-0.35319529
0.663605943
0.038834057
1
10
0.62927
-0.46319486
0.623329047
0.005940953
1
20
0.54146
-0.61348608
0.54996059
-0.00850059
1

Calculation Results

Parameter
Unit
Value
A
mg/ml
36.30245325
Alpha
1/min
4.521111854
B
mg/ml
0.706485351
Beta
1/min
0.012522792

Parameter
Unit
Value
k10
1/min
0.574267217
k12
1/min
3.860777535
k21
1/min
0.098589895
t1/2Alpha
min
0.153313433
t1/2Beta
min
55.3508486
C0
mg/ml
37.00893861
V
(mg)/(mg/ml)
10.53799473
CL
(mg)/(mg/ml)/min
6.051624903
V2
(mg)/(mg/ml)
412.6675785
CL2
(mg)/(mg/ml)/min
40.68485331
AUC 0-t
mg/ml*min
20.52873111
AUC 0-inf
mg/ml*min
64.44550121
AUMC
mg/ml*min^2
4506.838365
MRT
min
69.932552
Vss
mg/(mg/ml)
423.2055732

Diagnostics
Value
r obs-pre
0.991984112
SS
0.00295395
WSS
0.00295395
R^2
0.998941569

WR^2
0.998941569
SE
0.054350253
AIC
-21.1230601
SC
-22.68530845

Charts Output

分析：由于静脉给药，所以并没有表示药物在体内吸收分布的上升峰，图示的是给药后血药浓度直接大幅上升，然后表现为持续较长时间的下降支，反映药物的代谢排泄相。由图及表格分析可知:
T=0时，C=0.109
T=20时，C=0.054
由于图示趋势线较精准，不正常点值少，故可以得出结论半衰期近似等于20min.

====================The End of PKSolver Report====================
九、实验讨论：
只供学习与交流