生物多肽工艺流程.doc

生物多肽工艺流程
一、固相肽合成
（1)投料：树脂加入固相合成仪，加入DCM溶胀，抽干后加入DMF洗涤,洗涤结束抽干备用。
(2)缩合:将氨基酸用一定体积的DMF溶解，加入缩合剂活化后投入固相合成仪，补充DMF至反应浓度，搅拌反应。
(3)脱除保护基：以Kaiser试剂检测反应程度，反应结束后抽干溶剂，DMF洗涤，加入PIP/DMF溶液脱除保护基，以Kaiser试剂检测反应程度,反应完毕抽干溶剂,DMF洗涤，准备加入下一个氨基酸。
(4）缩合循环:按照树脂序列依次连接氨基酸，按照“脱保护——洗涤-—活化氨基酸——投料缩合——洗涤”步骤进行缩合循环操作，按照氨基酸序列完成剩余n个氨基酸的缩合。
（5）出料：合成结束之后用IPA和DCM交叉洗涤树脂,完成树脂收缩收缩，出料至不锈钢托盘.
(6)树脂干燥：树脂在真空干燥箱中室温干燥,干燥完毕称重，计算收率。
（7）有机废液回收，集中处理.
（8）清场：操作结束后操作人员及时清场。
二、树脂裂解
（1)配液:按照裂解液成分比例配置裂解液,并提前置冰柜中冷藏保存。
（2)投料：肽树脂加入反应釜中,加入预冷的裂解液，搅拌反应。
(3）出料：裂解结束后放出反应液，抽滤除去树脂并以TFA洗涤。
（4)浓缩：裂解液转入旋转蒸发仪室温浓缩至小体积。
(5）析出：浓缩后的反应液倾入预冷的甲基叔丁基醚(简称醚)中，搅拌使析出大量固体.
(6）离心：浊液离心,并用预冷的醚洗涤。
（7）粗肽干燥：涤完成的粗肽转至真空干燥箱中室温干燥。
（8）有机废液回收，集中处理.
(9）清场:操作结束后操作人员及时清场.
三、多肽HPLC纯化
(1)溶解：操作人员将粗肽溶解,调节PH至工艺规定范围。
（2)过滤：滤去粗肽溶液中不溶物,过滤ACN和纯化水。
（3)配制纯化液:根据工艺内容配制A相(乙腈)和B相(水）.
（4）纯化：在制备型液相上进行纯化，分别接收流份。
(5)检验及返工：对制备流份进行检查,合并合格流份，其他部分根据需要再次纯化。
（6)废弃流动相按有机废液回收，集中处理.
四、浓缩过滤冻干
（1)浓缩:合并滤液旋蒸除去有机溶剂，有机废液回收， 集中处理。
(2）过滤：浓缩后水相无菌过滤。
(3)冻干：滤液置冻干机中，设定升温程序冻干。
（4）出箱:出料、加内包.
五、质量检查、入库
工艺流程图如下所示.