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稳斑汤对动脉粥样硬化小鼠血脂代谢的影响

摘要：目的：通过观察稳斑汤对动脉粥样硬化模型小鼠血脂的影响，进而评估该药物对颈动脉粥样硬化的改善作用。方法：将60只ApoE基因敲除小鼠高脂喂养13周建立动脉粥样硬化模型，然后按随机数字表法分成组，分别为模型组，稳斑汤低、中、高剂量组和阿托伐他汀组，另取10只C57BL/6J小鼠设为空白对照组，空白对照组和模型组每日给予适量0.9%生理盐水灌胃，稳斑汤低、中、高剂量组分别给予6.175、12.35、24.7g/(kg.d)灌胃，托伐他汀组小鼠予以阿托伐他汀钙片 25.4mg/(kg.d)灌胃，13周后处死小鼠收集血液，检测各组小鼠血脂含量。结果：与空白对照组相比，模型组血清TC、TG、LDL-C表达水平均升高（P<0.05），HDL-C表达水平降低 (P<0.05)，与模型组相比，稳斑汤各剂量组和阿托伐他汀血清TC、TG、LDL-C表达水平均降低（P<0.05）,HDL-C表达水平升高（P<0.05）。结论：稳斑汤可在一定程度上改善动脉粥样硬化小鼠血脂水平，稳定斑块，从而起到对血管的保护作用。
关键词：稳斑汤；动脉粥样硬化；血脂；小鼠

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Effect of Wenban Decoction on Blood Lipid Metabolism in Mice with Atherosclerosis
Zhao Bing
Liaoning University of Traditional Chinese Medicine 110032
Abstract: Objective: To evaluate the effect of the drug on carotid atherosclerosis by observing the effect of Wenban Decoction on blood lipids in atherosclerosis model mice. Methods: 60 ApoE knockout mice were fed high-fat for 13 weeks to establish atherosclerosis models, and then pided into groups according to the random number table method, namely model group, Wenban Decoction low, medium and high dose group and Atuo In the Vastatin group, another 10 C57BL/6J mice were taken as the blank control group. The blank control group and the model group were given an appropriate amount of 0.9% normal saline daily. 12.35, 24.7g/(kg.d) gavage, mice in the torvastatin group were gavaged with atorvastatin calcium tablets 25.4mg/(kg.d), 13 weeks later, the mice were sacrificed to collect blood, and the mice in each group were tested. Rat blood lipid content. Results: Compared with the blank control group, the expression level of serum TC, TG, LDL-C in the model group increased (P<0.05), and the expression level of HDL-C decreased (P<0.05). Compared with the model group, the plaque was stable The expression levels of TC, TG and LDL-C in serum of each dose group of decoction and atorvastatin decreased (P<0.05), and the expression level of HDL-C increased (P<0.05). Conclusion: Wenban Decoction can improve the blood lipid level of atherosclerotic mice to a certain extent stabilize the plaque, and protect the blood vessels.
Keywords: Wenban Decoction; Atherosclerosis; Blood Lipid; Mice；

