HPLC法测定香砂养胃丸(浓缩丸)中厚朴酚、和厚朴酚的含量.docx

HPLC法测定香砂养胃丸（浓缩丸）中厚朴酚、和厚朴酚的含量

【摘要】目的：利用高效液相色谱法测定香砂养胃丸（浓缩丸）中指标性成分厚朴酚、和厚朴酚的含量。方法：利用高效液相色谱柱（SunfireODSC18(250×4.6mm,5μm)）；流动相甲醇-水-冰醋酸(61∶37∶2),检测波长为294nm；柱温为40℃；流速为1.0ml/min。结果：厚朴酚在0.059～1.106μg范围内线性关系良好(r=0.9997),平均回收率99.03%,RSD为0.8%；和厚朴酚在0.095～1.808μg范围内线性关系良好(r=0.9996),平均回收率为98.95RSD为0.7%。结论：本方法简便、稳定,测定结果准确,重现性好，也可作为该制剂的质量控制的新方法。
【关键词】香砂养胃丸（浓缩丸）厚朴酚和厚朴酚高效液相色谱法含量测定
R927.2B2095-1752（2013）02-0295-02
香砂养胃丸（浓缩丸）有温中和胃的功效[1]。用于胃阳不足、湿阻气滞所致的胃痛、痞满，证见胃痛隐隐、脘闷不舒、呕吐酸水、嘈杂不适、不思饮食、四肢倦怠。该制剂由姜半夏、姜厚朴、白术、木香等多味中药组成。其中姜厚朴为君药,具有燥湿消痰、下气除满的功能[3],具有重要作用。厚朴酚、和厚朴酚以上两种成分在姜厚朴中含量相对较高,容易控制,目前测定姜厚朴的主要指标性成分为，可做为定量指标控制质量。本实验采用高效液相色谱法测定该制剂中厚朴酚、和厚朴酚的含量。
1仪器与试剂试药
高效液相色谱仪：Waterse2695系列四元梯度泵、Waters2998二极管阵列检测器、Waterse2695工作站。超声波清洗器(天津奥赛恩斯仪器有限公司),万分之一电子分析天平(北京天平物华医疗仪器有限公司)，十万分之一电子分析天平(北京天平物华医疗仪器有限公司)。
厚朴酚(中国药品生物制品检定所,批号110729-200412),和厚朴酚(中国药品生物制品检定所,批号110730-201112)。香砂养胃丸（浓缩丸）(河南省济源市济世药业有限公司,批号090613、101210、100316)。
甲醇(色谱纯,天津市康科德科技有限公司,20100623),其余所用试剂均为分析纯。水为超纯水。
2厚朴酚与和厚朴酚的含量测定
2.1色谱条件
色谱柱：SunfireODSC18(250×4.6mm,5μm)；流动相为甲醇-水-冰醋酸(61∶37∶2),检测波长为294nm；柱温为40℃；流速为1.0ml/min；理论塔板数以厚朴酚峰计不低于2000。
2.2对照品溶液的制备
取对照品厚朴酚、和厚朴酚适量，用分析天平精密称定,加入甲醇溶解，分别制成含有厚朴酚0.059mg/ml、和厚朴酚0.095mg/ml的对照品溶液,即得。
2.3供试品溶液的制备
取香砂养胃丸供试品20粒,用力捣碎后充分加以研匀,取出2g,用分析天平精密称定,置于具塞的锥形瓶内,精密加入25ml甲醇试剂,摇匀,密塞,称定重量,利用超声仪提取40min,放冷,再重新称定锥形瓶重量,加入甲醇试剂补足至原重量,摇匀,滤过,取续滤液，即得。
2.4线性范围的考察
分别精密吸取上述制备所得的厚朴酚、和厚朴酚对照品溶液1、2、4、6、8、10、20μl,按上述色谱条件分别测定色谱峰面积。以对照品色谱峰面积为纵坐标,以对照品的含量为横坐标进行数理统计，线性回归。结果表明,在0.059～1.106μg范围内厚朴酚的含量与其色谱峰面积存在线性关系,其回归方程为Y=2339.1253X＋13.5706,r=0.9997；在0.095～1.808μg范围内和厚朴酚含量与其色谱峰面积的呈线性关系,其回归方程为Y=729.7458X＋6.6071,r=0.9996。色谱图见图1。
图1供试品色谱图
2.5精密度试验
分别取相同浓度的和厚朴酚、厚朴酚的对照品溶液,按照上述的色谱条件进行测定,重复进样6次,结果显示厚朴酚的RSD为0.85%(n=6),和厚朴酚的RSD为0.77%(n=6)。结果表明,测定仪器的精密度良好。
2.6稳定性试验
取制备好的香砂养胃丸供试品溶液,分别在配制后0、2、4、8、12、24h按照上述的色谱条件进行测定,结果显示厚朴酚的RSD为0.58%(n=6),和厚朴酚RSD为0.60%(n=6)。结果表明，在24小时内香砂养胃丸供试品溶液具有良好的稳定性。
2.7重复性试验
取同批号的香砂养胃丸样品6份,分别按2.3项下的制备方法制得香砂养胃丸供试品溶液,测定所得厚朴酚的平均含量为1.081mg/g,RSD为0.8%(n=6)；和厚朴酚的平均含量为1.317mg/g,RSD为1.0%。测定结果表明，高效液相色谱法测定含量具有良好的重现性。
2.8加样回收试验
取批号为101210香砂养胃丸捣碎，研细，取处约2.0样品g,精密称定,分别精密加入一定浓度的和厚朴酚、厚朴酚对照品溶液（精密称取和厚朴酚18.32mg、厚朴酚4.86mg,置于10mL的容量瓶中,加入甲醇试剂溶解并定容,摇匀,备用)1.0mL,分别按2.3项下方法制得香砂养胃丸供试品溶液,按照上述的色谱条件分别测定和厚朴酚、厚朴酚的含量。厚朴酚平均回收率为99.03%,RSD为0.8%；和厚朴酚的平均回收率为98.95%,RSD为0.7%。结果见表1、表2。
表1厚朴酚加样回收率试验结果
3讨论
香砂养胃丸（浓缩丸）中姜厚朴的主要成分为厚朴酚、和厚朴酚,其含量测定方法有一阶导数紫外分光光度法、薄层层析-紫外分光光度法[2]、薄层扫描法、HPLC法[3]等。本实验HPLC法,实验中所用方法提取简便,分离度好,结果准确。对3批香砂养胃丸（浓缩丸）的测定结果表明：其含量较稳定,可作为该制剂的质量控制方法。
参考文献
[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.卫生部药品标准中药成方制剂第11册[M].1996.140.
[2]郑虎占,董泽宏,佘靖.中药现代研究与应用[M].北京：学苑出版社,1998.3280.
[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[S].北京：化学工业出版社,2005.176.

-全文完-