动脉粥样硬化（AS）是冠心病、脑卒中等心脑血管疾病的主要病理学基础，并且呈现逐年上升且年轻化的趋势。关于AS的发病机制尚未研究清楚，但是其高发病率、高死亡率及高致残率仍是导致世界人口死亡的主要原因之一[1]，因此早发现、早治疗是减少心脑血管疾病死亡的主要措施。高胆固醇血症作为动脉粥样硬化发生发展的主要危险因素之一，至今仍是众多机理研究的焦点，也是动脉粥样硬化的主要治疗靶点。动脉壁内皮下区域中富含脂质的巨噬细胞积聚是动脉粥样硬化的标志，这些富含脂质的细胞会促进动脉壁的炎症反应，并导致多种致命的病理后果，如出血、破裂和钙化，实验证明低密度脂蛋白( LDL-C)的浓度有助于动脉粥样硬化的发生和发展，，高密度脂蛋白胆固醇浓度(HDL-C)与动脉粥样硬化呈负相关,降低LDL-C已经升高HDL-C可减少动脉粥样硬化相关的心血管事件[2]，因此AS早期改善血脂，降低血液LDL-C，升高HDL-C，可有效干预AS的发展进程。前期研究已证实稳斑汤能够有效治疗AS[3],能够稳定斑块[3]，本研究拟通过观察稳斑汤对AS小鼠血脂水平的影响，以揭示稳斑汤对血脂的干预作用和防治作用。
1 材料
1.
1. 实验药物
稳斑汤: 全蝎5 g，蜈蚣1 条，地龙15 g，陈皮 15 g，法半夏 15 g，白术 15 g，水蛭 15 g，加工制成含生药2 g/ ml 中药浓缩液备用，（由辽宁中医药大学附属医院中药局提供，批号：15A82-70)；阿托伐他汀钙片: 10 mg/片( 辉瑞制药有限公司，批准文号 EF5296）。
1.
2. 动物
选择体质量为 18～20 g，6～8 周龄 SPF 级 ApoE 基因敲除雄性小鼠60只；SPF 级 C57BL/6J 小鼠 10只，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。
1.3试剂和仪器
TC、TGLDL-C、HDL-C测试盒，（南京建成生物有限公司，批号分别为：20210518、20210519、20210519、20210519）；FC型酶标仪（赛默飞世尔仪器有限公司）
2 方法
2.1动物模型制备
ApoE 基因敲除小鼠60只，给予 1 周适应性普食后改为高脂喂养，购买于
沈阳市于洪区盛旺牧业饲料厂。13 周后，采用随机数字表法选取 4 只处死，取
腹主动脉根部，油红 O 染色及 HE 染色确定造模是否成功[6]。
2.2 分组与处理
采用随机数字表法选取造模成功的50只 SPF 级 ApoE 基因敲除小鼠，
随机分为模型组、阿托伐他汀组、稳斑汤低中高浓度组每组 10 只，继续给予高脂饲料喂养；另设 C57BL/6J 小鼠 10 只为空白对照组，给予普通饲料喂养；其中空白对照组小鼠不予处理，模型组小鼠每天予以 0.3ml 生理盐水；阿托伐他汀组小鼠予以阿托伐他汀钙片 27.3mg/(kg.d)；稳斑汤各浓度组小鼠分别予以稳斑汤中药 6.175、12.35、24.7g/(kg.d)。灌胃给药，每日 1 次，共 13 周。实验结束时，颈椎脱臼处死小鼠，收集样本。
2.3 生化自动分析仪检测血脂 TC，LDL-C，HDL-C，TG 含量：
实验结束时，小鼠禁食 12h，眼球取血，室温静置 30min 后，离心 15min，
吸取上层血清，分装后于-20℃保存。参考试剂盒说明书检测血脂(TC、TG、
LDL-C、HDL-C)含量。
2.4 统计学方法
采用 SPSS19.0 软件对实验数据进行分析，每组数据均表示为 Mean±
SD。组间差异检验采用单因素方差分析（one-way ANOVA）,两两比较采
用事后分析（post-hoc，LSD）检验进行。t 检验比较两组数值变量的均数。
P<0.05 表示在统计学上有显著性差异，P<0.01 表示有几显著性差异。
3 结果
3.1 各组小鼠血脂检测结果比较
给药13周后处死小鼠，眼球取血采集血清标本，每组选取10例标本进行血脂检测。如表1所示，与空白对照组相比，模型组血脂水平显著升高，差异具有统计学意义,（P<0.05）说明AS小鼠模型造模成功，各用药组小鼠经过药物干预后，检测血脂水平均有不同程度的降低，差异具有统计学意义,（P<0.05）,说明稳斑汤对AS小鼠具有一定的治疗效果，能够有效改善血脂。
表1 各组小鼠TC、TG、LDL-C、HDL-C检测结果比较（`χ± s，n=10）
组别
TC
TG
LDL-C
HDL-C
空白对照
2.845± 0.464
1.178±0.207
0.230±0.089
2.360±0.190
模型组
22.998± 4.771 *
8.828±2.120 *
6.500±1.701 *
0.870±0.130 *
搜风祛痰中药低剂量组
18.401± 3.584 * △
7.977±1.047 * △
4.570±1.384 * △
1.260±0.210 * △
搜风祛痰中药中剂量组
15.348± 5.340 * △
4.520±0.743 * △
2.440±0.462 * △
1.850±0.180 * △
搜风祛痰中药高剂量组
16.515± 2.765 * △
6.748±1.290 * △
3.210±1.104 * △
1.360±O.170 * △
阿托伐他汀组
15.607± 2.160 * △
4.638±0.773 * △
2.600±1.714 * △
1.710±0.100 * △
注：与空白对照组相比，* P<0.05；与模型组相比，△ P<0.05

4 讨论
动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是冠心病、脑卒中等动脉粥样硬化心
血管疾病的主要病理学基础，并且呈现逐年上升且年轻化的趋势。不稳定斑块
破裂, 继而血栓形成, 导致管腔闭塞是急性冠脉综合征的主要病理学基础，因此
稳定斑块具有重要意义。目前临床上针对 AS 的现有药物如他汀类等，但该类
药物存在肌肉毒性、肝酶异常、糖尿病高发风险等副作用[7]，因此探索稳定斑
块新方法、制定合适的治疗方案对于 AS 的治疗及预后具有重要临床意义。因为脂蛋白在动脉粥样硬化的发生和发展中起着重要的作用，维持最佳的脂质水平是实现理想心血管健康所必需的条件。根据动脉粥样硬化的反应-保留模型，内膜下动脉壁中含有载脂蛋白 B 的脂蛋白颗粒的保留会引发复杂的、适应不良的炎症过程，从而导致AS[8]，随着额外的脂蛋白颗粒被保留在动脉壁随着时间的推移，新生的动脉粥样硬化逐渐扩大，导致形成越来越大和越来越复杂的AS。大数据显示，改善血脂，降低LDL-C,升高HDL-C水平，能够有效延缓AS的进展[9]，对AS的治疗起着重要的作用。
AS根据其症状归属于中医的“胸痹”、“心悸”、“真心痛”之范畴，祖国医学对胸痹临床症状的最早记载，可上溯至先秦的《黄帝内经》一书中，有“脉虚则血虚，血虚则痛”的描述；至汉代，张仲景将“胸痹”首次作为病名提出，并在专著《金匮要略》中详细论述该病性属本虚标实，临床常见为虚实夹杂，还对该病的病因病机进行了独到阐释，为后世对于胸痹的诊疗奠定了基础。老年人脾胃虚弱、嗜食肥甘厚味或情志失调，可影响脾胃运化功能，水湿津液停滞则生痰浊。痰浊日久、年老肾虚或情志内伤等，可致气 血运行不畅，瘀血内生，阻滞心脉。随着病程进一步发展，临床表现为心绞痛剧烈、疼痛持续时间长、舌质紫绛或舌苔厚腻、脉弦滑或弦紧而数等。此时病机为痰浊与瘀血相互影响，不能排出，交结蓄积，日久可化生为毒热）。宫丽鸿教授在总结多年临床经验基础上，认为机体气血津液失调，气虚血瘀，瘀虚交互为病，内生瘀毒；瘀毒生风，内风入络扰心，致使脉络气血亏虚失养更甚，恶性循环而成气血失和风扰心络之证。并进行了大量的实验研究[4, 10]，选用益气搜风中药组成稳斑汤作为治疗用药进行动物实验，探讨稳斑汤防治AS的可行性，由近代中西医学汇通代表医家张锡纯著作《医学衷中参西录》中逐风汤化裁而成。保留具有息风止痉功效的虫类药物，去掉原方中散寒解表除湿等药物，使配方更加温和。方中全蝎熄风止痉，解毒散结；蜈蚣熄风止痉，解毒散结，通络止痛；地龙 清热熄风，平喘通络止痉，共为君药；陈皮、半夏、白术合用，既能燥湿化痰，又可宽胸理气，消痞散结，为臣药；水蛭为虫类化瘀药，破血逐瘀而不伤新血，为佐药，合方共奏搜风祛痰，祛瘀通络之功效。
阿托伐他汀能够调节血脂，具有良好的降脂和抗炎作用[4, 10]，并且他汀类的药物是治疗冠心病常用的药物，在积极有效纠正血脂异常的同时还能够改善冠心病患者的病情，对疾病发展的控制具有积极作用[12, 13]。阿托伐他汀在冠心病患者的治疗中不仅有显著的调脂效果，还具有较高的安全性[14]，因此本实验选择阿托伐他汀作为西药对照药。
本实验结果显示，在使用稳斑汤和阿托伐他汀治疗后，用药组小鼠TC，LDL-C，HDL-C，TG指标都有了明显改善，相比模型组TC，LDL-C，TG均有不同程度的降低，HDL-C在用药后有所升高，说明稳斑汤能够有效降低血脂，在脂质代谢功能障碍引起的AS的发病机制中起主要作用，对AS患者的血管也具有一定的保护作用。
综上所述，稳斑汤可在一定程度上改善动脉粥样硬化小鼠血脂水平，稳定斑块，从而起到对血管的保护作用。

参考文献
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-全文完-